α-硫辛酸对高糖作用后βTc6细胞的保护作用

目的:研究α-硫辛酸对高糖毒性作用后βTc6细胞胰岛素基因、肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)基因表达的影响,对细胞的保护作用及其机制。方法:培养βTc6细胞,分为NG组(5mmol/L葡萄糖)、HG组(16.7mmol/L葡萄糖)和HG+ALA组(16.7mmol/L葡萄糖+200μmol/Lα-硫辛酸);培养48h后收集细胞培养液,检测胰岛素浓度并提取细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应检测胰岛素及MafAmRNA水平。结果:HG组与NG组比较,胰岛素和MafAmRNA的表达下降(P<0.05或P<0.01);HG+ALA组与HG组相比,胰岛素和MafAmRNA的表达均提高(均P<0.01);而与NG组相比,胰岛素和MafAmRNA的表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:糖毒性可能通过激活βTc6细胞内氧化应激反应使MafA的表达下降,进而导致胰岛素基因表达下降;α-硫辛酸可能通过上调MafA的表达而对β细胞起到保护作用。

胰岛β细胞转录因子MafA的研究进展

肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)是特异表达于β细胞的一种转录因子,参与调节胰岛素合成、分泌和糖代谢等相关基因的表达。MafA特异结合于胰岛素基因C1元件,与结合于A1、E1元件的转录因子胰腺和十二指肠同源盒因子1、β细胞E盒反式作用因子共同调节胰岛素基因的转录。MafA在葡萄糖调节胰岛素基因表达过程中具重要作用,血糖变化可通过改变MafA的表达、稳定性及其与C1元件的结合活性调节胰岛素基因的转录。MafA的变异或缺失与糖尿病发生密切相关。

siRNA干扰MafA对小鼠胰岛β细胞的生长以及胰岛素相关基因的表达分析

目的:探讨肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(MafA)对小鼠胰岛β细胞Min6的增殖以及胰岛素相关基因mRNA及蛋白表达的影响。方法:实验分为MafA siRNA转染的MafA干扰A组、MafA干扰B组、MafA干扰C组及未转染的对照D组、对照E组、对照F组。MafA干扰A组和对照D组培养的葡萄糖浓度为5.6 mmol/L,MafA干扰B组和对照E组为10 mmol/L,MafA干扰C组和对照F组为25 mmol/L。采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测mRNA及蛋白表达,MTT法检测胰岛细胞增殖,ELISA测定胰岛素浓度。结果:在MaFA mRNA及蛋白的表达水平,MafA干扰B组和对照E组、MafA干扰C组、对照F组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。MafA干扰C组Min6细胞增殖水平低于对照F组(P<0.05)。MafA干扰C组Insulin-1、Insulin-2 mRNA相对表达水平均低于对照F组(P<0.05)。MafA干扰C组胰岛素浓度低于对照F组(P<0.05)。结论:MafA基因与小鼠胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌相关,其作用可能与血糖浓度有关。

胰腺十二指肠同源异型盒-1、神经源性分化因子-1及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A三基因修饰小鼠诱导多潜能干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究

目的 观察胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源异型盒-1（PDX-1）、神经源性分化因子-1（NeuroD1）及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A（MafA）对小鼠诱导多潜能干细胞（iPS）分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法 重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-绿色荧光蛋白（GFP）、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP联合转染小鼠iPS细胞,体外培养后逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测胰岛β细胞功能基因表达,免疫荧光检测胰岛素蛋白表达及定位,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测不同糖浓度下胰岛素的分泌量。将胰岛素分泌细胞移植到糖尿病小鼠肝脏,免疫组织化学检测其在体内胰岛素的表达,葡萄糖耐量试验及空腹血糖监测评估移植细胞在糖尿病小鼠体内的功能发挥。结果 三基因转染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛素分泌细胞,RT-PCR结果显示其胰岛β细胞功能基因的表达与小鼠胰岛β细胞株MIN6相似,免疫荧光检测见细胞内有胰岛素合成,ELISA检测结果显示细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性。当葡萄糖浓度为30 mmol/L,胰岛素释放量最高为（0.309 3±0.017 9）ng。免疫组织化学染色显示移植细胞注射区域的肝实质内可见相对集中的棕黄色染色,表明移植细胞有胰岛素分泌。糖耐量试验及空腹血糖监测显示移植细胞能够控制糖尿病小鼠的血糖水平,在体内发挥良好的治疗作用。结论 胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三基因能使小鼠iPS细胞分化为具有显著胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞,在体内发挥一定的治疗作用。