基于HIF-1α/VEGF-α信号通路探讨南续益母颗粒抑制胶原诱导型关节炎小鼠滑膜血管翳生成的作用机制

目的基于缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子α(VEGF-α)信号通路探讨南续益母颗粒(南蛇藤、续断、益母草、红景天等)抑制胶原诱导型关节炎(CIA)小鼠滑膜血管翳生成的作用机制。方法将40只DBA/1雄性小鼠随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组(1 mg·kg^(-1))和南续益母颗粒组(12.33 g·kg^(-1)),每组10只。除正常组外,其余小鼠采用二次免疫法复制CIA小鼠模型。二次免疫后,南续益母颗粒组灌胃给药,每日1次,连续30 d;甲氨蝶呤组每3 d灌胃1次,连续30 d。采用关节炎指数(AI)评分评估小鼠关节炎症程度;采用HE染色法观察小鼠踝关节滑膜病理变化;番红固绿染色法观察小鼠踝关节软骨及骨质结构变化;Micro-CT三维重建观察小鼠踝关节骨皮质表面变化;采用全自动生化分析仪检测小鼠血清C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)水平;免疫组化法检测小鼠踝关节滑膜中血小板-内皮细胞黏附分子1(CD31)、HIF-1α、VEGF-α的表达。结果各组小鼠之间的血清AST、ALT、BUN、CR、RF水平无明显变化(P>0.05)。与正常组比较,模型组小鼠的踝关节及足面明显肿胀,活动度明显受限,AI评分显著升高(P<0.001),血清中的炎症指标CRP水平显著升高(P<0.001);踝关节可见显著滑膜增生(P<0.001)和炎性浸润(P<0.001),血管数量显著增加(P<0.001),踝关节可见显著软骨侵袭和骨破坏(P<0.001);踝关节骨质出现明显局灶性侵蚀,骨表面失去光滑及完整性,部分关节融合呈强直状;踝关节滑膜CD31、HIF-1α、VEGF-α蛋白表达显著上调(P<0.001)。与模型组比较,甲氨蝶呤组和南续益母颗粒组小鼠的踝关节及足面红肿均有改善,小鼠关节活动度基本正常,AI评分显著下降(P<0.01);甲氨蝶呤组小鼠血清CRP水平明显下降(P<0.05),南续益母颗粒组小鼠血清CRP水平有一定程度下降,但差异无统计学意义(P>0.05);甲氨蝶呤组和南续益母颗粒组小鼠踝关节的滑膜增生和炎性浸润均明显减轻(P<0.05),血管数量显著减少(P<0.01,P<0.001),软骨侵袭明显改善(P<0.05),骨破坏程度明显减轻(P<0.05,P<0.01);踝关节骨质破坏程度明显减轻,骨表面轻度粗糙,小部分存在局灶性侵蚀;踝关节滑膜CD31、HIF-1α、VEGF-α蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论南续益母颗粒能够显著改善CIA模型小鼠关节肿胀症状及其病理变化,抑制踝关节滑膜血管翳形成,其作用机制可能与抑制HIF-1α/VEGF-α信号通路激活相关。

VEGF-α诱导对卵巢癌血管生成拟态形成及侵袭、迁移能力的影响

目的探讨细胞因子VEGF-α诱导对卵巢癌SKOV-3和OVCAR-3细胞系血管生成拟态形成及侵袭、迁移能力的影响。方法采用不同细胞因子诱导卵巢癌SKOV-3和OVCAR-3细胞系,通过三维培养来观察卵巢癌细胞形成血管生成拟态的能力;以划痕实验和侵袭实验来判断细胞因子诱导对卵巢癌细胞侵袭、迁移能力的影响。结果三维培养结果表明在VEGF-α组SKOV-3和OVCAR-3细胞可观察到大量、明显的血管样网状结构;细胞划痕试验结果表明卵巢癌细胞系经细胞因子诱导后,其迁移能力明显增强;体外侵袭实验表明VEGF-α能够明显增强卵巢癌SKOV-3和OVCAR-3细胞的体外侵袭能力。结论 VEGF-α能促进卵巢癌细胞系血管生成拟态的形成,并明显增强卵巢癌细胞侵袭和迁移的能力。

加减三甲散对免疫性肝纤维化大鼠肝脏微血管密度和VEGF-α表达的影响

目的:探讨加减三甲散对免疫损伤性肝纤维化大鼠治疗作用的分子机制。方法:SPF级Wistar雄性大鼠24只,随机分成正常组、模型组、加减三甲散组、阳性对照组(复方鳖甲软肝片)。常规饲养7d后给模型组、加减三甲散组、阳性对照组采用猪血清腹腔注射复制免疫性肝纤维化模型。造模后各组均灌胃给药,1次/d,加减三甲散组剂量为8.125g/kg,阳性对照组剂量为0.625g/kg,模型组及正常组予0.9%氯化钠溶液等体积灌胃。治疗60d后麻醉处死大鼠取肝脏,HE和MASSON染色观察病理形态,免疫组化CD34标记检测肝脏微血管密度(MVD),RTPCR和Western blot检测肝组织VEGF-αm RNA及蛋白表达。结果:CD34标记的内皮细胞或细胞丛颜色为浅黄色或棕黄色,CD34主要表达在细胞浆、细胞膜或间质中;与正常组比较,模型组大鼠MVD、HA、LN、VEGF-αm RNA及蛋白表达显著增高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,加减三甲散组及阳性对照组MVD、HA、LN、VEGF-αm RNA及蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论:加减三甲散方可降低肝纤维化大鼠血清HA、LN含量,降低肝组织VEGF-αm RNA及蛋白表达水平,减少肝脏MVD,可能是其促进肝纤维化逆转与恢复的部分分子机制。

甲状腺乳头状癌中HIF-1α、VEGF、COX-2及VEGF-C表达与侵袭转移的关系

目的探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、COX-2和VEGF-C的表达及与血管及淋巴管生成的关系。方法采用免疫组化EnVision法检测PTC中HIF-1α、VEGF、COX-2与VEGF-C的表达,并用CD34与D2-40双重免疫组化技术标记检测微血管密度(micro-vascular density,MVD)及微淋巴管密度(micro-lymphatic vessel density,MLVD),结合临床病理学特征和随访资料进行分析。结果 PTC中HIF-1α、VEGF、COX-2及VEGF-C的阳性率分别为79.5%、72.6%、82.2%和89.0%,均高于非毒性甲状腺肿(P<0.05)。PTC中有淋巴结转移者HIF1α、VEGF、COX-2和VEGF-C表达均高于无淋巴结转移者(P<0.05),HIF-1α、VEGF、COX-2与VEGF-C的表达存在相关性(P<0.05)。淋巴结转移组的MVD及MLVD高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论 PTC中HIF-1α、VEGF、COX-2和VEGF-C的高表达可能促进肿瘤的侵袭和转移,且VEGF、VEGF-C的表达可能由HIF-1α和COX-2协同调节,共同参与淋巴结转移过程。

红景天苷对Lewis肺癌小鼠恶性胸腔积液的抑制作用及其对免疫功能的影响

目的:探究红景天苷(SAL)对肺癌小鼠恶性胸腔积液生成的抑制作用及对其免疫功能的影响。方法:通过胸腔注射Lewis肺癌细胞(LLC)建立C57BL/6小鼠恶性胸腔积液(MPE)模型;建模后随机分为正常组、模型组、SAL组、顺铂组(DDP组)、红景天苷+顺铂联合组(SAL+DDP组);实验结束后,收集各组小鼠胸水并测量胸水体积、生存周期。酶联免疫吸附法(ELISA)检测MPE小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)水平;流式细胞仪定量检测T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及自然杀伤(NK)细胞百分比。结果:MPE模型小鼠经治疗后,与模型组比较,DDP组、联合组小鼠生存周期显著延长(均P<0.01);SAL组、DDP组和联合组MPE体积均显著减少(均P<0.01);SAL组、DDP组和联合组外周血中TNF-α水平显著升高,HIF-1α、VEGF水平显著降低(均P<0.05);SAL组、DDP组和联合组CD3+均显著升高(均P<0.05);SAL组、联合组CD4+显著升高(均P<0.05),DDP组升高无统计学意义(P>0.05);SAL组、联合组CD8+、CD4+/CD8+、NK均显著升高(均P<0.05),DDP组降低无统计学意义(P>0.05)。结论:SAL联合顺铂胸腔灌注抑制肺癌小鼠MPE生成效果显著,可能与HIF-1α-VEGF分子通路抑制以及免疫功能激活有关。

非小细胞肺癌组织COX-2和VEGF-C及C-erbB-2的表达与淋巴结转移的关系

目的研究COX-2、VEGF-C、C-erbB-2在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与淋巴结转移的关系。方法采用免疫组化方法检测52例非小细胞肺癌组织中COX-2、VEGF-C及C-erbB-2的表达水平,结合临床资料进行分析。结果52例肺癌中,COX-2阳性34例(65.4%),VEGF-C阳性33例(63.4%),C-erbB-2阳性35例(67.3%)。COX-2、VEGF-C、C-erbB-2的表达与临床分期、淋巴结转移呈正相关;COX-2、VEGF-C、C-erbB-2之间的表达呈正相关。结论COX-2、VEGF-C、C-erbB-2的表达呈正相关,它们可能在基因水平相互调控;COX-2、VEGF-C及C-erbB-2在NSCLC中的高表达,与肿瘤的发展、淋巴结转移有密切的联系。

HIF-1α、VEGF-C在非小细胞肺癌中的表达及其与淋巴转移的关系

目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与淋巴转移的关系。方法采用PV-9000免疫组织化学法检测58例NSCLC和20例癌旁对照肺组织中HIF-1α、VEGF-C的表达情况,并记数VEGFR-3标记淋巴管内皮细胞的微淋巴管密度(LMVD)。结果HIF-1α和VEGF-C在NSCLC组的阳性表达率分别为65.5%和60.3%,明显高于癌旁对照肺组织(P<0.05);NSCLC组织中HIF-1α和VEGF-C的表达的高低与有无淋巴结转移、TNM临床分期密切相关(P<0.05),而与性别、年龄、病理组织类型以及肿瘤的分化程度无显著相关(P>0.05);LMVD在NSCLC组和癌旁对照组计数分别为6.6±2.4和2.9±1.7,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1α与VEGF-C的表达呈明显相关(rpearson=0.464,P<0.05),HIF-1α与LMVD呈正相关(rs=0.506,P<0.05),VEGF-C与LMVD也呈正相关(rs=0.608,P<0.05)。结论HIF-1α及其靶基因VEGF-C在NSCLC中的表达明显上调,HIF-1α可能通过诱导VEGF-C的过表达参与NSCLC的淋巴管生成,在NSCLC的发生、发展以及转移过程中发挥着重要作用。

局部应用VEGF-165抑制兔颈移植静脉内膜增生的研究

目的探讨局部应用VEGF-165抑制兔颈移植静脉内膜增生的机制。方法健康家兔24只,均建立颈外静脉-颈总动脉移植模型并分为对照组及实验组。对照组移植静脉周围仅应用Pluronic-F-127,实验组移植静脉周围应用Pluronic-F-127+VEGF-165。观察静脉移植血管外膜、内膜增生情况,移植静脉VEGF及eNOS的表达量,增殖细胞核抗原PCNA表达情况。分析外膜厚度与静脉桥血管内膜增生的关系。结果与对照组相比,实验组移植静脉内膜增厚明显减轻、而外膜明显增厚,移植静脉eNOS的表达量明显增加;实验组移植静脉平滑肌细胞向外膜方向迁移;术后免疫组化检查显示,实验组移植静脉血管壁内膜VEGF-165的蛋白含量高;两组移植静脉PCNA的表达量未及明显差异。结论 VEGF-165可以通过增加内皮eNOS表达加速移植静脉血管内皮化,促进移植静脉外膜生长促进平滑肌向外膜迁移减轻移植静脉内膜增厚。

复方黄柏液联合湿性愈合敷料治疗老年深Ⅱ度烧伤难愈性创面的临床观察

目的:探讨复方黄柏液联合湿性愈合敷料对老年深Ⅱ度烧伤难愈性创面的治疗效果。方法:选取2018年3月-2023年3月于承德医学院附属医院烧伤整形科治疗的120例老年深Ⅱ度烧伤难愈性创面患者为研究对象,按随机数字表法分为对照组、高剂量治疗组、低剂量联合组和高剂量联合组4组,每组30例。对照组予1%TBSA创面外用碘伏溶液35 ml及干燥无菌敷料包扎,高剂量治疗组予1%TBSA创面外用复方黄柏液涂剂35 ml及干燥无菌敷料包扎,低剂量联合组予1%TBSA创面外用复方黄柏液涂剂17.5 ml及用湿性愈合敷料包扎,高剂量联合组予1%TBSA创面外用复方黄柏液涂剂35 ml及用湿性愈合敷料包扎,四组均每天换药1次,持续治疗21 d。观测四组患者治疗14 d后创面病理学变化,评价治疗21 d后临床疗效,于7、14、21 d后计算治疗创面愈合率,测定创面组织中血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子-7(FGF-7)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、半胱胺酸天冬氨酸水解酶-3(Caspase-3)水平、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)表达情况及创面组织细胞凋亡率。结果:治疗后,四组创面愈合率、创面VEGF、FGF-7、TNF-α、NF-κBp65水平、创面细胞凋亡率及Caspase-3水平比较,高剂量联合组最优,之后依次是高剂量治疗组、低剂量联合组、对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:复方黄柏液涂剂外用对老年深Ⅱ度烧伤创面临床治疗与使用剂量呈正相关,与湿性愈合敷料联合后临床疗效更佳,可促进生长因子合成释放,改善炎症反应及抑制细胞凋亡促进创面愈合,值得临床推广。

靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白的原核表达、纯化及其体外活性

目的原核表达、纯化靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白,并检测其体外靶向性和抗肿瘤效应。方法从人肺腺癌A549细胞中扩增VEGF-α-Gal融合基因,插入pQE30载体,构建重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal,转化至大肠杆菌M15中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组融合蛋白的表达量及表达形式,Western blot分析重组蛋白的反应原性。经Ni-AgaroseHis标签蛋白纯化试剂盒纯化重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,包涵体复性后,通过体外细胞黏附试验评价其VEGFR靶向性,血清杀伤试验分析其α-Gal模拟表位的体外抗肿瘤活性。结果重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约为18 000,诱导5 h表达量最高,约占菌体总蛋白的15%,主要以包涵体形式表达;重组融合蛋白可分别与抗VEGF、抗α-Gal抗体特异性结合;纯化的重组蛋白纯度约为90%,可黏附VEGFR+的A549细胞,且其α-Gal模拟表位在人新鲜血清的参与下,对A549细胞产生了明显的溶细胞效应。结论成功表达并纯化了重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,该蛋白不但具有VEGFR靶向性,还兼具α-Gal表位功能,为研发新型靶向肿瘤生物制剂奠定了基础。

牙周基础治疗对龈沟液和血清内皮素、VEGF-A和TNF-α水平的影响

目的:观察非手术性牙周治疗对龈沟液和血清中内皮素(endothelin,ET)、血管内皮细胞生长因子A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的影响.方法:收集2017年10月-2018年6月于广州中医药大学深圳医院就诊的牙周炎患者57例及同期来院进行体检的43名健康人,分别作为牙周炎组与正常对照组.牙周炎组患者给予龈下深刮和根面平整治疗6周.检测2组受试者治疗前、后牙龈探诊出血(bleeding on probing,BOP)率、菌斑指数(plaque index,PI)、探诊深度(probe depth,PD)、临床附着水平(clinical attachment level,CAL)及牙龈指数(gingival index,GI)等牙周临床参数,以及龈沟液与血清中内皮素、VEGF-A和TNF-α水平,分析牙周炎患者治疗前龈沟液中ET水平与VEGF-A及TNF-α水平的关系.采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析.结果:正常对照组受试者BOP、PI、PD、CAL及GI等牙周临床参数均显著小于牙周炎组患者(P<0.05);牙周炎组患者治疗前BOP、PI、PD、CAL及GI等牙周临床参数均显著大于治疗后(P<0.05);治疗后,牙周炎组患者龈沟液与血清中ET、VEGF-A及TNF-α水平较治疗前显著下降(P<0.05);且牙周炎组患者治疗前、后龈沟液与血清中ET、VEGF-A及TNF-α水平均显著大于正常对照组(P<0.05);牙周炎患者治疗前龈沟液中ET水平与VEGF-A水平无显著相关性(P>0.05),但治疗前龈沟液中ET水平与TNF-α水平呈显著正相关(P<0.05).结论:非手术性治疗可降低牙周炎患者龈沟液与血清中ET、VEGF-A、TNF-αt水平,改善患者牙周情况.龈沟液中ET水平与TNF-α水平呈显著正相关.

VEGF-E通过VEGF受体2特异性调控诱导正常和恶性组织中血管瘤样病变发生

病毒性VEGF-E（ov VEGF-E）属VEGF-A家族,在口疮病毒基因中被发现。与VEGF-A、B、C、D、胎盘生长因子（Pl GF）和蛇毒VEGF（sv VEGF）属同一家族成员。ov VEGF-E是VEGF家族中潜在的血管新生因子,其生物活性与VEGF-A相似,可促进血管内皮细胞分裂增殖。

湿润烧伤膏对大鼠肛瘘术后急性感染创面模型愈合的影响及作用机制研究

目的:观察湿润烧伤膏(MEBO)对大鼠肛瘘术后急性感染创面模型肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,血管内皮生长因子(VEGF)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Bax的mRNA水平的影响,探讨MEBO促进大鼠肛瘘术后急性感染创面模型愈合的作用机制。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为MEBO组、易孚组和生理盐水组各10只,制成SD大鼠肛瘘术后急性感染创面模型。造模成功后次日开始药物治疗,MEBO组大鼠创面局部外敷美宝MEBO,易孚组大鼠创面局部外敷易孚,生理盐水组大鼠创面局部外敷生理盐水。治疗第3、7、14d,观察3组大鼠创面愈合情况,计算3组大鼠创面治疗后的创面愈合率,采用免疫组化测定创面模型内TNF-α的水平;给药3、14d采用RT-PCR测定创面模型内VEGF、Bcl-2和Bax的mRNA的水平。结果:治疗后第3d,3组大鼠创面愈合率比较差异均无统计学意义(P>0.05),治疗后第7、14d,与生理盐水组比较MEBO组大鼠创面愈合率显著提高(P<0.01),与易孚组比较MEBO组大鼠创面愈合率显著提高(P<0.05);在创面治疗第3、7、14d,与生理盐水组比较MEBO组创面模型内TNF-α的含量显著降低(P<0.01),与易孚组比较MEBO组创面模型内TNF-α的含量显著降低(P<0.05);在创面治疗第3、14d,与生理盐水组比较MEBO组创面内VEGF和Bcl-2的mRNA的水平显著提高(P<0.01),MEBO组创面内Bax的mRNA的水平显著降低(P<0.01),与易孚组比较MEBO组创面内VEGF和Bcl-2的mRNA的水平显著提高(P<0.05),MEBO组创面内Bax的mRNA的水平显著降低(P<0.05)。结论:MEBO能显著提高大鼠肛瘘术后急性感染创面模型的愈合率,降低大鼠肛瘘术后创面组织中降低TNF-α含量、提高VEGF的mRNA表达,增大Bcl-2/Bax的比值。MEBO促进大鼠肛瘘术后急性感染创面模型愈合的机制可能与降低TNF-α含量、提高VEGF的mRNA水平,增大Bcl-2/Bax的比值有关。

桔梗汤促进肺脏Th1细胞募集及拮抗肿瘤肺脏转移的作用机制研究

目的:探讨桔梗汤(platycodon decoction,PD)促进肺脏Th1细胞募集及拮抗肿瘤肺脏转移的作用机制。方法:24只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常对照组(CTRL组)和PD用药组(PD组),PD组灌胃PD 2.925 g/(kg·d);18只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常对照组(CTRL组)、B16黑色素瘤肺转移模型组(B16组)和PD治疗组(B16+PD组),除正常对照组外,B16组和B16+PD组小鼠尾静脉注射B16黑色素瘤细胞,其中PD治疗组前3 d开始灌胃PD。利用流式细胞术检测小鼠肺脏Th1细胞及其特征性趋化因子受体CXCR3和功能因子IFN-γ的表达变化;RT-qPCR技术和单细胞测序检测肺脏中CXCL9、CCL5、IFN-γ、GZMB的表达水平。结果:与未用药小鼠相比,连续灌胃桔梗汤10 d后,小鼠肺脏Th细胞比例和数量显著升高(P<0.001);Th细胞中CXCR3、IFN-γ表达阳性比例均明显上升(P<0.001,P<0.01);肺组织中CXCL9(P<0.001)、CCL5(P<0.05)、IFN-γ(P<0.01)、GZMB(P<0.05)表达升高。在B16黑色素瘤肺脏转移模型中,桔梗汤治疗可显著降低小鼠肺脏肿瘤克隆数(P<0.01)。与肿瘤模型组相比,桔梗汤治疗组小鼠肺脏CXCR3+Th细胞、IFN-γ+Th细胞比例和数量升高(P<0.001,P<0.01);肺脏肿瘤微环境中趋化因子CXCL9和CCL5的转录水平上调,肺脏Th1细胞IFN-γ、GZMB的转录水平也显著上调。结论:桔梗汤可通过增强肺脏趋化因子CXCL9、CCL5的表达,促进CXCR3+Th1细胞在肺脏肿瘤微环境中的募集,增强局部IFN-γ和GZMB的表达,改善肺脏免疫微环境,发挥拮抗肿瘤肺脏转移的药理作用。

复方蟾酥胶囊对小鼠Lewis肺癌移植瘤的药效学研究

目的:探讨不同剂量复方蟾酥胶囊对C57BL/6J小鼠Lewis肺癌的抑制作用。方法:选取60只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,随机分为空白组10只和造模组50只。空白组单独饲养,造模组采用小鼠Lewis肺癌细胞株(LLC)进行肺癌肿瘤右侧腋窝皮下造模,造模成功后随机分为模型组、顺铂组和复方蟾酥胶囊低、中、高剂量组,每组各10只。顺铂组隔日腹腔注射顺铂,复方蟾酥胶囊低、中、高剂量组每天用不同剂量复方蟾酥胶囊溶液[0.1365、0.273、0.546 g/(kg·d)]灌胃,空白组不予处理;模型组灌胃生理盐水,14 d后处死小鼠并取出肿瘤组织及肺组织。采用ELISA法、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法、HE染色检测小鼠肿瘤组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达、蛋白表达及肺组织病理情况来测定肿瘤抑制情况。结果:与模型组比较,复方蟾酥胶囊中剂量组及顺铂组瘤重显著降低(P<0.05),TNF-α水平降低(P<0.05,P<0.01),显著上调Caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01,P<0.0001),显著下调VEGF mRNA和蛋白的表达水平(P<0.01,P<0.001);模型组肺组织中多见肺泡壁增厚,伴有较多淋巴细胞与中性粒细胞浸润,局部支气管可见上皮细胞坏死,核碎裂,有明显肺水肿及出血,顺铂组和复方蟾酥胶囊各剂量组能明显改善上述情况,且肺泡腔内有嗜酸性浆液样物质渗出。结论:复方蟾酥胶囊具有抑制Lewis肺癌瘤体生长的作用。

黄芪甲苷对慢性哮喘模型小鼠气道重塑的影响

目的观察黄芪甲苷对慢性哮喘小鼠模型气道重塑的影响。方法 48只BALB/c小鼠按随机原则分成正常对照组、哮喘组、黄芪甲苷组、布地奈德组,每组12只。卵蛋白致敏,气道激发8周。黄芪甲苷组和布地奈德组分别给予黄芪甲苷溶液(50 mg·kg-1)灌胃,布地奈德混悬液(8 ml)雾化,每日1次,共8周。末次激发24 h后,每组取6只小鼠评价呼气阻力,支气管肺泡灌洗液(BALF)观察炎症细胞计数,HE染色和Masson染色观察气道炎症和上皮下纤维化情况,ELISA检测BALF中血管内皮生长因子(VEGF)水平,免疫组织化学检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和VEGF蛋白表达。结果黄芪甲苷能够明显抑制慢性哮喘小鼠模型的气道炎症、气道高反应性和气道重塑。黄芪甲苷治疗后哮喘小鼠BALF中VEGF含量明显降低,哮喘小鼠肺组织高表达的α-SMA和VEGF蛋白水平也明显降低。结论黄芪甲苷能够抑制慢性哮喘小鼠模型的气道重塑,其机制可能通过抑制VEGF表达而实现。

急性高原肺水肿患者血清中VEGF,TNF-α,IL-6及NO的含量变化

目的:检测高原肺水肿患者发生及转归过程中内皮生长因子(VEGF),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-6(IL-6)和一氧化氮(NO)的含量变化,探讨高原肺水肿发生发展可能的病理生理机制。方法:收集10例高原肺水肿患者治疗前和转归后的血清样本,采用酶联免疫法和硝酸还原测定VEGF,TNF-α,IL-6和NO的含量。结果:VEGF在高原肺水肿发病时血清的含量为(167.9±26.5)pg/ml,而转归之后其含量显著降低为(53.1±17.0)pg/ml,(P<0.01);TNF-α在血清中的含量从发病时的(86.2±24.1)pg/ml减少到转归后的(29.2±6.8)pg/ml,(P<0.05),有显著性差异。而IL-6的水平也从发病时的(32.3±16.5)pg/ml变化为转归后的(12.5±8.0)pg/ml,虽然有下降的趋势,但没有统计学差异。而高原肺水肿患者血清中的NO水平从发病时的(33.8±3.3)μmol/L明显的升高到转归后的(74.1±6.2)μmol/L,(P<0.01)。结论:VEGF,TNF-α,IL-6和NO参与了高原肺水肿的发生和转归过程。

黄连素通过NF-κB信号通路对TNF-α诱导的VEGF表达的影响

目的观察黄连素对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及探讨其可能机制。方法实验分两部分,第1部分:以10ng/mL的TNF-α分别作用人肝癌细胞(HepG2)0、12、24、48h;第2部分:分别以0、10、25、50μmol/L的黄连素预孵育HepG2细胞24h后,继续与TNF-α共孵育24h。MTT法检测黄连素对HepG2细胞增殖能力的影响;Real-time PCR检测各组细胞VEGF mRNA水平;Western blot检测各组细胞VEGF、IκBα、NF-κB p65蛋白表达;ELISA检测NF-κB的活性。结果黄连素对HepG2细胞生长的抑制能力呈浓度依赖性;TNF-α显著上调HepG2细胞中VEGF mRNA和蛋白表达且呈时间依赖性;黄连素显著下调TNF-α诱导的HepG2细胞中VEGF mRNA和蛋白表达且呈浓度依赖性;TNF-α显著下调IκBα表达且呈时间依赖性,上调NF-κB P65的表达及NF-κB活性且呈时间依赖性;黄连素显著上调IκBα表达且呈浓度依赖性,下调NF-κB P65的表达及NF-κB活性且呈浓度依赖性。结论 TNF-α在HepG2细胞中能上调VEGF的表达,而黄连素能下调由其诱导的VEGF表达,可能是通过NF-κB信号通路所介导的。

西藏大骨节病患者血清Se与几种细胞因子含量的变化

目的:测定大骨节病患者和正常对照血清中硒和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)和白介素-1(IL-1β)的水平。从细胞因子角度为研究其发病机制提供实验依据。方法:在西藏拉萨尼木县和墨竹工卡县的大骨节病区随机选取大骨节病患者30例(患者组),病区正常人30例(病区内对照组),在拉萨非大骨节病区选健康志愿者30例(病区外对照组),3组人群年龄和性别没有显著性差异。采取静脉血离心制备血清。采用荧光法测定血清Se,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中细胞因子水平。结果:西藏大骨节病病区患者和正常人血清中Se低于非大骨节病区正常人;患者血清中TNF-α、VEGF和IL-1β的水平高于正常。血清Se与TNF-α、IL-1β水平呈负相关趋势。结论:低硒和血清中细胞因子水平升高在KBD的发病过程中起着某种作用。

早期卵清蛋白诱导的兔类风湿性关节炎模型的建立与评估

目的:探索鸡卵蛋白诱导性兔类风湿性关节炎模型在早期关节中的应用,并评估超声引导下AIA模型关节腔穿刺活检,在活体中连续动态地获取病理标本的可行性、安全性。方法:将25只新西兰大白兔卵蛋白诱导的类风湿性关节炎组(AIA组)20只,对照组5只。在造模后高频超声分别观察超声影像特点。以ELISA法检测VEGF和TNF-α水平。在4、8、12、15周,超声引导下活检,获取滑膜病理,制作病理切片,镜下观察病理改变。结果:(1)模型各时间观测点测量的AIA组滑膜厚度、VEGF、TNF-α均高于对照组基线水平,具有显著性差异(P<0.05)。(2)关节炎模型4周至8周期间,以病理学评分作为金标准,滑膜厚度、VEGF、TNF-α结果与病理学评分具有相关性。(3)超声引导下滑膜活检成功率为95%,术后无感染、出血、关节骨质损伤的情况。结论:(1)卵清蛋白诱导的兔类风湿关节炎模型可作为观察早期(8周前)关节炎病理生理改变的研究模型。(2)超声引导下的滑膜活检,可有效安全地获取病理标本。