血清粗纤维调节素ELISA的建立及初步应用

以提纯的人胎盘粗纤维调节素 (Un)及兔抗人Un IgG ,建立血清Un的竞争抑制ELISA标准曲线 ,并检测了 6 0名正常人和 12 4例肝病患者。结果采用棋盘试验确定包被Un及其抗体的浓度 ,表明该法灵敏度为 5 μg/L ,回收率为 96 6 %～10 8 3% ,批内 CV为 7 5 % ,批间CV 为 7 9%。 6 0名正常成人血清Un含量为 71 14± 2 9 6 0 μg/L ,参考值范围为 11～ 130μg/L,慢性肝病患者Un含量显著高于正常人。提示此法稳定、可靠、特异 ,基本符合临床使用要求 ,可用于慢性肝病的诊断。

肝病患者血清HA、PⅢP和Un水平与肝功能、肝脏B超检查结果的关系探讨

目的:探讨肝病患者血清透明质酸(HA)、Ⅱ型前胶原肽(PⅢP)、粗纤维调节素(Un)水平与肝功能、肝脏B超结果的关系,评价其临床应用价值。方法:199例各型肝病,用RIA法检测血清HA、PⅢP,用ELISA法检测血清Un,同时检测肝功能(ALT、TBil、Glb)、肝脏B超,并进行相关分析。结果:慢性肝病各组的HA、PⅢP和Un均高于急性肝炎组(P<0.01,P<0.05),各种慢性肝病组间差异有显著性意义,以活动性肝硬化为最明显。PⅢP、Un与ALT相关(P<0.05),HA与ALT无相关(P>0.05),3者与Glb均相关(P<0.01)。HA、PⅢP和Un与TBil均不相关(P>0.05)。B超异常组的HA、PⅢP和Un水平高于B超正常组(P<0.05,P<0.01)。结论:HA、PⅢP和Un均是诊断肝纤维化的良好指标,但PⅢP、Un与肝炎活动有一定关系,在临床诊断时应与肝功能、B超检查结果综合分析。

粗纤维调节素对小鼠成纤维细胞Ⅰ型前胶原基因表达的影响

为了确定粗纤维调节素（Ｕｎ） 是否具有促进成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的作用， 我们采用地高辛原位杂交和斑点杂交技术， 观察了Ｕｎ 对小鼠成纤维细胞（ＮＩＨ／３Ｔ３） Ⅰ型前胶原ｍ ＲＮＡ转录的影响； 结果发现Ｕｎ 对体外培养的３Ｔ３ 细胞Ⅰ型前胶原基因转录具有促进作用； 提示Ｕｎ 不仅作为一种细胞外基质而存在， 并且还有促进胶原合成的功能。

血清粗纤维调节素检测对诊断肝纤维化的临床价值

我们在提纯人胎盘粗纤维调节素(Un)及制备其抗血清的基础上,建立了竞争抑制ELISA法,检测143例各种肝病、30例非肝疾病和60名正常人血清Un水平,并与肝活检病理及血清Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)、透明质酸(HA)和层粘连蛋白(Ln)水平进行比较。结果各肝病组血清Un含量均显著高于正常对照及非肝疾病组(P值均<0.01):慢性肝炎各期间均有显著性差异(P值均<0.01);血清Un水产与慢性肝炎肝组织学炎症活动度(r=0.52,P<0.05)及纤维化程度(r=0.78,P<0.001)均呈显著正相关,与血清PⅢNP、LN、HA水平均不相关。若以血清Un≥200μg/L为判断肝纤维化的界值,其敏感性为71.43％,特异性为78.9％,诊断准确率为73.03％。

粗纤维调节素的提纯和抗血清制备

采用分级盐析、离子梯度层析、凝胶过滤等步骤从人胎盘组织中提纯了粗纤维调节素（Ｕｎｄｕｌｉｎ，Ｕｎ），经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证实为一纯蛋白。以纯化的Ｕｎ免疫新西兰大白兔获得高效价抗血清．且与Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白均无明显交叉反应。制备的Ｕｎ及其抗血清可用于血清ＥＬＩＳＡ检测及免疫组化研究。