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植物V-H^+-ATP酶适应逆境的分子调控机理 被引量:7
1
作者 张玉红 安志刚 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期245-252,共8页
在植物细胞内膜系统中,有一种重要的质子泵──V-H+-ATP酶(V-type-H+-ATPase)。V-H+-ATP酶通过水解ATP获取能量,跨膜转移H+形成膜内外电化学梯度,为其他物质转运系统提供电化学势能,是保持溶质平衡等植物在正常生长条件下所必不可缺的... 在植物细胞内膜系统中,有一种重要的质子泵──V-H+-ATP酶(V-type-H+-ATPase)。V-H+-ATP酶通过水解ATP获取能量,跨膜转移H+形成膜内外电化学梯度,为其他物质转运系统提供电化学势能,是保持溶质平衡等植物在正常生长条件下所必不可缺的生物化学过程。在胁迫条件下,如盐、干旱、冷冻以及土壤中的超量重金属等,植物细胞的存活能力在很大程度上取决于V-H+-ATP酶的活性,而调节基因的表达与活性是V-H+-ATP酶适应环境的基础。作为植物细胞内膜系统中最主要的H+质子泵之一,本研究就V-H+-ATP酶适应外界环境的分子调节机理作以综述,以期为盐碱地的生物治理和分子生物学的应用提供讨论基础。 展开更多
关键词 v-h+-ATP酶 质子泵 基因表达调控 胁迫
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食管癌中CD_(44)V_5和nm23-H_1基因表达及意义 被引量:2
2
作者 寇炜 吴静 严祥 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2003年第3期218-221,252,共5页
目的 :探讨CD4 4V5,nm2 3 H1 的基因产物表达与食管癌临床病理及预后的关系。方法 :应用免疫组织化学S P法对 85例食管癌标本进行CD4 4V5和Nm2 3 H1 的基因产物测定 ,并对其中 50例患者术后随访 3年。结果 :①CD4 4V5在食管癌中的阳性... 目的 :探讨CD4 4V5,nm2 3 H1 的基因产物表达与食管癌临床病理及预后的关系。方法 :应用免疫组织化学S P法对 85例食管癌标本进行CD4 4V5和Nm2 3 H1 的基因产物测定 ,并对其中 50例患者术后随访 3年。结果 :①CD4 4V5在食管癌中的阳性表达率为 61 .2 % ,Nm2 3 H1 在食管癌中的阳性表达率为 57.6 %。②在食管癌中CD4 4V5的过表达和Nm2 3 H1 的低表达与食管癌的浸润深度、分化程度、淋巴结转移、临床TNM分期及预后相关 (P<0 .0 5) ,而与食管癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、病理类型均无相关性 (P >0 .0 5)。③在食管癌中 ,CD4 4V5和Nm2 3 H1 的表达呈负相关 (r=- 0 439,P <0 .0 1 ) ,且CD4 4V5的过表达伴有Nm2 3 H1 低表达者发生淋巴结转移的可能性大 (P <0 .0 1 )。结论 :CD4 4V5和Nm2 3 H1 在食管癌中的不同表达与食管癌的淋巴结转移及预后显著相关。CD4 4V5、Nm2 3 H1 的不同表达在食管癌淋巴结转移中可能起协同作用 。 展开更多
关键词 食管癌 CD44v5 NM23-h1 基因表达 淋巴结转移 预后
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指状青霉V-ATP酶H亚基蛋白的功能
3
作者 闫等 彭丽桃 +1 位作者 李杰 杨书珍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第6期189-194,共6页
目的:通过基因干扰和过表达技术,研究V-ATP酶H亚基(V-ATPase membrane subunit H,VMAH)蛋白在柑橘绿霉病菌指状青霉生长中的生理功能,及其作为抗柑橘绿霉病药物作用靶点的可行性。方法:采用菌丝生长法和孢子萌发法,研究沉默和过表达VMA... 目的:通过基因干扰和过表达技术,研究V-ATP酶H亚基(V-ATPase membrane subunit H,VMAH)蛋白在柑橘绿霉病菌指状青霉生长中的生理功能,及其作为抗柑橘绿霉病药物作用靶点的可行性。方法:采用菌丝生长法和孢子萌发法,研究沉默和过表达VMAH基因对正常和胁迫条件下指状青霉细胞生长特性的影响。结果:在正常生长条件下,沉默VMAH基因显著抑制了指状青霉菌丝体的生长;而过表达VMAH基因对菌体生长表现出显著促进作用。在不同pH值环境下,沉默VMAH基因显著抑制了指状青霉菌丝的生长,尤其在偏酸性(pH值低于2)和偏碱性(pH值高于8)条件下尤为显著;而过表达VMAH基因在一定程度上促进了菌体菌丝的生长,pH值为6时,其促进作用最显著。与野生株相比,沉默VMAH基因对胞外Ca^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)等金属离子胁迫处理较为敏感。VMAH基因沉默菌株对质子泵抑制剂类杀菌剂的敏感性显著增加,尤其V-ATP酶专一性抑制剂巴佛洛霉素A_(1)最为明显;而VMAH基因过表达菌株对质子泵抑制剂类杀菌剂的敏感性显著降低。结论:VMAH在指状青霉生长过程中发挥重要作用,是研发低耐药性柑橘采后杀菌剂的潜在作用靶点。 展开更多
关键词 柑橘绿霉病菌 v-ATP酶h亚基 基因沉默 过表达 生长特性
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hTNF-α单克隆抗体轻、重链可变区基因的克隆和序列及分子结构分析 被引量:3
4
作者 陈建军 徐皓 +2 位作者 高长寿 孙苗 陈常庆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期8-13,共6页
从两株具有高亲和力及中和活性的抗人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)的单抗杂交瘤细胞株1C3、3F6中分别提取总RNA,通过RT-PCR扩增并克隆了抗体的VL、VH基因。核苷酸序列分析表明,所克隆基因均为抗体的VL、V... 从两株具有高亲和力及中和活性的抗人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)的单抗杂交瘤细胞株1C3、3F6中分别提取总RNA,通过RT-PCR扩增并克隆了抗体的VL、VH基因。核苷酸序列分析表明,所克隆基因均为抗体的VL、VH基因,并分别属于Kappa链Ⅳ亚组和重链Ⅲ(D)亚组。此外,两抗体可变区分子模型及与hTNF-α的结合模型的建立及分析,为进一步的基因工程抗体研究及抗原-抗体相互作用机理的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 hTNF-Α 肿瘤坯死因子α 单克隆抗体 可变区基因
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鼠抗hTNF-α单克隆抗体重链基因片段的克隆和cDNA序列测定 被引量:1
5
作者 邓健蓓 韩骅 苏成芝 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第1期24-27,共4页
采用反转录PCR方法,以一对锚PCR引物和一对针对鼠IgVH区基因的引物,从分泌鼠抗hTNF-α单克隆抗体的E6杂交瘤细胞株中,分别扩增和克隆了自5′非翻译区至Cγ1近3′端的重链基因片段和重链可变区基因片段,并测定... 采用反转录PCR方法,以一对锚PCR引物和一对针对鼠IgVH区基因的引物,从分泌鼠抗hTNF-α单克隆抗体的E6杂交瘤细胞株中,分别扩增和克隆了自5′非翻译区至Cγ1近3′端的重链基因片段和重链可变区基因片段,并测定了其核苷酸序列。计算机分析表明,系重排的鼠Ig重链基因。 展开更多
关键词 Igvh基因 hTNF-Α 单克隆抗体 核苷酸序列
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过表达谷子液泡H+-ATPase E亚基基因在拟南芥中的耐盐性 被引量:6
6
作者 冯露 钟理 +6 位作者 陈丹丹 马有志 徐兆师 李连城 周永斌 陈明 张小红 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1682-1691,共10页
V-H+-ATPase在植物生长、发育和胁迫响应等生物学过程中发挥重要作用。本研究通过序列比对,从谷子中克隆到V-H+-ATPase E亚基基因Si VHA-E。进化树分析显示,Si VHA-E基因在进化上属于E1/E3亚族,与玉米V-H+-ATPase E亚基基因Zm VHA-EL亲... V-H+-ATPase在植物生长、发育和胁迫响应等生物学过程中发挥重要作用。本研究通过序列比对,从谷子中克隆到V-H+-ATPase E亚基基因Si VHA-E。进化树分析显示,Si VHA-E基因在进化上属于E1/E3亚族,与玉米V-H+-ATPase E亚基基因Zm VHA-EL亲缘关系较近。表达谱分析结果显示,Si VHA-E在高盐、茉莉酸甲酯(Me JA)、水杨酸(SA)和脱落酸(ABA)处理下表达上调,在低温和低氮处理下表达下调。亚细胞定位分析表明Si VHA-E定位于液泡膜上。遗传转化拟南芥的耐盐性鉴定表明,在盐处理条件下,转基因株系的种子萌发率、幼苗主根长、植株鲜重及存活率显著高于野生型的。与野生型拟南芥植株相比,Si VHA-E过表达植株体内Na+含量减少,体内相对含水量提高。此外,ABA萌发试验结果显示,在种子萌发后期,Si VHA-E过表达植株对ABA更加敏感。研究表明,谷子Si VHA-E可以显著提高拟南芥耐盐性,这可能与其正向调控ABA信号途径以及减少植株体内Na+积累和水分散失有关。 展开更多
关键词 谷子 v-h+-ATPase E亚基基因 耐盐性 作用机制
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盐爪爪液泡膜H^+-ATPase B亚基基因克隆及盐胁迫液泡膜相关基因的表达
7
作者 易小娅 杨瑞瑞 曾幼玲 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期902-907,共6页
【目的】研究藜科盐生植物盐爪爪(Kalidium foliatum)V-H+-ATPase B亚基基因的克隆与液泡膜相关基因的表达分析。【方法】采用RT-PCR和RACE技术克隆盐爪爪V-H+-ATPase B亚基基因(VHAB),利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析液泡膜相关... 【目的】研究藜科盐生植物盐爪爪(Kalidium foliatum)V-H+-ATPase B亚基基因的克隆与液泡膜相关基因的表达分析。【方法】采用RT-PCR和RACE技术克隆盐爪爪V-H+-ATPase B亚基基因(VHAB),利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析液泡膜相关基因Kf VHA-B、Na+/H+逆向转运蛋白基因Kf NHX的表达情况。【结果】Kf VHA-B全长1 881 bp,含1 467 bp的ORF阅读框,命名为Kf VHA-B(Gen Bank登录号:EF114316),编码488个氨基酸,推测的蛋白分子量大小为54.01 k D,理论等电点为4.68,含一个保守的ATP结合位点‘323-SGSIT-327’和两个推测的多聚腺苷酸化的信号保守序列;基因编码蛋白的系统进化树分析表明,盐爪爪VHA-B与盐穗木的VHA-B聚类关系最近;qRT-PCR检测了液泡膜相关基因Kf VHA-B、Na+/H+逆向转运蛋白基因Kf NHX的表达,100、500 mmol/L Na Cl处理下,Kf VHA-B在转录水平表达量始终保持较稳定,Kf NHX基因在转录水平随盐浓度的增加其表达量呈现递增趋势,而且100 mmol/L Na Cl处理下72 h时其表达量达到最大。【结论】Kf VHA-B可能在盐爪爪应对盐胁迫中起着重要的作用。 展开更多
关键词 盐爪爪 液泡膜h^+-ATPASE B亚基 盐胁迫 克隆 表达分析
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抗骨形成蛋白(BMP)单链抗体的构建 被引量:3
8
作者 孙远 杨连甲 +2 位作者 高玉好 金岩 董绍忠 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期156-160,共5页
从一株鼠抗BMP单克隆抗体杂交瘤中扩增出其可变区基因片段,并将其分别克隆入pUC18、19载体,利用双脱氧链终止法进行序列测定和计算机分析后,应用一段人工合成的含15个氨基酸的连接肽,将重链基因(VH)的C端和轻链基... 从一株鼠抗BMP单克隆抗体杂交瘤中扩增出其可变区基因片段,并将其分别克隆入pUC18、19载体,利用双脱氧链终止法进行序列测定和计算机分析后,应用一段人工合成的含15个氨基酸的连接肽,将重链基因(VH)的C端和轻链基因(VL)的N端连接起来,构建成单链抗体(scFv)。将其克隆入融合蛋白表达载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌JM109中获得初步表达。 展开更多
关键词 BMP 可变区基因 连接肽 单链 抗体 抗骨形成蛋白
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小鼠BMP-McAb可变区基因的体外扩增、克隆与序列分析 被引量:1
9
作者 孙远 杨连甲 +1 位作者 高玉好 金岩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第4期12-16,共5页
从体外培养的BMPMcAb杂交瘤中提取细胞总RNA,反转录成cDNA。以cDNA为模板,利用两对根据免疫球蛋白重链与轻链可变区5′端序列和J区序列设计合成的引物,通过PCR方法,扩增出抗体重链、轻链可变区基因片段(V... 从体外培养的BMPMcAb杂交瘤中提取细胞总RNA,反转录成cDNA。以cDNA为模板,利用两对根据免疫球蛋白重链与轻链可变区5′端序列和J区序列设计合成的引物,通过PCR方法,扩增出抗体重链、轻链可变区基因片段(VH,VL)。将扩增产物分别克隆入pUC18,pUC19质粒,筛选出阳性克隆,利用双脱氧链终止法进行序列测定,经计算机分析,VH基因全长为345bp,编码115个氨基酸;VL基因全长为315bp,编码105个氨基酸。 展开更多
关键词 BMP PCR 可变区基因 序列分析
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怀地黄液泡质子泵焦磷酸水解酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量:4
10
作者 周延清 张永华 +5 位作者 陈艳梅 张喻 李静云 陈娟娟 白妍妍 魏海方 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第3期107-111,114,共6页
为了克隆地黄功能基因,根据NCBI GenBank核酸数据库中5种已知植物生长素诱导的器官膨大基因(ARGOS)碱基序列的保守区,利用CLUSTAL 2.1和DNAMAN 4.0软件设计简并引物,采用RT-PCR技术扩增出一个cDNA片段,测序表明,获得基因cDNA片段序列长... 为了克隆地黄功能基因,根据NCBI GenBank核酸数据库中5种已知植物生长素诱导的器官膨大基因(ARGOS)碱基序列的保守区,利用CLUSTAL 2.1和DNAMAN 4.0软件设计简并引物,采用RT-PCR技术扩增出一个cDNA片段,测序表明,获得基因cDNA片段序列长度为495bp。经过NCBI数据库BLAST分析,发现它与莲花、蓖麻、烟草、苜蓿、葡萄、碧桃、灰绿藜7种植物的液泡膜质子泵焦磷酸水解酶基因同源性很高,在83%~86%,因此获得的基因是地黄液泡膜质子泵焦磷酸水解酶基因。 展开更多
关键词 怀地黄 液泡质子泵焦磷酸水解酶 基因克隆 cDNA末端快速扩增技术 生物信息学分析
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抗2型登革病毒特异性免疫球蛋白重链可变区基因的扩增与纯化
11
作者 左丽 刘乐和 郭辉玉 《贵阳医学院学报》 CAS 1999年第4期349-351,共3页
提取抗2 型登革病毒单克隆抗体杂交瘤细胞m RNA 和总DNA,反转录聚合酶链反应(RT- PCR) 和PCR 扩增并纯化特异性免疫球蛋白重链可变区(VH) 基因。琼脂糖凝胶和聚丙烯胺凝胶电泳观察结果,该VH 基因约450 b... 提取抗2 型登革病毒单克隆抗体杂交瘤细胞m RNA 和总DNA,反转录聚合酶链反应(RT- PCR) 和PCR 扩增并纯化特异性免疫球蛋白重链可变区(VH) 基因。琼脂糖凝胶和聚丙烯胺凝胶电泳观察结果,该VH 基因约450 bp 。实验证明,上述两种方法均是分离和扩增VH 基因的有效方法,但提取DNA 后进行PCR 较提取mRNA 进行RT- PCR经济、简单。 展开更多
关键词 重链可变区基因 单克隆抗体 登革热病毒
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含人APOBEC3F启动子荧光素酶报告基因载体的构建
12
作者 赵柯 王临旭 +4 位作者 庄严 黄德东 李媛 康文臻 孙永涛 《传染病信息》 2010年第6期333-336,共4页
目的构建含人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide-like3F,APOBEC3F)基因启动子的萤光素酶报告基因载体。方法应用5'cDNA末端快速扩增分析(5'rapid am-plificati... 目的构建含人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide-like3F,APOBEC3F)基因启动子的萤光素酶报告基因载体。方法应用5'cDNA末端快速扩增分析(5'rapid am-plification of cDNA ends,5'RACE)技术确定APOBEC3F转录起始位点,利用PCR技术扩增人APOBEC3F启动子序列,构建含人APOBEC3F启动子的萤光素酶报告基因载体,行双酶切及测序鉴定,并通过双萤光素酶报告基因系统检测启动子活性。结果 APOBEC3F基因转录起始位点位于GenBank已公布的APOBEC3F cDNA起始位置上游13个核苷酸处,测序结果表明克隆获得的APOBEC3F基因启动子序列与GenBank报道一致。重组载体pGL3-A3F-Prom组F/R值(0.342082±0.023516)与空载体pGL3-basic组(0.007871±0.002357)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了含人APOBEC3F基因启动子的萤光素酶报告基因载体,为更深入研究APOBEC3F基因转录调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 启动区 遗传 荧光素类 基因 病毒 hIv-1 反转录
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Cloning,sequencing and expression of a swine IgG H chain gene in E.coli 被引量:1
13
作者 Kai Zhao Zhaoxin Zheng 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1999年第9期821-825,共5页
A DNA fragment about 1.5 kb has been isolated from spleen of adult Chinese swine (?)CR. The DNA fragment encodes immunoglobulin IgG H chain gene. Sequencing analysis showed that the DNA fragment is 1 425 bp long, co... A DNA fragment about 1.5 kb has been isolated from spleen of adult Chinese swine (?)CR. The DNA fragment encodes immunoglobulin IgG H chain gene. Sequencing analysis showed that the DNA fragment is 1 425 bp long, complete CDS. The C region of the gene has been classified as Subclass lg γ<sub>3</sub>, and is the same as reported by Sun et al., but V region of the present gene is 42 bp less by comparison. The gene has been ligated into expression vector pET-3b (NSEB)( - ). A protein about 52 ku has been expressed in E. coil with an expression level of about 21%. 展开更多
关键词 SWINE IGG h chain gene v region gene CLONING ONA SEQUENCING expression.
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抗结肠癌抗体重链可变区和κ轻链基因的克隆 被引量:2
14
作者 李启胜 俞炜源 +2 位作者 王翔 袁玫 李力 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1998年第1期35-38,43,共5页
目的:从一株抗结肠癌细胞系LS174T的单抗细胞株CL-4中克隆出抗结肠癌抗体重链可变区和κ轻链基因。方法:用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠抗体重链可变区和完整κ轻链的通用引物,通过P... 目的:从一株抗结肠癌细胞系LS174T的单抗细胞株CL-4中克隆出抗结肠癌抗体重链可变区和κ轻链基因。方法:用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠抗体重链可变区和完整κ轻链的通用引物,通过PCR扩增基因,分别克隆入pUC19,作核苷酸序列分析。结果:用重链引物扩增获得长约360bp的片段;用轻链引物扩增获得约640bp的片段,序列测定获得它们的DNA序列。结论:克隆的重链可变区基因长度为360bp,属于小鼠重链可变区I(B)亚族;κ轻链长度为642bp,其中可变区为321bp,属于小鼠κ轻链Ⅴ亚族。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 抗结肠癌抗体 重链可变区 k轻链 克隆
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