候钩藤总碱含量测定及其药理作用的初步研究

目的检测候钩藤的总碱含量,探讨其中枢药理作用,比较其与中药钩藤的差异。方法采用紫外分光光度法检测候钩藤总碱的含量;采用小鼠自主活动实验及戊巴比妥钠诱导催眠实验,观察候钩藤的镇静催眠作用;通过士的宁致小鼠惊厥实验,观察候钩藤的抗惊厥作用。结果紫外分光光度法检测到候钩藤带钩茎枝中总生物碱的含量为0.038%(g/g),钩藤的带钩茎枝的总碱含量为0.207%(g/g)。药理实验结果表明,候钩藤提取物能减少小鼠自主活动次数,增加戊巴比妥钠诱导小鼠入睡个数,并延长小鼠睡眠时间,减少士的宁致小鼠惊厥死亡数。候钩藤高剂量(20 g/kg)组的中枢抑制作用较显著,与钩藤组(15 g/kg)无明显差异(P>0.05),但候钩藤中、低剂量组的药理作用与钩藤组有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论候钩藤总碱含量较钩藤低。候钩藤具有一定程度的镇静催眠和抗惊厥作用,其作用强度与剂量有一定关系。

不同产地钩藤中钩藤碱含量比较研究

目的 比较不同产地的钩藤中主要化学成分钩藤碱的含量.方法 应用HPLC测定15批不同产地钩藤中钩藤碱的含量,以Phenomenex Gemini C1s（4.6 mm×250 mm,5μm）为色谱柱,甲醇-0.01mol/L三乙胺溶液（体积比70∶30）为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm,柱温为25℃.结果 钩藤碱在0.1～1.0μg范围内线性关系良好,回归方程Y=2767.6X-1.0584（r=0.999 9）,加样平均回收率为98.3％,相对标准偏差（RSD）为2.1％;不同产地钩藤中钩藤碱含量有一定差异,以广西融水县产钩藤碱含量最高.结论 不同产地钩藤药材质量参差不齐,在制药及临床用药时应引起重视.

贵州地产钩藤根区与非根区土壤碳、氮、磷分布特征

目的:为探究钩藤产地土壤中碳、氮、磷含量的丰缺现状及主要限制因子,促进钩藤优质、高产的可持续发展。方法:对钩藤产地根区土壤与非根区土壤的碳、氮、磷的含量及相关性进行了研究,并与其周边林地与荒草地土壤碳、氮、磷进行对比研究。结果:钩藤产地土壤根区与非根区产地土壤性状存在不同差异,其中,钩藤基地土壤pH平均值为5.60,符合钩藤生长土壤的酸碱度;钩藤基地根区与非根区土壤有机质为四级;钩藤基地根区与非根区土壤全氮为二级;钩藤根区土壤碱解氮为二级,非根区土壤碱解氮为三级;钩藤基地根区与非根区土壤有效磷为四级;土壤pH值与土壤全氮之间呈极显著正相关性,全氮与土壤有机质、碱解氮、全磷呈极显著正相关性。结论:钩藤基地土壤有效态养分含量比较匮乏,在种植过程应加强人为管理和施肥,而土壤缺磷问题是钩藤种植基地土壤主要限制因素。

钩藤超临界CO_2流体萃取物化学成分的GC-MS分析

采用超临界CO_2流体萃取法提取钩藤的化学成分,应用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对其分析鉴定,共确定了65个化学成分的结构,已鉴定成分相对含量之和占萃取物总量的57.34%,含量较高的成分有棕榈酸(6.34%)和甲氧基肉桂酸乙酯(5.96%)等;该超临界流体萃取物含有多种化学成分,对其进行的分析研究为进一步阐明钩藤的化学物质基础提供了相关依据。

钩藤化学成分研究

目的:研究钩藤Uncaria rhynchophylla(Miq.)Miq.ex Havil茎枝中的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、聚酰胺色谱、反向硅胶柱色谱以及制备型高效液相等多种技术对钩藤茎枝的70%乙醇提取物进行分离纯化,综合运用多种波谱技术鉴定化合物的结构。结果:从钩藤茎枝的70%乙醇提取物中分离得到22个化合物,分别鉴定为:crotonine(1)、7-epi-javaniside(2)、烟酰胺(3)、吲哚-3-甲醛(4)、vincosamide-2′-O-β-D-xylopyranoside-11-O-β-D-glucopyranoside(5)、2′-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→6)-glucopyranosyl]-11-hydroxyvincosamide(6)、isolariciresinol(7)、1,2-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,3-propanediol(8)、threo-3,3′-dimethoxy-4,8′-oxyneoligna-9,4′,7′,9′-tetraol-7(8)-ene(9)、leptolepisol C(10)、leptolepisol D(11)、(+)-lyoniresinol(12)、(-)-lyoniresinol(13)、lyoniresinol-3α-O-β-D-glucopyranoside(14)、(+)-表丁香树脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(15)、香草酸(16)、阿魏酸(17)、对羟基苯甲酸(18)、原儿茶醛(19)、山柰酚(20)、阿魏酸乙酯(21)、2-phenethyl-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(22)。结论:其中,化合物1、7~15、22为首次从茜草科植物中分离得到,化合物2、3、5、6、21为首次从钩藤属植物中分离得到。

广西钩藤栽培技术

钩藤是我国常用的大宗中药材,有很高的药用价值高,在广西的有较大面积的栽培。文章从钩藤的植物形态特征、生长特性、栽培技术、病虫害防治及采收与加工等多个方面进行了系统论述,旨在为其生产提供技术指导,推动广西钩藤产业的发展。

一测多评法测定钩藤中7种生物碱类成分的含量

目的:建立测定钩藤中7种生物碱类成分含量的一测多评方法,探讨其可行性。方法:以钩藤碱为内参物,建立去氢钩藤碱、异钩藤碱、异去氢钩藤碱、缝籽嗪甲醚、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱6种生物碱类成分的相对校正因子;采用外标法验证一测多评法的可行性。结果:建立了一测多评法同时测定钩藤中7种成分的含量,去氢钩藤碱、异钩藤碱、异去氢钩藤碱、缝籽嗪甲醚、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱的相对校正因子分别为0.959、1.002、0.973、0.663、0.658和0.790。外标法与一测多评法定量结果无显著差异。结论:建立的一测多评法快速、准确、耐用性好,可用于该品种钩藤中7种生物碱类成分的定量分析,为建立简便、可靠的钩藤质量控制方法提供了基础。

安徽植物增补及地理新分布Ⅱ

本文第二次增补《安徽植物志》未记入的植物２２种５变种。其中２０种３变种为安徽地理新分布，３属（白屈菜属、离子芥属和石莲属）为安徽地理新分布属。本文所引用的植物标本，全部收藏于安微大学资源植物标本室。

钩藤发根的高效诱导和最适培养基的筛选

目的:建立钩藤发根的高效诱导体系,筛选最适于钩藤发根生长和活性成分积累的培养基。方法:用发根农杆菌C58C1(pRiA4)浸染钩藤无菌的茎、嫩叶和老叶,探究C58C1对不同外植体的发根诱导率;用6种植物培养基(1/2MS、MS、N6、White、B5、WPM)培养钩藤发根,HPLC测定钩藤碱和异钩藤的含量。结果:农杆菌C58C1对3种外植体的诱导率都超过了80%,嫩叶的最高达到了91.8%;PCR检测表明农杆菌中rolB和rolC基因均已整合入钩藤发根的基因组;钩藤发根能合成钩藤碱和异钩藤碱2种活性成分,且钩藤碱占优势;B5培养基最适于钩藤发根的生长和2种生物碱的积累,钩藤碱与异钩藤碱产量最高,100 mL培养基分别可积累0.506 mg和0.160 mg;1/2MS是次优培养基。结论:该研究建立了钩藤发根的高效诱导体系和最适培养体系,为钩藤活性成分的大量生产和农杆菌介导的发根遗传转化体系研究奠定了技术基础。

基于网络药理学、分子对接与实验验证探究钩藤治疗热性惊厥的作用机制

目的通过网络药理学与分子对接技术探究钩藤Uncaria rhynchophylla治疗热性惊厥的作用机制,并进行实验验证。方法通过TCMSP与BATMAN-TCM数据库检索钩藤活性成分及相关作用靶点,用TCMSP、PubChem数据库和SwissADME平台对活性成分进行筛选;通过Gene Cards数据库和OMIM数据库提取热性惊厥疾病靶点,经Uniprot数据库进行蛋白-基因symbol转换;药物靶点与疾病靶点取交集绘制Venn图,通过STRING数据库绘制蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,使用Cytoscape 3.7.2软件构建“中药-活性成分-关键靶点-疾病”网络,采用DAVID v6.8在线分析平台对关键靶点进行基因本体(gene ontology,GO)功能及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,利用Cytoscape 3.7.2软件将富集分析结果可视化并将分析所得关键化合物及靶点进行分子对接。通过免疫组化、Western blotting及脑片膜片钳技术对钩藤的作用机制进行验证。结果得到钩藤活性成分29个,活性成分对应靶点297个,活性成分靶点与疾病靶点取交集得到关键靶点81个。KEGG通路富集分析结果显示,钩藤治疗热性惊厥主要作用于神经元配体-受体相互作用、尼古丁成瘾、环磷酸腺苷信号通路。GO功能富集分析结果显示,尼古丁反应、质膜和细胞外配体门控离子通道活性显著性最大。免疫组化及Western blotting结果显示,钩藤显著抑制热性惊厥模型乳鼠脑组织中N-甲基-D-天冬氨酸受体2A(N-methyl-D-aspartic acid receptor 2A,NMDAR2A)、N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(N-methyl-D-aspartic acid receptor 2B,NMDAR2B)的表达(P<0.05、0.01、0.001)。脑片膜片钳实验结果显示,钩藤对海马CA1区锥体神经元NMDA受体诱发兴奋性突触后电流(NMDA receptor evoked excitatory postsynaptic currents,e EPSCNMDA)具有抑制作用。结论通过网络药理学及分子对接技术发现了钩藤治疗热性惊厥的活性成分及作用靶点,通过免疫组化、Western blotting及膜片钳技术证实了钩藤对NMDAR的抑制作用,为进一步研究钩藤治疗热性惊厥的作用机制、药物研发等提供理论基础。

中药减压提取沸点与饱和蒸气压关系影响因素研究

目的研究减压提取工艺条件下水和不同体积分数乙醇沸点、饱和蒸气压的相关性,并比较不同药材(穿心莲、红花、白芷、钩藤、黄芩、丹参、陈皮)的加入和不同粒径药材的加入对饱和蒸气压的影响。方法采用理论计算和仪器实验测定结合方法,获取不同沸点下和饱和蒸气压的理论值及实测值,并进行统计分析。结果得到饱和蒸气压与溶剂乙醇体积分数和沸点之间的回归方程P=76.467 1+0.035 2 T2+1.201 0TV-30.749 4V2-3.123 9T-14.966 7V;实验条件下,水和不同体积分数乙醇纯溶剂饱和蒸气压理论值较实测值小;加入药材后饱和蒸气压实测值比纯溶剂实测值增大;药材粉碎后,提取温度达到一定温度后饱和蒸气压会降低。结论药材的加入和粉碎对溶剂饱和蒸气压有影响,但其变化范围小。

钩藤叶化学成分研究

目的研究钩藤Uncaria rhynchophylla叶的化学成分及抗氧化活性。方法采用多种色谱技术对其进行分离纯化,应用1H-NMR、13C-NMR、MS、HR-MS等波谱学方法进行结构鉴定;利用DPPH法进行抗氧化活性测定。结果从钩藤叶95%乙醇提取物中分离得到17个化合物,分别鉴定为18,19-hydroxyvincosamide(1)、α-生育酚(2)、α-tocospiro A(3)、二氢猕猴桃内酯(4)、乌苏酸内酯(5)、3,4-dehydrotheaspirone(6)、chakyunglupulin A(7)、乌苏酸(8)、原儿茶酸(9)、槲皮素(10)、表儿茶素(11)、绿原酸乙酯(12)、槲皮素-3-O-洋槐糖苷(13)、芦丁(14)、咖啡酸甲酯(15)、strictosamide(16)、vincosamide(17);其中化合物10、11、13~15抗氧化活性IC50值分别为7.52、8.21、8.14、2.13、5.35μmol/L,优于阳性药维生素E(IC50值为9.53μmol/L)。结论化合物1为新化合物,命名为喜果苷A;化合物2~7、9、12、13、15为首次从该属植物中分离得到;并且化合物10、11、13~15抗氧化活性良好。

HPLC测定黔产钩藤不同部位钩藤碱和异钩藤碱的含量

目的 HPLC测定黔产钩藤不同部位中钩藤碱和异钩藤碱的含量,并比较其差异。方法以钩藤碱、异钩藤碱为对照品,采用CAPCELL PAK C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%三乙胺水溶液(1%磷酸调pH=9)为流动相,流速1mL·min-1,检测波长245nm,柱温30℃,进样量10μL。结果钩藤碱与异钩藤碱分离良好,线性、重复性以及回收率均符合要求,钩藤不同部位中的含量存在差异,由高到低依次为皮>茎>带钩茎枝>叶,而茎薄壁组织与木质部未检测到钩藤碱与异钩藤碱。结论该含量测定结果为钩藤资源的充分利用提供了科学依据。

钩藤人参合用对高血压合并心衰大鼠模型的影响

目的研究钩藤人参合用对高血压合并心衰(HCHF)模型大鼠的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、卡托普利组(0.014 3 g/kg)和钩藤人参合用高(钩藤0.9 g/kg+人参1.8 g/kg)、中(钩藤0.45 g/kg+人参0.9 g/kg),低(钩藤0.225 g/kg+人参0.45 g/kg)剂量组。采用腹主动脉缩窄术制作大鼠HCHF模型,5周后通过大鼠尾动脉压监测仪评估造模是否成功,其中假手术组只分离腹主动脉,不结扎。酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清B型脑钠肽(BNP)、血管紧张素II (Ang II)、血管紧张素1型受体(AT1)、β1肾上腺素受体(β1-AR)水平。取心脏测定心脏质量指数(HWI),HE染色法观察大鼠心肌纤维排列状况。结果造模第5周后手术各组收缩压较对照组显著升高(P<0.01),验证模型成功;给药第2、4周,钩藤人参合用中、高剂量组收缩压较模型组显著下降(P<0.05、0.01)。与模型组比较,钩藤人参合用中、高剂量组能显著降低心衰大鼠的HWI以及AT1、Ang II、BNP的浓度,显著升高β1-AR浓度(P<0.05、0.01),且呈剂量相关性。光镜下观察模型组心肌结构紊乱,心肌细胞排列呈波浪状,心肌纤维断裂严重;卡托普利组和人参钩藤高剂量组可见心肌结构排列较均匀,心肌细胞形态正常,心肌纤维略有断裂。结论钩藤人参合用对于降低大鼠血压,改善大鼠心衰症状效果显著,且呈剂量相关性,其中高剂量与卡托普利组效果相当。

基于UHPLC-MS/MS的钩藤生物碱在大鼠体内的组织分布研究

目的建立超高效液相串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLCMS/MS)法测定大鼠不同组织中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱与缝籽嗪甲醚的含量,并用于钩藤的组织分布研究。方法大鼠ig钩藤水煎液后,分别于0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、8、12 h取心、肝、脾、肺、肾、脑组织。以长春胺为内标,采用液液萃取法提取后进行样本检测。结果建立的UHPLC-MS/MS方法中,7个生物碱在不同的组织中最低定量限范围为0.05~1.00 ng,响应与浓度的相关性R≥0.991。方法学考察中的专属性、基质效应、回收率、精密度与准确度以及稳定性等方法学考察均满足要求。各个组织中均为异钩藤碱含量最高,其次为去氢钩藤碱;异钩藤碱与去氢钩藤碱含量均远高于其对应的异构体钩藤碱与异去氢钩藤碱;而3个四环单萜吲哚生物碱(毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱、缝籽嗪甲醚)在各组织中均含量最低。比较不同组织中生物碱成分含量可以发现,7个生物碱均在肝脏中含量最高,其次为肾脏与肺部,推测钩藤生物碱在肝脏与肾脏的蓄积是因为两者分别是生物碱成分的主要代谢部位与排泄部位。结论建立的方法灵敏度高、准确性好、专属性好,适用于大鼠不同组织中钩藤生物碱的组织分布研究。

钩藤化学成分研究

目的研究钩藤的化学成分。方法运用溶剂萃取、硅胶柱色谱、高效液相色谱等方法对钩藤进行分离和纯化,并采用NMR、MS等波谱方法鉴定其化学结构。结果从钩藤中分离得到9个化合物,分别鉴定为C-藜芦酰乙二醇(1);2,3-二羟基-1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙酮(2);4-羟基-3,5-二甲氧基-苯酚(3);rel-5-(3S,8S-dihydroxy-1R,5S-dimethyl-7-oxa-6-oxobicyclo[3,2,1]-oct-8-yl)-3-methyl-2Z,4E-pentadienoic acid(4);4-O-β-D-glucopyranosyl sinapic acid methyl ester(5);儿茶素(6);槲皮素(7);去氢假虎刺酮(8);3-hydroxy-β-damascone(9)。结论化合物1~6、8~9为首次从钩藤中分离得到。