针对糖尿病易感基因Vβ13的慢病毒系统的建立及其对T细胞的转导

目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,有效沉默连接红色荧光蛋白mCherry与靶基因1型糖尿病易感基因Vβ13的表达,建立一种简便有效基因沉默的系统,并初步研究慢病毒感染T细胞的可能性。方法以Vβ13 mRNA编码序列作为干扰靶点,以慢病毒质粒UTG作为载体,构建靶向Vβ13的shRNA表达质粒,构建携带Vβ13的m Cherry红色荧光蛋白的质粒作为验证shRNA有效性的靶点,并转染293FT细胞。通过红色荧光的表达及RT-PCR和Western blot确定最佳沉默Vβ13序列后,将有效的UTG-Vβ13质粒与辅助质粒共转染293FT细胞,低温超高速离心,获取高滴度慢病毒。应用慢病毒感染大鼠T细胞,光镜观察T细胞被慢病毒感染的情况,流式细胞术检测T细胞的绿色荧光表达情况。结果成功构建Vβ13-shRNA慢病毒载体UTG-shRNA-Vβ13,RT-PCR及Western blot结果显示慢病毒感染的293FT细胞Vβ13 mRNA及蛋白表达相对于对照组显著降低。构建的慢病毒可以成功感染T细胞。结论红色靶基因-绿色慢病毒系统具有简便的筛选性能;UTG慢病毒对神经干细胞具有较高感染效率。可作为一种良好的基因导入载体,实现慢病毒介导的RNA干扰在T细胞内的有效表达,并为T细胞过继性转移的相关研究提供技术支持。

海藻提取物对病毒感染的大鼠1型糖尿病Vβ13基因表达及Treg细胞的影响(英文)

目的观察Vβ13mRNA和Treg细胞在大鼠细小病毒(KRV)联合巨细胞病毒(CMV)感染大鼠的脾淋巴细胞中的表达以及海藻提取物对1型糖尿病的治疗效果。方法 LEW.1WR1大鼠40只,随机分成2组,应用CMV联合KRV建立大鼠1型糖尿病模型。治疗组大鼠每日口服海藻提取物共40d;成模组用等量无菌生理盐水替代同步进行。RT-PCR检测脾脏Vβ13mRNA的表达,流式细胞术检测脾细胞Vβ13^+CD4^+CD25^+Treg细胞亚群比例;HE染色观察糖尿病胰岛的病变情况。结果实验组成模率为90%(18/20),成模血糖平均水平在3.15g/L;实验组Vβ13的表达高于治疗组。实验组中CD4^+CD25^+Treg细胞的比例为6.2%,治疗组为13.5%(P<0.05)。结论感染巨细胞病毒的大鼠Vβ13 mRNA的表达在糖尿病初期显著增高。Vβ13^+CD4^+CD25^+Treg细胞亚群比例较低。海藻提取物提高了LEW.1WR1大鼠Treg细胞的表达,可用于治疗糖尿病。