慢性HBV感染者外周血Vα24 NKT细胞数量变化及其与肝脏损害程度的关系

目的:探讨慢性HBV感染者外周血Vα24自然杀伤T细胞(NKT)数量变化及其与肝脏损伤程度的关系.方法:观察对象为慢性乙型肝炎(CHB)患者26例、乙型肝炎后肝硬化患者(LC)9例、慢加急性肝衰竭患者(ACLF)8例和7名正常对照组(NC),入院后次日清晨取静脉全血2mL,裂解红细胞后,采用流式细胞仪检测外周血Vα24 NKT细胞数量占外周血T淋巴细胞的比例,同时检测肝功能、凝血功能判断肝脏损害程度.结果:CHB,ACLF组患者外周血Vα24 NKT细胞数量分别为0.8012%±0.2979%、0.4638%±0.2244%,明显低于正常对照组(1.1114%±0.3546%,P<0.05);CHB中度及重度患者NKT数(0.7344%±0.2441%,0.6925%±0.3612%)明显低于正常对照组.NKT数与凝血酶原活动度(PTA)呈显著正相关,与血清总胆红素(TB)呈显著负相关.结论:慢性HBV感染者外周血Vα24 NKT细胞数明显降低,并随肝损害程度加重而减少,提示Vα24NKT细胞可能参与CHB患者肝细胞损伤.

不同来源人Vα24＋NKT细胞体外扩增及细胞因子分泌

为了研究人脐血(CB)、外周血(PB)及G-CSF动员后外周血采集物单个核细胞(G-PBMNC)中Vα24+NKT细胞的表型及体外扩增、细胞因子分泌情况,分别取来自CB和PB的单个核细胞(MNC)以及G-PBMNC,在含α-半乳糖酰基鞘胺醇(α-GalCer)及细胞因子IL-2、IL-15的体系中,体外扩增培养Vα24+NKT细胞;采用间标磁珠分选纯化NKT细胞;流式细胞术(FCM)检测NKT细胞表型、NKT细胞含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞因子IL-4、IFN-γ浓度。结果表明:由CB或PB或G-PBMNC诱导扩增Vα24+NKT细胞可分别扩增221.5倍、456.5倍、756.38倍。CB或PB来源的Vα24+NKT细胞经PMA刺激后,24小时生成IL-4、IFN-γ浓度和IL-4/IFN-γ比率分别为180.33vs190.67ng/ml、864.33vs508.49ng/ml、0.503vs0.455。由G-PBMNC诱导扩增Vα24+NKT细胞,培养9天及12天时生成IL-4、IFN-γ浓度及IL-4/IFN-γ比率分别为139.08vs89.3ng/ml、14264.8vs14488ng/ml、0.0531vs0.0376。结论:不同来源MNC在α-GalCer、IL-2、IL-15诱导下可以短期有效扩增Vα24+NKT细胞,G-PBMNC诱导扩增的效果优于CB和PB。NKT细胞活化后可以分泌大量IL-4及IFN-γ,但以IFN-γ为主。

系统性红斑狼疮患者外周血Vα24 Vβ11 NKT细胞的初步研究

目的研究系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中Vα24 Vβ11 NKT细胞的数量以及经脂类物质α-半乳糖神经酰胺酶（α-Galeer）体外刺激后Vα24 Vβ11 NKT细胞的增殖情况。方法①运用流式细胞仪技术检NSLE患者外周血PBMC中Vα24 Vβ11 NKT细胞的表达；②在SLE患者PBMC体外培养体系中加入α-Galeer及白细胞介素（IL）-2，7d后观察Vα24 Vβ11 NKT细胞的增殖情况。结果SLE患者外周血PBMC中Vα24 Vβ11 NKT细胞数量减少（0.039±0.023）％低于正常对照组（0.200±0.060）％，差异有统计学意义（P〈0.05），经α-Galeer刺激后正常人Vα24 Vβ11 NKT细胞明显增殖（4.52±5.11）％，而SLE患者无增殖（0.06±0.11）％（P〈0.05）。结论SLE患者PBMC中Vα24 Vβ11 NKT数量下降且功能存在异常。