外周血miR-143、miR-33a表达与膀胱癌患者临床预后的相关性

【目的】探讨外周血miR-143、miR-33a表达与膀胱癌患者临床预后的相关性。【方法】选取2017年5月至2021年4月本院收治的60例膀胱癌患者(观察组),另选取同期体检的60例健康志愿者作为对照组。比较两组研究对象外周血miR-143、miR-33a表达水平及不同病理特征患者外周血miR-143、miR-33a表达水平,评价外周血miR-143、miR-33a对膀胱癌的诊断价值,比较外周血miR-143、miR-33a不同表达膀胱癌患者生存曲线,分析外周血miR-143、miR-33a表达与膀胱癌患者死亡风险的关系。【结果】观察组患者外周血miR-143、miR-33a表达水平低于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。不同临床分期、组织分化程度、初发与复发及有无远处转移患者外周血miR-143、miR-33a表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。外周血miR-143、miR-33a联合诊断膀胱癌的曲线下面积为0.922,显著高于miR-143、miR-33a单一指标(P<0.05)。外周血miR-143、miR-33a低表达患者的术后3年生存率分别低于外周血miR-143、miR-33a高表达患者(P<0.05)。外周血miR-143、miR-33a低表达患者术后3年死亡风险是高表达患者的4.550倍、5.223倍(P<0.05)。【结论】膀胱癌患者miR-143、miR-33a表达下调,与病理特征密切相关,检测其表达水平有助于评估患者预后情况,具有较高临床价值。

沉默Caveolin-1基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨沉默 Caveolin-1（Cav-1）基因对人膀胱癌细胞株5637增殖和凋亡的影响。方法通过siRNA转染人膀胱癌细胞株5637（沉默组）,以转染 FAM-siRNA为阴性对照组,未转染细胞为正常对照组。Re-al-time PCR法检测Cav-1基因沉默的效率,CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各种细胞的凋亡情况。结果 siRNA转染可显著降低人膀胱癌细胞株5637中 Cav-1 mRNA 的表达水平。沉默组细胞的增强能力明显减低,而细胞凋亡率明显升高（均P＜ 0.05）。结论沉默Cav-1基因可抑制人膀胱癌细胞株5637的细胞增殖并促进细胞凋亡。

EphA 2在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

[目的]探讨上皮细胞激酶2（EphA2）在膀胱移行细胞癌（Bladder transitional cell carcinoma BTCC ）中的表达及意义。[方法]采用Western blotting 和 RT-PCR技术测定20例BTCC组织和10例正常膀胱黏膜EphA2蛋白和 EphA2 mRNA的表达。[结果]EphA2蛋白在BTCC中的表达明显高于正常膀胱黏膜（ P ＜0．01），在BTCC低分化组表达强于高分化组；EphA2 mRNA在BTCC中的表达高于正常膀胱黏膜（ P＜0．01），与BTCC的分化程度无关（ P＝0．295）。[结论]EphA2将成为判定膀胱癌恶性程度的指标，EphA2 mRNA表达强度与EphA2蛋白表达强度不完全一致。提示转录后的调控机制干预了 BTCC中EphA2的表达。

冬凌草甲素对人膀胱癌T24和5637细胞杀伤作用的研究

【目的】探讨冬凌草甲素对不同恶性程度人膀胱癌细胞的抑制作用。【方法】以丝裂霉素为对照，用不同浓度的冬凌草甲素处理人膀胱癌细胞株T24（浸润性，G3）和5637（非浸润性，G2）后，通过MTT法检测细胞增殖抑制率并计算IC50值，应用倒置显微镜观察细胞形态及其抑制情况，采用荧光染色法观察细胞核及细胞凋亡情况。【结果】冬凌草甲素和丝裂霉素对T24和5637细胞均有抑制增殖和杀伤作用，并呈现时间-效应和浓度-效应关系。分别作用T24、5637细胞株12h和24h后，64μmol／L冬凌草甲素的抑制增殖和杀伤效果均要显著优于150μmol／L丝裂霉素的效果。低恶性细胞5637较高恶性T24对冬凌草甲素和丝裂霉素处理更敏感。【结论】冬凌草甲素能通过诱导T24和5637细胞凋亡，起到杀伤和抑制增殖的效果，且较丝裂霉素起效快，有进一步研究的价值。

角蛋白7和p53蛋白与膀胱癌临床病理的相关性及预测复发风险的价值

【目的】探讨角蛋白7(KRT7)和p53蛋白与膀胱癌临床病理的相关性及其在复发风险预测中的价值。【方法】采用免疫组织化学染色法测定72例膀胱癌患者手术后癌组织与癌旁正常组织标本中KRT7、p53蛋白的表达情况,比较癌组织和癌旁组织中KRT7、p53蛋白阳性检出率,对比不同临床病理特征患者癌组织中KRT7、p53蛋白阳性检出率,观察KRT7、p53蛋白不同表达膀胱癌患者的3年复发情况。【结果】癌组织KRT7阳性检出率显著低于癌旁组织,p53蛋白阳性检出率显著高于癌旁组织,且差异有统计学意义(P<0.05);有被膜浸润、中低分化、淋巴结转移患者KRT7阴性检出率较高,p53蛋白阳性检出率较高,且差异有统计学意义(P<0.05);KRT7阴性、p53蛋白阳性膀胱癌患者3年复发率分别为46.15%、50.00%,均高于KRT7阳性、p53蛋白阴性患者的12.12%、15.00%,且差异均有统计学意义(Log-Rank=17.553、12.281,P<0.05)。【结论】膀胱癌患者癌组织中p53蛋白呈高表达,KRT7呈低表达,其表达水平与组织分化程度、淋巴结转移以及被膜浸润密切相关。

MMP-9、CD34在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及相关性研究

【目的】探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、人白细胞分化抗原-34（CD34）在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义。【方法】应用免疫组织化学法（S-P法），检测60例膀胱尿路上皮癌组织及15例正常膀胱组织中MMP-9表达及CD34标记的肿瘤微血管密度（MVD）值。【结果】①膀胱尿路上皮癌组织中MMP-9的阳性表达率为58．33％（35/60），CD34标记M VD平均值为20．91±8．83，明显高于正常膀胱组织的6．67％（1/15）和9．49±2．73，且两组相比差异均有显著性（P ＜0．01）。②在膀胱尿路上皮癌组织中MMP-9的阳性表达率和CD34标记M VD平均值与肿瘤组织学分化程度，浸润深度（临床分期），肿瘤大小有相关（P＜0．05），与单发或多发、年龄、性别无关（ P＞0．05）。③在MMP-9的阳性表达的病例中，CD34标记MVD值随MMP-9表达强度的增加而增加，两者呈明显的正相关（P＜0．01）。【结论】MMP-9的表达及CD34标记M VD值在膀胱尿路上皮癌中的表达明显升高，可作为判断膀胱尿路上皮癌恶性程度及预后的重要参考指标。

肿瘤型 M2丙酮酸激酶在膀胱癌中的表达及临床意义

【目的】探讨肿瘤型M2丙酮酸激酶（TumortypeM2-pyruvatekinase，TUM2-PK）在膀胱癌中的表达及临床意义分析。【方法】采取2009年1月至2012年1月，221例膀胱癌患者和220例健康正常人的血清标本，应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）定量检测标本的TUM2-PK水平，研究试验组与对照组，以及病理分型与TUM2-PK关系。【结果】膀胱癌患者血清中TUM2-PK的含量明显高于正常对照组[（39．4±3．5）u/mLvs（7．3±2．1）u/mL（P＜0．05）]；同时根据膀胱癌病理分级TUM2-PK的含量存在一定差异：T1期（32．1±6．1）u/mL，T2期（34．1±4．3）u/mL，T3期（68．2±5．9）u/mL。T1期膀胱癌与T2期膀胱癌TUM2-PK含量无明显差异，但T3期较T1、T2明显增高。【结论】监测血清中TUM2-PK含量有助于膀胱肿瘤的早期诊断，同时根据TUM2-PK的含量亦可作为监测肿瘤及疾病分级的重要手段之一。

Src蛋白在膀胱移行细胞癌上的表达及其意义

[目的]探讨Src蛋白在膀胱移行细胞癌（BTCC）组织中的表达及其意义。[方法]采取 HE染色和半定量RT-PCR检测c-Src基因在BTCC、癌旁组织及正常膀胱组织中的表达。[结果]BTCC（分浅表性膀胱癌和肌层浸润性膀胱癌两组）组织中c-Src基因在mRNA表达水平上明显增高，而在癌旁组织及正常膀胱组织中表达较低。c-Src mRNA的表达水平与BTCC患者肿瘤临床分期、病理分级，以及肿瘤有无复发具有相关性；其表达的强度与膀胱肿瘤的分化和分期密切相关，分化越低、临床分期越晚以及复发患者，其过表达越明显。[结论]c-Src的过表达或高表达与BTCC的侵袭、复发和转移密切相关。

miR-143在膀胱癌组织中的表达及意义

【目的】探讨miR-143在膀胱癌组织中的作用及机制，为膀胱癌的临床诊治提供参考。【方法】选用体外培养的T24细胞株作为研究对象，按照处理方式分为si-COX-2转染组、miRNA-143转染组、阴性对照组、空白对照组。Transwell趋化实验和3 H-thymidine 法检测 T24细胞增殖和迁移能力，免疫印迹法检测COX-2蛋白表达变化。【结果】miR-143和si-COX-2转染T24细胞48～72 h后，细胞增殖能力较正常T24细胞相比下降36％～49％（ P ＜0．01），迁移能力下降81％。免疫印迹结果表明，si-COX-2或miR-143转染的T24细胞内源性COX-2表达水平显著减少至正常T24细胞表达水平的0．39和0．31倍（ P＜0．01）。【结论】miR-143可能通过COX-2通路发挥对膀胱癌 T24细胞的增殖和侵袭的抑制作用并抑制COX-2的表达。提示miR-143可作为膀胱癌的治疗候选药物。

MLF1IP在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其临床意义

【目的】探讨人髓细胞白血病因子1相互作用蛋白基因(MLF1IP)在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其临床意义。【方法】选取2015年2月至2017年2月在本院行手术治疗的52例膀胱尿路上皮癌患者,取手术切除的癌组织和癌旁正常组织,并将其分为膀胱尿路上皮癌组(观察组)和癌旁组(对照组)。检测所有研究对象患者癌旁组织及癌组织中MLF1IP mRNA、MLF1IP表达水平,分析MLF1IP mRNA表达水平与膀胱尿路上皮癌临床病理特征的关系,评估MLF1IP mRNA表达水平对膀胱尿路上皮癌患者预后的影响,分析影响膀胱尿路上皮癌患者预后的相关因素。【结果】观察组MLF1IP阳性表达率、MLF1IP mRNA及MLF1IP水平均显著高于对照组(P<0.05)。膀胱尿路上皮癌患者MLF1IP mRNA表达与膀胱尿路上皮癌病理分级及临床分期有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径无关(P>0.05)。MLF1IP mRNA高表达患者术后3年总生存率低于MLF1IP mRNA低表达患者(P<0.05)。MLF1IP mRNA高表达和病理分级是影响膀胱尿路上皮癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。【结论】膀胱尿路上皮癌患者MLF1IP高表达,与患者病理分级、临床分期及预后有关,对评估患者预后具有重要意义。

miR-202在膀胱癌细胞中的表达水平及其对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

【目的】探讨miR-202在膀胱癌细胞中的表达水平及其对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。【方法】实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测膀胱细胞中miR-202的相对表达水平;转染技术将miR-202和miR-NC质粒转染至UM-UC-3细胞中,并设置为miR-202组和NC组。细胞增殖实验、细胞侵袭实验和凋亡实验分别检测两组细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡情况,比较两组裸鼠移植瘤体积和重量,Western blot实验检测两组细胞中PIK3CA蛋白的表达情况。【结果】膀胱癌细胞中miR-202的相对表达水平分别低于正常膀胱上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-202组与NC组相比细胞的OD值、迁移和发生侵袭的细胞数降低,凋亡率增加,差异有统计学意义(均P<0.05)。miR-202组移植瘤的体积和重量均低于NC组,差异有统计学意义。miR-202组PIK3CA蛋白的表达低于NC组,差异有统计学意义。【结论】miR-202可能通过抑制PIK3CA蛋白的表达从而抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡。

大黄素对膀胱癌细胞BIU87增殖和凋亡的影响

目的探讨大黄素对人膀胱癌细胞BIU87生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法采用甲基噻唑（MTT）比色法测定不同浓度大黄素在不同作用时间内对在体外培养BIU87细胞增殖的影响，同时应用流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化，免疫组化SP法检测细胞内bcl-2和caspase-3蛋白的表达水平。结果在一定范围内，大黄素的浓度（10—80μg/ml）越高、作用时间越长，对肿瘤细胞生长的抑制作用越强，凋亡率也越高[分别为（9．84±21．13）％、（18．32±22．14）％、（29．73±1．42）％、（42．13±2．36）％]，与对照组[（2．01±20．92）％]相比，差异均有统计学意义（F=531．85，P〈0．01）；大黄素可在G0／G1期阻滞人膀胱癌细胞BIU87的增殖，使S期细胞比率降低[分别为（33．27±1．26）％、（29．17±1．39）％、（16．94±0．86）％、（10．85±1．47）％]，与对照组[（35．45±0．38）％]相比，差异均有统计学意义（F=524．64，P〈0．01）。大黄素作用48h后，BIU87细胞中bel-2蛋白表达下降（灰度值分别为122．65±2．12、131．37±1．62、134．81±1．36、145．55±2．01），easpase-3蛋白表达上调（灰度值分别为135．26±1．41、130．22±1．74、126．11±1．77、118．36±1．53），呈浓度依赖性，与对照组（灰度值分别为108．42±3．73、149．35±1．82）相比，差异均有统计学意义（F=216．23、224．83，P〈0．01）。结论大黄素在体外能抑制人膀胱癌细胞株BIU87的生长、诱导细胞凋亡，其作用与下调bcl-2蛋白表达、上调easpase一3蛋白表达和阻滞细胞周期于Go／G．期有关。

大黄素对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的探讨大黄素对人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用，并探讨其作用机制。方法建立人膀胱癌细胞株BIU87裸鼠移植瘤模型，并随机分为4组：对照组、大黄素组、Z—VAD—FMK组、大黄素＋Z—VAD—FMK组。观察各组裸鼠移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线，4周后处死全部裸鼠，取出肿瘤组织，称瘤质量；HE染色观察肿瘤细胞形态，流式细胞分析仪细胞凋亡，RT-PCR检测各组肿瘤组织中AIF和EndoGmRNA的表达，Western blot检测各组肿瘤组织中AIF和EndoG蛋白的表达。结果大黄素组肿瘤生长速度明显慢于其他3组，大黄素组[（0．41±0．05）g]和大黄素＋Z-VAD—FMK组[（0．69±0．07）g]肿瘤较其他2组[（1．08±0．13、1．04±0．09）g]轻，差异有统计学意义（F=90．56、27．49，P〈0．01），大黄素组与大黄素＋Z—VAD—FMK组相比差异也有统计学意义（t=10．01，P〈0．01）。流式细胞仪检测凋亡显示大黄素组细胞凋亡率[（42．71±2．69）％]明显高于大黄素＋Z-VAD—FMK组[（34．38±1．73）％]（t=6．38，P〈0．01）。RT—PCR和Western blot结果显示，大黄素＋Z—VAD—FMK组中AIF和EndoG的表达水平显著上调，与其他各组比较[（1．65±0．12）vs（1．24±0．08）、（0．51±0．07）、（0．48±0．04）；（2．12±0．16）vs（1．75±0．13）、（0．57±0．06）、（0．59±0．07）；（2．42±0．13）vs（1．73±0．11）、（0．78±0．07）;（0．75±0．08）；（3．13±0．25）vs（2．15±0．18）、（0．85±0．09）、（0．81±0．14）]，差异均有统计学意义（F=303．22，319．32，409．38，258．53，P〈0．01）。结论大黄素能够明显抑制人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长，其机制可能部分与大黄素可上调膀胱癌细胞BIU87中AIF和EndoG的表达，通过启动非Caspase依赖途径诱导细胞凋亡有关。

LRIG1基因表达下调对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）基因表达下调后对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 利用LRIG1 siRNA转染人膀胱癌T24细胞,并应用RT-PCR和Western blot技术检测转染LRIG1 siRNA后膀胱癌T24细胞中LRIG1的表达.利用CCK 8试剂盒和流式细胞术分别检测下调LRIG1基因的表达对T24细胞增殖和凋亡的影响,进一步应用RT-PCR和Western blot检测与增殖和凋亡相关的Bax和Bcl-2基因的表达.结果 转染LRIG1 siRNA后,LRIG1基因在膀胱癌124细胞中的表达明显下调（P＜0.05）.与未处理组和对照组相比,实验组在转染24、48、72、96 h后T24细胞的增殖率均显著高于未处理组和对照组（96h：2.621 ±0.059 vs 2.145 ±0.066,2.201 ±0.064;F=51.049,P=0.000）.转染48 h后,实验组细胞早期凋亡率为（5.713 ±0.761）％,显著低于未处理组和对照组的早期凋亡率[（8.412 ±0.848）％,（8.631 ±0.715）％;F=13.137,P=0.006].此外,LRIG1表达的下调能引起Bax基因表达的降低（P＜0.05）,Bcl-2基因表达的升高（P＜0.05）.结论 LRIG1基因可能在膀胱癌T24细胞的增殖和凋亡中发挥重要作用.