用RT-PCR和Genescan分析CML急变期病人TCRVβT细胞的表达和克隆性

目的：了解CML急变期的TCRVβ亚家族T细胞的表达及其克隆性。方法：采用RT－PCR扩增4例CML急变期病人的外周血单个核细胞的TCRVβ24个亚家族的互补决定区3（CDR3），产物进一步经基因扫描分析确定T细胞的克隆性。结果：病人外周血仅表达4～9个Vβ亚家族T细胞，主要为Vβ1，Vβ2，Vβ3，Vβ5，Vβ15和Vβ17；基因扫描分析显示2例CML急粒变的部分产物为寡克隆性，而2例CML急淋变者的产物均为多克隆性。结论：CML急变期外周血仅选择性表达部分Vβ亚家族T细胞；CML急粒变存在克隆性增殖T细胞，这可能是机体对白血病细胞相关抗原的一种直接反应。该方法可用于检测微小残留病变和判断疾病复发。

Changes in the T-cell receptor Vβ gene repertoire after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Background We distinguished graft-versus-host disease (GVHD) from graft-versus-leukemia (GVL) effects and to investigate the distribution of T-cell receptor (TCR) Vβ gene repertoire in individuals with leukemia before and after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT).Methods Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were obtained from 10 normal individuals, 8 donors and 11 patients with leukemia before and after transplantation. Polymerase chain reaction (PCR) amplification of complementarity-determining region 3 (CDR3) of 24 TCR Vβ genes was used to examine serial samples of PBMC. The PCR products were further analyzed by genescan to evaluate clonality of T cells.Results The 24 TCR Vβ gene repertoire displayed highly diverse and polyclonal spectratypes in all normal individuals and 4 of 8 donors. Anoth er 4 donors expressed part of the 24 TCR Vβ subfamily and 1 donor had oligoclonality. The expressions of the 24 TCR Vβ subfamilies were skewed and restric ted in 11 leukemia patients before and after transplantation. Some absences of 24 TCR Vβ subfamily expression were quite similar between the recipients pro-transplantation and related donors. The number of subfamilies expressed increased over time post-transplantation, but the restricted expressions of the subfamily could last 6-30 months after transplantation. All patients with GVHD and some without GVHD exhibited T cell clonal expansion. The expansive T cell clone was distributed in Vβ 2-3, 16-17, 18-19, 21 and Vβ 23 in patients with GVHD and in Vβ 7, 9, 16 and 19 in patients without GVHD. One patient with syngeneic-HSCT (syn-HSCT) had Vβ 15 and 16 T cell expansion after transplantation. One patient displayed Vβ 18 T cell expansion after donor lymphocyte infusion (DLI).Conclusions Normal individuals express the entire 24 TCR Vβ ge ne repertoire and have polyclonal distribution. However, the TCR Vβ gene repertoire is only partially expressed in some donors. The TCR Vβ gene repertoire is restrictedly expressed in a skew fashion in patients with leukemia before and after transplantation. The number of TCR Vβ gene subfamilies increases over time post- transplantation. GVHD and GVL effects may induce the proliferation of T cell clones.Clinical GVL response may be distinguished from GVHD alloreactivity through the host MHC antigen.

CML病人TCR Vβ21寡克隆T细胞及其CDR3序列特点

目的分析慢性粒细胞白血病 ( CML)病人的克隆性增殖 T细胞及其 CDR3序列的特点。方法利用 RT- PCR扩增 3例 CML 外周血单个核细胞中 2 4个 TCR Vβ基因的 CDR3,了解 TCR VβT细胞的分布。阳性产物进一步经基因扫描分析 ,了解其克隆性。寡克隆的 PCR产物再进行序列分析。结果 3例病人仅存在 3～ 9个 TCR Vβ亚家族 T细胞 ,部分 Vβ亚家族T细胞呈寡克隆性增殖 ,Vβ2 1的寡克隆 T细胞见于全部的 3例病人中。结论 CML 病人外周血 TCR Vβ亚家族 T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖 ,这可能是 CML 中机体对恶性细胞所引起的特异性免疫反应 ,但对不同病人的 Vβ2 1寡克隆 T细胞序列分析并未能发现完全同源的

利用基因扫描分析TCR Vβ亚家族的CDR3长度方法检测T细胞克隆性

分析了健康人、Ｔ－ＡＬＬ外周血及Ｔ细胞株Ｍｏｌｔ－４和Ｊｕｒｋａｔ中ＴＣＲＶβＴ细胞的表达和克隆性。应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＴＣＲＶβ２４个亚家族的ＣＤＲ３，并经基因扫描和序列分析确定Ｔ细胞克隆性。结果表明健康人表达除Ｖβ２０外的多克隆Ｔ细胞；Ｔ－ＡＬＬ仅表达３～４个Ｖβ亚家族Ｔ细胞；部分呈寡克隆性；Ｍｏｌｔ－４和Ｊｕｒｋａｔ分别表达Ｖβ２和Ｖβ８单克隆Ｔ细胞。Ｔ－ＡＬＬ中存在克隆性生长Ｔ细胞。该方法是检测Ｔ细胞克隆性的敏感和精确的方法。

McAb共激活T细胞介导肝癌细胞前后的膜分子与TCRVβ基因的表达

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽的复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ用ＦＡＣＳ进行表型分析，结果发现：作用后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化，同时基因家族采用ＲＴＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析ＴＣＲＶβ基因１～２０亚家族表达水平与特征，健康人ＰＢＬｓ分别加入ＩＬ２、ＰＨＡ、抗ＣＤ３和ＣＤ３＋ＣＤ２８、ＣＤ２８＋ＣＤ８０、ＣＤ２＋ＣＤ５８作用肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２）前表达水平平均约为５％，作用ＢＥＬ７４０２后表达水平约为１３％～２５％，其特征为Ｖβ７增高，这提示在癌抗原的参与下ＭｃＡｂ共刺激的Ｔ细胞活化，ＴＣＲ接受ＡＰＣ相应抗原的刺激，具有该ＴＣＲ的淋巴细胞迅速增殖而成为针对抗原的Ｔ细胞克隆，发挥其识别和杀伤癌细胞的作用，这将为肿瘤生物治疗的研究提供分子免疫学依据。

AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究

目的 了解急性髓细胞白血病M1亚型 (AML M1 )患者外周血TCRVβ亚家族T细胞的克隆性分布特点。 方法采用RT PCR扩增 9例M1患者外周血的单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因 ,分析其TCRVβ亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析 ,了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果 不同标本中可检测到 2～ 5个Vβ亚家族T细胞 ,以Vβ2、Vβ3、Vβ1 7和Vβ1 9为常见 ,并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ1 9中发现克隆性生长T细胞。结论 M1病人外周血TCRVβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况 ,这可能与M1细胞相关抗原有关 ,且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主。

再生障碍性贫血T细胞受体Vβ基因表达及生血合剂对其的干预作用

目的 利用免疫学和分子生物学技术，着重从T细胞受体β链可变区（TCR Vβ）亚家族基因表达角度探讨再生障碍性贫血（AA）的免疫发病机制及中药复方生血合剂的治疗作用。方法 AA患者分别用生血合剂（治疗组10例）和环孢霉素（对照组10例）治疗6个月以上，采用RT-PCR、基因扫描方法检测治疗前后外周血单个核细胞TCR Vβ基因表达的变化。结果 20例AA患者Vβ24个亚家族基因谱型倾斜，寡克隆亚家族所占百分率明显增多，与健康人（10名）比较差异有显著性（P〈0．01）。30％～50％的AA患者存在Vβ2、Vβ5、Vβ6、Vβ15、Vβ16、Vβ22、Vβ23寡克隆亚家族，50％以上的患者存在Vβ8、Vβ21寡克隆亚家族。治疗后两组寡克隆亚家族均比治疗前减少（P〈0．05）。结论 多个克隆性增殖的T细胞家族参与了AA的发病过程，生血合剂可改善TCR Vβ谱型倾斜程度，降低异常T细胞克隆性增殖，从而减少异常克隆的T细胞对造血组织的免疫损伤，有利于骨髓造血功能的恢复。

NB4和HL-60细胞诱导的脐血T细胞TCR Vβ基因谱系分析

目的:了解经NB4细胞和HL-60细胞体外诱导后脐血T细胞的TCR Vβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况。方法:采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法,用经丝裂霉素灭活的NB4细胞和HL-60细胞体外诱导脐血T细胞增殖,利用RT-PCR分析经MLTC前后T细胞的24个TCR Vβ亚家族的利用情况,并用基因扫描分析其克隆性特点。结果:诱导前脐血T细胞表达20个TCR Vβ亚家族,诱导后的T细胞所表达的TCR Vβ亚家族随培养时间增加而逐渐减少,且诱导组呈现出克隆趋势或寡克隆增殖特点。两种细胞诱导后10 d均可见Vβ1的克隆增殖出现变化,此外,NB4诱导的T细胞出现Vβ15,而HL-60诱导的T细胞则出现Vβ23的克隆增殖情况。结论:NB4细胞和HL-60细胞可诱导脐血TCR VβT细胞克隆性增殖,此优势表达的克隆性T细胞可能与特异性抗原介导的细胞免疫反应有关。

抗原特异TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCRV β13-pIRES2-EGFP真核表达载体的构建及共转染研究

目的构建携带弥漫大B型非霍奇金淋巴瘤(DLBL)相关抗原特异性的TCR Vα和TCR Vβ基因片段的真核表达载体TCR Vα-pIRES2-EGFP和TCR Vβ-pIRES2-EGFP,将其共同转染Raji和Jurkat细胞。方法前期研究从1例DLBL患者外周血T细胞中发现克隆性增殖T细胞受体(TCR)Vα6和Vβ13亚家族T细胞,在此基础上利用RT-PCR扩增TCR Vα6和TCR Vβ13基因全长序列后,分别将其定向克隆入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体pIRES2-EGFP,酶切和核酸序列测定分析方法鉴定重组质粒TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP的正确性;利用核转染技术(nucleofector)将其分别或共同转染Raji细胞和Jurkat细胞,24 h后利用激光共聚焦显微镜观察EGFP的瞬时表达情况,48 h后利用实时定量PCR检测TCR Vα6和TCR Vβ13基因的表达情况,Western blot检测EGFP蛋白的表达情况。结果获得来自DLBL患者的TCR Vα6和TCR Vβ13基因全长序列,酶切分析和核酸序列测定证实TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP重组质粒构建正确;转染24 h后,激光共聚焦显微镜下可观察到EGFP的表达,40%以上细胞发出绿色荧光,单独转染和共转染组荧光产生情况相似;实时定量PCR在单独转染和共转染组均可检测到TCR Vα6和TCR Vβ13基因的表达,共转染组2基因的表达水平稍低于单独转染组;Western blot检测在单独转染和共转染组均显示EGFP蛋白的表达,2组的蛋白杂交带强度相似。结论成功构建了DLBL特异性的TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP真核表达质粒,两者可同时转染到细胞中,并实现了体外共表达。

急性早幼粒细胞白血病患者中TCR Vβ T细胞体内外克隆性增殖的比较

急性早幼粒细胞白血病 ;T细胞受体Vβ基因 ;T细胞培养 ;克隆性增殖为了解急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者T细胞在体内或体外经诱导后TCRVβ亚家族的分布和克隆性增殖特点 ,利用T淋巴细胞液体培养法 ,在rhIL 2和抗CD3单抗条件下诱导扩增APL患者单个核细胞 ,并应用RT PCR分别扩增培养前后患者T细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因的互补决定区 3 (CDR3 )片段 ,了解各Vβ亚家族的表达情况 ;对阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度 ,了解T细胞克隆性。结果发现 ,APL患者T细胞仅表达部分Vβ亚家族 ,但经体外培养后可检测到部分新增TCRVβ亚家族T细胞。全部患者存在某些TCRVβ亚家族的克隆性增殖T细胞。 2例患者均出现相似的Vβ1,Vβ3 ,Vβ7,Vβ16和Vβ2 0T细胞的克隆性增殖情况。结论 :T细胞的体外培养可诱导某些Vβ亚家族的表达。在T细胞培养不同时间中 。

B-ALL病人TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的 了解B ALL病人外周血T细胞的TCRVβ基因谱系及其克隆性增殖情况。 方法 利用RT PCR方法扩增 13例初发未治B ALL病人外周血单个核细胞中 2 4个TCRVβ基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果 13例B ALL病人分别表达 2～ 18个Vβ亚家族。 13例病人均存在 1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞 ,增殖形式包括寡克隆及寡克隆增殖趋势、双克隆和单克隆。Vβ2 1和Vβ2 3亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高。结论 B ALL病人外周血T细胞的TCRVβ谱系呈现优势利用的特点 ,并存在克隆性增殖的T细胞 ,这可能是机体对白血病相关抗原产生的特异性免疫反应 ;Vβ2 1和Vβ2 3亚家族T细胞发生克隆增殖改变的趋向性比较明显 ,可能与B

T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的 了解T细胞 急性淋巴细胞白血病 (T ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCRVβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法 利用RT PCR方法扩增 6个不同的T细胞株和 6例初发未治T ALL病人外周血单个核细胞中 2 4个TCRVβ基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性 ,部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果 与正常人外周血表达全部 2 4个Vβ亚家族不同 ,6例T ALL病人分别表达 5～ 12个Vβ亚家族。 6例病人均存在 1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞 ,另外 ,还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变 ,呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞 ,不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论 T ALL患者外周血T细胞的TCRVβ谱系出现限制性改变 ,均可检测到克隆性增殖T细胞 ,尚需进一步鉴定其性质 (肿瘤性或抗原特异性增殖 ) 。

DLI治疗CML病人的克隆性增殖TCR Vβ细胞分析

目的 :了解供者淋巴细胞输注 (DLI)后 ,产生GVL效应的克隆性TCRVβ亚家族T细胞的情况。 方法 :利用RT PCR分别扩增 2例CML经allo BMT后复发病人DIL治疗前后不同时间外周血单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因的CDR3,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度 ,了解T细胞克隆性。结果 :DLI治疗前病人外周血仅表达 4～ 11个Vβ亚家族 ,而DLI治疗后缓解期则可检测到 12～ 2 1个Vβ亚家族。基因扫描显示DLI后病人外周血出现某些新的Vβ亚家族克隆性增殖T细胞。结论 :病人的TCRVβ亚家族T细胞存在倾斜性分布现象 ,该倾斜现象在完全缓解时逐步恢复正常。DLI治疗病人时 。

大鼠TCR Vβ8.2基因真核表达质粒的构建及表达

目的:构建含大鼠TCRVβ8.2基因的重组真核表达质粒,并检测其在体内外的表达。方法:以RTPCR法分离Lewis大鼠脾淋巴细胞中的TCRVβ8.2基因片段,插入到真核表达载体pTARGET中,构建重组表达载体pTARGETTCRVβ8.2,并转化E.coliJM109,经蓝白斑筛选阳性菌落,进行菌落PCR和测序鉴定。将重组质粒以肌注法免疫BALB/c小鼠,采集注射部位股四头肌处的肌肉,用RTPCR及免疫组化染色法检测TCRVβ8.2基因在注射部位的转录和表达。通过脂质体介导,将重组质粒导入COS7细胞中进行瞬时表达,用免疫细胞化学染色法检测靶基因在真核细胞内的表达。结果:测序鉴定证实,TCRVβ8.2基因已被正确插入到pTARGET载体中,并检测到在肌肉组织和COS7细胞内重组蛋白的表达。结论:成功地构建重组真核表达质粒pTARGETTCRVβ8.2,并在体内体外均可检测到其转录和表达,为进一步进行TCRVβDNA疫苗的研究奠定了基础。

和解汤对慢性乙型肝炎T细胞受体Vβ7基因表达的影响

目的:探讨和解汤对慢性乙型肝炎（简称慢乙肝）临床疗效与T细胞受体Vβ7（TCRVβ7）基因表达特征的相关性。方法:将慢乙肝患者45例随机分为两组,治疗组（30例）采用和解汤治疗,对照组（15例）采用常规西药治疗,观察治疗后TCRVβ7,基因表达变化。结果:经过6个月治疗,两组ALT水平均显著下降（P<0.01）,治疗组5例测出TCRVβ7,基因表达,并均出现HBV-DNA、HBeAg阴转;对照组无一例测出TCRVβ7基因表达,无一例出现HBV-DNA、HBeAg阴转。HBV-DNA、HBeAg未阴转的患者,虽肝功能恢复正常,但无一例测出TCRVβ7基因表达。两组总有效率比较差异无显著性,但两组显效率比较差异有显著性（P<0.01）。结论:和解汤对TCRVβ7基因表达有调节作用,可能是抑制病毒复制、清除病毒的重要途径。

非霍奇金淋巴瘤病人外周血T细胞TCR Vβ谱系的选择性利用和克隆性增殖分析

为了解B细胞性非霍奇金淋巴瘤 (B NHL)和T细胞性非霍奇金淋巴瘤 (T NHL)病人TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性的情况 ,利用RT PCR分别扩增 4例B NHL和 2例T NHL病人外周血单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因的CDR3,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度 ,以了解T细胞克隆性。结果显示 ,6例NHL病人外周血T细胞仅选择性表达 6 - 12个Vβ亚家族 ,全部病人均选择了表达Vβ1,Vβ8,Vβ13和Vβ19,5例病人表达Vβ2和Vβ16 ,而全部病人均未能检测到Vβ4 - 6 ,Vβ10 - 12 ,Vβ15 ,Vβ17- 18,Vβ2 0 ,Vβ2 2 - 2 3。基因扫描发现 2例B NHL和 1例T NHL病人的 1- 3个Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖。结论提示 ,B NHL和T NHL病人外周血T细胞具有相似的Vβ亚家族选择性利用的特点 。

TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在正常人胸腺、脐血和外周血中的检测情况

目的建立检测TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的方法,分析其在胸腺细胞、脐血和正常人外周血T细胞中的存在情况,从而了解近期胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naive T细胞的情况。方法利用半巢式PCR分别扩增3例正常胸腺细胞1、0例脐血和10例正常人外周血单个核细胞DNA中的Vβ2、Vβ5和Vβ17与Dβ1基因片段重排时产生的sjTRECs。结果在正常胸腺细胞、脐血和正常人外周血单个核细胞中均可检测到Vβ2、Vβ5和Vβ17与Dβ1片段形成的sjTRECs,其中胸腺细胞和脐血单个核细胞DNA中3种删除环的检出率均为100%,正常人外周血3种删除环的检出率分别为50%、70%和40%。结论成功地建立检测3种V-βDβ1 sjTRECs的方法,并提供了Vβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs在胸腺、脐血和外周血中的检测情况。

Ph^+和Ph^-CML病人外周血TCR Vβ T细胞分布特点

为了解Ph+ 和Ph-慢性粒细胞白血病 (CML)病人外周血TCRVβ亚家族T细胞的分布特点 ,利用RT PCR分别扩增 13例CML病人 (Ph+ b3a2型 5例 ,Ph+ b2a2型 5例 ,Ph-型 3例 )外周血单个核细胞的TCRVβ的2 4个亚家族基因片段 ,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。研究结果 :发现与正常人有所不同 ,病人仅存在部分TCRVβ亚家族T细胞 ,Ph+ b3a2型CML表达 4 - 16 (平均 10 .2 )个Vβ亚家族 ,Ph+ b2a2型CML表达 8- 11(平均8.8)个Vβ亚家族 ,而Ph-者表达 5 - 6 (平均 5 .7)个Vβ亚家族。各病人表达的Vβ亚家族分布有所不同 ,在Ph+(b3a2型 )全部病人表达Vβ10和Vβ16 ,其次为Vβ9和Vβ2 2 ;Ph+ (b2a2型 )除与Ph+ (b3a2型 )相同全部病人表达Vβ10和Vβ16外 ,还全部表达Vβ2 4 ,其次为Vβ8;而Ph-者全部表达Vβ2 4 ,其次为Vβ3,Vβ10 ,Vβ13和Vβ2 2。结论 :提示Ph+ 和Ph-CML病人外周血的TCRVβ亚家族T细胞存在倾斜性分布现象 ,不同类型CML病人T细胞的TCRVβ选择性利用有所不同 。

NOD/SCID小鼠人源化TCR Vβ亚家族T细胞分布与克隆性分析

目的应用脐血CD34+细胞移植NOD/SCID鼠所建立的人源化SCID模型,分析人源化TCR Vβ亚家族T淋巴细胞分布与克隆性。方法磁珠分选法分离脐血中CD34+细胞,分别经尾静脉输入亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠。第6周处死小鼠提取外周血、骨髓、胸腺的RNA,RT-PCR扩增人TCR Vβ亚家族基因,并用基因扫描进行T细胞克隆性分析。结果采用RT-PCR技术在模型小鼠骨髓中检测到部分人TCR Vβ亚家族基因Vβ1、2、91、3、19。经进一步基因扫描分析,发现部分TCR Vβ亚家族基因Vβ9、13、19呈寡克隆表达。结论在NOD/SCID模型可重建分化成熟的TCR Vβ亚家族T细胞。未能检测到全部人TCR VβT细胞的原因可能与免疫重建不完全或存在移植物抗宿主的反应有关。人源T淋巴细胞在模型鼠骨髓中分化成熟。

慢性乙型肝炎患者外周血CD8^+T细胞TCR Vβ基因亚家族克隆化的研究

目的:分析慢性乙型肝炎(CHB)患者CD8+T细胞TCR Vβ基因亚家族克隆化特征。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增8例CHB患者外周血CD8+T细胞TCR Vβ基因22个亚家族的CDR3区,基因扫描技术对TCR Vβ亚家族的克隆化进行鉴定。结果:基因扫描显示所有8例CHB患者CD8+T细胞TCR Vβ基因亚家族均出现一个或一个以上单克隆或寡克隆增生。Vβ8、Vβ11、Vβ12出现单克隆增生的频率相对较高。8例健康者TCR Vβ基因亚家族均为多克隆。结论:CHB患者外周血CD8+T细胞TCR Vβ亚家族存在克隆性增生。