p53 c-erbB-2 VEGF蛋白表达对非小细胞肺癌辅助化疗的临床预测

目的:探讨p53、c-erbB-2、VEGF蛋白表达对非小细胞肺癌预后和辅助化疗的临床预测作用。方法:应用免疫组化LSAB方法检测18例根治术后行含铂类辅助化疗的Ⅲa期非小细胞肺癌石蜡切片中p53、c-erbB-2、VEGF蛋白的表达情况,选同期单独手术的15例Ⅲa期患者作对照,分析三项指标在单纯手术组和术后化疗组中的表达以及联合检测三项指标对预后和辅助化疗的预测作用。结果:1)p53、c-erbB-2蛋白表达阳性率分别为54.72%和47.17%,两组中阳性者和阴性者的生存率差异具有显著性(P<0.05)。2)VEGF蛋白表达阳性率54.72%,在单纯手术组中阳性者和阴性者生存率的差异具有显著性(P<0.05),在术后化疗组中二者的差异无显著性(P>0.05)。3)在单纯手术组中,将p53、c-erbB-2、VEGF3项指标分为3项全阳性、3项全阴性、3项中任1～2项阳性3组,3组生存率的差异具有显著性(P<0.05)。4)在术后化疗组中,将p53、c-erbB-2两项指标分为2项全阳性、2项全阴性、其中任1项阳性3组,3组生存率的差异具有显著性(P<0.05)。5)COX多因素分析,提示组织学类型、p53、c-erbB-2是影响术后化疗效果的独立指标。结论:p53、c-erbB-2、VEGF蛋白表达是预后较差的指标之一,预测p53、c-erbB-2蛋白表达阳性者较阴性者对化疗不敏感,将p53、c-erbB-2。

NRG4基因对胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨神经调节蛋白4(NRG4)对神经胶质瘤细胞的增殖、迁移以及侵袭作用的影响及机制。方法采用逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测神经胶质瘤患者(研究组)、对照组(同期健康志愿者)血清以及星形胶质细胞HA、神经胶质瘤细胞系U251、SHG44、LN229及T98G中NRG4和人表皮生长因子受体4(ErbB4)mRNA表达水平;将U251细胞分为Control组(空白对照)、NC组(转染不带RNA的质粒)、si-NRG4组(转染si-NRG4)和si-NRG4+ErbB4组[转染si-NRG4和ErbB4过表达质粒(pcDNA-ErbB4)]4组,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖情况,划痕愈合实验和Transwell实验分析U251细胞的迁移与侵袭能力变化,免疫印迹(Western blot)检测PI3K/AKT通路中关键蛋白磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)中p110α、p110β亚型、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAKT)中ser473和thr308 a以及蛋白激酶(AKT)表达水平。结果研究组血清中NRG4和ErbB4 mRNA表达量明显高于对照组(P<0.0001),神经胶质瘤细胞系U251中NRG4和ErbB4 mRNA相对表达量最高;与NC组比较,si-NRG4组中NRG4基因表达下调,不仅抑制U251细胞的增殖、迁移与侵袭,还降低了PI3 K-p110α,pAKT-ser473 and pAKT-thr308蛋白表达(P<0.05)。结论抑制NRG4表达可以减缓磷脂酰肌醇有关的信号通路PI3K/AKT通路的激活,抑制U251细胞的增殖和迁移,促进U251细胞凋亡,因此NRG4有可能成为治疗胶质瘤的潜在靶点。

大鼠骨髓增生异常综合征基因治疗及其机制研究

目的应用反基因V—erbB寡核苷酸（ODN）产品时大鼠骨髓增生异常综合征（MDS）动物模型进行基因治疗，观察其疗效和可能的毒性反应。方法尾静脉注射或口服治疗。对42只动物应用不同给药方法和剂量进仃治疗。（1）尾静脉注射给药，以常规剂量（D）0．56mg／kg和0．5×D两个剂量对17只大鼠MDS进行治疗。并以8只未经任何治疗的MDS为对照。在2～3个月的观察期，17只大鼠MDS均有骨髓原始和早幼粒细胞百分比（％）的下降，其中，94．1％（16／17）大鼠骨髓象恢复正常或接近正常；对照组8只MDS，3只从RA发展为RAEB，4只死于内脏出血，末见逆转为正常者。（2）口服用药14只动物，分别以1×D、0．5×D和0．25×D3种不同剂量。结果仅1×D有效，其余2种剂量均无效。（3）将反基因V—erbB寡核苷酸与CpG寡核苷酸联合应用，埘MDS、AEL和AML进行尾静脉注射治疗，发现此2种寡核苷酸治疗，显效时间明显缩短。但上述方案仅对MDS和AEL有效，而时AML则无效。（4）疗效原理研究证明，反基因V—erbBODN能抑制大鼠MDS中白血病的发展，而中心错配的反基因V—erbBODN和正基因V—erbBODN则不能。结论在0．56mg／kg剂量下，此产品对大鼠MDS，不论静脉注射或口服用约均有明显的疗效，且毒性不显。治疗恢复期间大鼠平均体重增加98g且生育能力完好，说明此产品具有临床应用价值；反基因V—erbB ODN通过形成巩固三链DNA结构，抑制内源性V—erbB表达和扩增，从而显示疗效。

骨髓增生异常综合征(MDS)基因诊断研究

目的根据Southern印迹杂交结果设计并合成适当引物。方法以32例MDS、13例可疑MDS、53例其他血液病和8例正常人骨髓细胞DNA为模板进行PCR。根据PCR结果和用于上述Southern印迹杂交的限制性酶切位点,设计并合成2个寡核苷酸(Oligos)经地高辛标记,对33例MDS(包括转白血病者),3例可疑MDS和19例其他血液病患者骨髓细胞涂片作原位杂交(ISH)。结果 MDS有共同的PCR产物电池带型。MDS原位杂交均呈阳性反应。对照组19例中仅有1例AA阳性反应,可疑MDS 3例中有2例阳性反应,且杂交信号的增强与MDS转白血病相关(P<0.01),也与SCD阴性相关(P<0.01)。结论建立起MDS PCR基因诊断法,笔者设计的两条Oligos所包含的限制性酶切位点的确是MDS C-erbB重排位置和重排/扩增位置,为MDS基因治疗提供了靶基因的靶位置。

揭开癌症发病和浸润转移的奥秘

本文作者将自己实验室40多年来关于白血病等癌症的发病原理和病因的研究成果与国际上近十几年来有关癌症的干细胞说和癌细胞浸润转移机制进行对接，形成癌症发生发展完整理论即癌症起源于不同组织干细胞癌基因V—erbB突变和扩增，并在组织代偿性增生中发生v-erbB和TS二个癌基因的协同扩增，成为癌症千细胞并在其微环境因素FGF和TGFβ及其受体等协同作用下发展为癌瘤；在TGFβ介导下，癌细胞像中胚层细胞那样发生表型转换（EMT）而浸润和转移，形成新的癌瘤。在对癌症早期成功地建立反基因（Antigene）治疗技术之后，提出晚期癌综合基因治疗的设想。

晚期癌症的治疗策略:从靶向治疗到基因治疗

本文作者基于对白血病等恶性肿瘤发病原理和病因的系统认识和国外最新成果,在对早中期癌症基因治疗成功的基础上,提出晚期癌症的治疗策略,即从癌蛋白和癌基因两个层面上采用两种方案即:①靶向三个癌基因(V-erbB,TS和C-Met),它们分别是癌症致病基因,癌变基因和晚期癌基因)产物的小分子抑制剂和5-氟脲嘧啶核苷(5-Fu);②反基因V-erbB+CpG双寡核苷酸组合方案,相结合。首先采用:①方案消灭大量癌细胞,再用②方案,针对癌干细胞和残余癌细胞进行综合治疗。继续使用第二方案,直到完全缓解5年以上。上述治疗可称为基因产物治疗和基因治疗。希望医者在实践中加以优化和完善。

微小核糖核酸-148a调控胰腺癌细胞中ErbB3的表达

目的 在胰腺癌细胞中寻找并验证微小核糖核酸（miRNA）-148a的下游调控基因.方法 运用生物信息学方法预测miRNA-148a调控的目的基因,构建含目的基因的3’端非翻译区（3＇-UTR）的荧光素酶报告质粒,用脂质体转染miRNA-148a类似物和抑制剂进入胰腺癌细胞BXPC-3,检测荧光素酶活性,确定miRNA-148a是否直接与靶基因3’-UTR结合.同时改变胰腺癌细胞BXPC-3中miRNA-148a表达水平,用Western免疫印迹法在蛋白水平检测靶基因ErbB3表达的变化.统计学处理采用单因素方差分析.结果 生物信息学发现ErbB3和miRNA-148a上有一个保守的结合靶位点.miRNA-148a直接与ErbB3的3’-UTR结合,使荧光素酶活性下降到阴性对照的[-（25.00±4.70）％,F=4.66,P＜O.01]；过表达miRNA-148a后,BXPC-3细胞中ErbB3蛋白水平灰度值下降到阴性对照的[（26.16±4.69）％,F=6.563,P＜O.05].结论 miRNA-148a在胰腺癌细胞株BXPC-3中直接靶向并调控ErbB3的表达.

骨髓增生异常综合征染色体异常与白血病发展

目的:探讨在骨髓增生异常基础上白血病发展。方法:骨髓细胞Brdu-SCD细胞周期检测法和R-带染色体核型分析法,在1989年—1998年间对361例MDS (按FAB分类) 、11例回顾性诊断白血病前期(PL)和73例MDS-RCMD(按WHO分类)以及140例AA和PNH骨髓细胞进行分析。并对18例MDS-RCMD进行V-erbB基因诊断。还对30例MDS和AA进行动态观察。与此同时,有25例MDS转变为急性白血病,它们几乎都是骨髓细胞SCD阴性患者,与回顾性诊断白前的结果相同。结果:1)361例MDS中MDS-RA占91.3 %,核型异常检出率为66.2 %,SCD阴性病例占50.9 %,与以往报道的结果相似。染色体异常检出率高于文献报道。MDS中两项均不正常的病例占31.5 %。2)AA和PNH核型异常检出率为13.5 %,SCD阴性病例占19.2 %。两项指标均明显低于MDS,且两项均不正常患者仅为1.4 %。3)MDS,RCMD,AA和回顾性白前有相同染色体异常,但有不同的克隆性异常检出率。4)MDS从SCD阳性转变为阴性,AA保持阳性或阴性转变为阳性。结论:1)白前和MDS发展为白血病,或白前转变为MDS而后发展为白血病的共同机制在于骨髓细胞SCD阴性.。它可能与胸苷酸代谢异常和胸苷酸合成酶基因扩增并长期积累有关。2)白前、MDS 和AA 可能有共同的细胞克隆起源。这一点已为AA/AML家系研究所证实。

肝硬化肝癌与白血病发病原理相关性研究

目的参照白血病发病原理,探讨肝硬化肝癌发病机制。方法对8例肝硬化患者进行骨髓和外周血细胞遗传学研究,对12例肝硬化患者进行血清叶酸和维生素B_(12)水平测定,并对肝硬化肝癌中发现的V-erbB样基因和白血病V-erbB基因进行同源性分析。结果8例患者骨髓细胞染色体核型正常,但25%患者骨髓细胞SCD阴性(即细胞周期成倍延长),且有相同比例的患者骨髓出现超2n细胞。前者与难治性贫血(MDS-RA)相似,后者与ALL染色体异常类型相同。12例外周血细胞染色体检查中7例染色体脆性增加。血清叶酸水平显著下降,而维生素B_(12)则显著增加,与难治性贫血伴原始细胞增多(MDS-RAEB)相似,提示肝细胞的高度增生。肝癌所谓erbB样基因与V-erbB部分相同。结论肝癌和白血病有相似发病机制和相同致病基因,但激活机制不同。