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Expression of VEGF165 and VEGF165b during ovarian follicular development
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作者 Chinnarat Changsangfa Bongkoch Turathum +1 位作者 Morakot Sroyraya Khwanthana Grataitong 《Asian pacific Journal of Reproduction》 2023年第6期281-287,共7页
Objective:To investigate the role of vascular endothelial growth factor(VEGF)165a,VEGF165b,and VEGF receptor(VEGFR)in the development of bovine follicles.Methods:We cultured follicular cells that were collected from s... Objective:To investigate the role of vascular endothelial growth factor(VEGF)165a,VEGF165b,and VEGF receptor(VEGFR)in the development of bovine follicles.Methods:We cultured follicular cells that were collected from small,medium,and large sized bovine follicles with estrogen and measured the expression of VEGF,VEGFR2 and VEGF165b by Western blot analysis and immunofluorescence.Results:The expression of VEGF165 increased in all follicle sizes and the expression of VEGF165b was increased in the small and large follicles after culturing in an estrogen containing medium.The expression of VEGFR2 was increased in the medium and large follicles after culturing with estrogen for 96 h.VEGF165 was activated at 100 ng/mL estrogen in the large follicles for 96 h.In addition,VEGFR2 was upregulated in the medium and large follicles after treated with 100 ng/mL estrogen for 96 h.Conclusions:This evidence suggests that the expression of VEGF165 and VEGFR is associated with estrogen stimulation during the development of bovine follicles and in an autocrine or paracrine manner.This reveals an advantage during oocyte maturation in vitro. 展开更多
关键词 Ovarian follicles Vascular endothelial growth factor VEGF VEGFR2 vegf165B Estrogen stimulation
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VEGF165b和VEGF165在胃癌组织中的表达及与预后的关系 被引量:1
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作者 关云艳 诸静芬 +3 位作者 欧希龙 吴海荣 吴锡平 王倩 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第27期41-44,共4页
目的研究VEGF165b和VEGF165在胃癌及癌旁正常组织中的表达及胃癌组织中VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA与预后的关系。方法分别应用实时RT-PCR和免疫组织化学法检测胃癌及癌旁正常组织中VEGF165b和VEGF165的基因及蛋白表达,并对患者进行2... 目的研究VEGF165b和VEGF165在胃癌及癌旁正常组织中的表达及胃癌组织中VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA与预后的关系。方法分别应用实时RT-PCR和免疫组织化学法检测胃癌及癌旁正常组织中VEGF165b和VEGF165的基因及蛋白表达,并对患者进行2年的随访,比较VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA比值及这两种蛋白表达水平在胃癌及癌旁组织中的变化;同时分析VEGF165b与VEGF165蛋白表达的相关性以及胃癌组织中VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA与预后的关系。结果在胃癌组织中VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA低于癌旁正常组织中的水平;在癌旁正常组织中VEGF165b基因及蛋白表达强于VEGF165,在胃癌组织中VEGF165b基因及蛋白的表达则低于VEGF165,而且两者表达呈负相关关系;此外,在两年内死亡的患者中VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA明显低于生存患者中的比值水平。结论与正常组织相比,胃癌组织中存在VEGF165b向VEGF165基因及蛋白水平上的优势转换,这种变化有望成为治疗胃癌的新靶点。 展开更多
关键词 vegf165B vegf165 实时RT-PCR 免疫组织化学 胃癌
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hVEGF165基因克隆及其在COS-7细胞中的表达 被引量:1
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作者 葛建军 周正春 +4 位作者 陈兵 张胜权 罗欣 徐从贞 汪思应 《中国胸心血管外科临床杂志》 CAS 2005年第3期185-188,共4页
目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcDNA3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)... 目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcDNA3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,聚合酶链反应(PCR)法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-his-B中,构建pcDNA3.1/hVEGF165重组体。用脂质体介导将其转染COS-7细胞,蛋白印迹(Westernblotting)法检测rhVEGF165的表达蛋白。结果用RT-PCR方法从胎儿心肌组织中获得了正确的hVEGF165基因序列,并成功构建pcDNA3.1/hVEGF165,且实现转染COS-7细胞的瞬时表达。结论构建的pcDNA3.1/hVEGF165转染真核细胞COS-7能够表达rhVEGF蛋白。 展开更多
关键词 COS-7细胞 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 真核表达载体PCDNA3.1 基因克隆 聚合酶链反应(PCR) 人血管内皮生长因子 vegf165基因 rhvegf165 RT-PCR方法 COS7细胞 缺血性心脏病 VEGF蛋白 心肌组织 脂质体介导 基因治疗 核糖核酸
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抗人VEGF165单链抗体的构建与表达 被引量:7
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作者 赵泽国 杨治华 +3 位作者 冉宇靓 刘军 孙立新 董志伟 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期92-95,共4页
目的为降低鼠源抗体对人体的免疫原性 ,构建表达了 Vm D11的单链抗体。方法用 overlap PCR构建出单链抗体的基因 ,克隆入表达载体 p Kp L- 3a,在大肠杆菌 pop2 136中表达 ,采用抗原结合 EL ISA和竞争抑制 EL ISA测定活性。结果经SDS- P... 目的为降低鼠源抗体对人体的免疫原性 ,构建表达了 Vm D11的单链抗体。方法用 overlap PCR构建出单链抗体的基因 ,克隆入表达载体 p Kp L- 3a,在大肠杆菌 pop2 136中表达 ,采用抗原结合 EL ISA和竞争抑制 EL ISA测定活性。结果经SDS- PAGE检测 ,诱导后的细菌表达了 2 6 k D的蛋白 ;Western Blot证实该蛋白为表达的单链抗体。经变性、复性后 ,该单链抗体可特异结合人 VEGF16 5抗原 ,并与 Vm D11具有相同的抗原结合位点。结论成功构建和表达了抗人 VEGF16 5单链抗体 ,可望进一步应用于肿瘤复发转移的诊治研究。 展开更多
关键词 vegf165 单链抗体 原核表达 肿瘤
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体外重组表达血管生长因子VEGF165单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:2
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作者 孔桂美 张小荣 +3 位作者 刁亚利 吴克艳 刘秋云 卜平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1098-1102,共5页
目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础。方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得... 目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础。方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得重组人VEGF165蛋白,将重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,制备人VEGF165高效价的mAb。通过鸡胚血管形成抑制实验、HUVEC迁移抑制实验以及HUVEC血管形成抑制实验,对获得的人VEGF165特异性mAb进行进一步鉴定。结果:成功地从脐静脉血管内皮细胞中克隆出人VEGF165基因,并在大肠杆菌表达系统中获得高效表达,以纯化重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,筛选获得5株分泌人VEGF165特异性mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为5A6、3F5、6H3、7D10、7A10,其中5A6、3F5、6H3、7D10分泌的mAb亚类为IgG2a,7A10分泌的mAb亚类为IgG2b,抗体轻链均为κ链。5株mAb均能抑制鸡胚血管形成、抑制HUVEC迁移和及血管形成。结论:所获得的mAb具有效价高,活性强的优点,为抗肿瘤血管研究中进一步研究VEGF165的生物学作用提供了重要的基础。 展开更多
关键词 vegf165 单克隆抗体 HUVEC 血管形成 细胞迁移
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重组VEGF165在哺乳动物细胞中表达及其生物学活性 被引量:2
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作者 贺立新 马彩虹 +1 位作者 曹玉珏 李冬海 《临床和实验医学杂志》 2011年第18期1411-1414,共4页
目的构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-血管内皮生长因子(VEGF)165并在哺乳动物细胞中实现目的基因的表达,对目的蛋白进行鉴定和生物学活性分析。方法分子生物学方法将扩增的VEGF165基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),在脂质体介导下将重... 目的构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-血管内皮生长因子(VEGF)165并在哺乳动物细胞中实现目的基因的表达,对目的蛋白进行鉴定和生物学活性分析。方法分子生物学方法将扩增的VEGF165基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),在脂质体介导下将重组质粒转染至哺乳动物细胞NIH 3T3并进行抗生素压力筛选,采用双抗夹心ELISA、SDS-PAGE和免疫印迹方法对目的蛋白在转染细胞中的特异表达进行鉴定,在血管内皮细胞ECV304上对表达产物的细胞结合活性和促增殖活性进行分析。结果构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-VEGF165成功转染NIH3T3,获得加压筛选的重组细胞,目的基因得到稳定表达,目的蛋白能与血管内皮细胞ECV304特异结合,并具有促内皮细胞增殖活性。结论应用pcDNA3.1(+)-VEGF165载体转染的NIH 3T3细胞可稳定表达具生物学活性的VEGF165重组蛋白。 展开更多
关键词 vegf165 转染 筛选 表达 鉴定 活性
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rhBMP-2、VEGF165双基因转染脂肪干细胞复合支架对体外成骨分化的影响 被引量:3
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作者 孔劲松 阮建伟 +2 位作者 黄杨 宫小康 王海宝 《浙江创伤外科》 2016年第4期608-610,共3页
目的观察重组人骨形态发生蛋白-2(rh BMP-2)、血管内皮生长因子165(VEGF165)双基因转染脂肪干细胞(ADSCs)复合支架对体外成骨分化的影响。方法培养体外犬脂肪干细胞,构建携带rh BMP-2和VEGF165基因的重组慢病毒表达载体,将转染细胞接种... 目的观察重组人骨形态发生蛋白-2(rh BMP-2)、血管内皮生长因子165(VEGF165)双基因转染脂肪干细胞(ADSCs)复合支架对体外成骨分化的影响。方法培养体外犬脂肪干细胞,构建携带rh BMP-2和VEGF165基因的重组慢病毒表达载体,将转染细胞接种到TCP支架,检测转染后细胞附着生长与增殖活性,并以实时定量PCR实验测定rh BMP-2和VEGF165m RNA表达水平,以ELISA试剂盒测定成骨分化标记物骨碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)水平。结果与对照组相比,其余3组的rh BMP-2 m RNA表达水平明显升高,且双基因组和rh BMP-2组高于VEGF165组;其余3组的VEGF165 m RNA表达水平也均明显升高,且双基因组和VEGF165组高于rh BMP-2组,其组间差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,其余3组ALT、OCN、OPN水平均升高,且双基因组高于rh BMP-2组和VEGF165组,rh BMP-2组高于VEGF165组,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 rh BMP-2、VEGF165双基因转染ADSCs复合支架能够有效提高体外ADSCs成骨分化相关因子ALP、OCN、OPN的合成与分泌,利于促进成骨分化。 展开更多
关键词 RHBMP-2 vegf165 双基因转染 脂肪干细胞复合支架
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人VEGF165基因的克隆、表达和活性鉴定 被引量:2
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作者 韦方 邓云坤 乔慧 《贵州医药》 CAS 2005年第1期3-6,共4页
目的 克隆人VEGF165基因,构建其真核表达质粒,转染293细胞,并鉴定表达VEGF的生物学活性。方法 采用PCR法从人心脏cDNA文库钓取人VEGF165基因,插入pUC19载体测序后与真核表达质粒pAdTrackCMV连接,阳离子脂质体Lipofectamin介导VEGF基因转... 目的 克隆人VEGF165基因,构建其真核表达质粒,转染293细胞,并鉴定表达VEGF的生物学活性。方法 采用PCR法从人心脏cDNA文库钓取人VEGF165基因,插入pUC19载体测序后与真核表达质粒pAdTrackCMV连接,阳离子脂质体Lipofectamin介导VEGF基因转染293细胞,Northem blot和Western blot法分别检测VEGFmRNA和蛋白的表达,Miles试验进行活性鉴定。结果(1)琼脂糖凝胶电泳分析得到两个片段,分别为582bp的VEGF165cDNA和2.68kb的pUC19线性质粒,结果与理论值相符,VEGF165测序结果与GENE BANK中VEGF165序列完全一致。(2)转染293细胞后表达绿色荧光蛋白,转染后第3天(1 024pg/ml)和5天(986pg/ml)VEGF表达最高,明显高于转染前(102pg/ml)。(3)Miles试验结果显示,用转染AdTrackCMV-VEGF165细胞培养上清皮下注射后10分钟左右皮丘变为蓝色,成倍连续稀释后,出现蓝斑的时间延长,蓝斑范围也相应缩小。而注射未转染293细胞培养上清和生理盐水组则未见蓝斑出现。结论 成功克隆人VEGF165基因,并表达出具有生物学活性的VEGF蛋白。 展开更多
关键词 vegf165 转染 表达 293细胞 蓝斑 基因 UC 活性鉴定 克隆人 测序
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活血益气方药物血清对转染VEGF165脐静脉内皮细胞分泌NO、eNOS的影响 被引量:2
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作者 张冬梅 陈萌 +3 位作者 吴爱明 娄利霞 李丽娜 吕晞滢 《中西医结合心脑血管病杂志》 2011年第10期1225-1227,共3页
目的探讨活血益气方及其拆方含药动物血清对pcDNA3.1-VEGF165质粒转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)的影响。方法通过构建pcDNA3.1-VEGF165重组质粒,并瞬时转染至HUVEC,制备血管内皮生长因子(VE... 目的探讨活血益气方及其拆方含药动物血清对pcDNA3.1-VEGF165质粒转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)的影响。方法通过构建pcDNA3.1-VEGF165重组质粒,并瞬时转染至HUVEC,制备血管内皮生长因子(VEGF)信号通路激活细胞模型。同时,制备活血益气方及其拆方含药动物血清,作用于转染后的HUVEC,采用Western blot法检测VEGF蛋白的表达,Griess反应法测定细胞上清NO的表达,ELISA法测定细胞上清eNOS的表达。结果活血益气方不仅可以促进转染后HUVEC表达VEGF蛋白,还可以促进其分泌NO及eNOS。活血方和益气方单用均可以促进转染后HUVEC细胞分泌NO,但对eNOS的分泌未见明显影响。结论活血益气方对VEGF信号通路具有促进作用。活血方药和益气方药在这方面均起主要作用,全方作用优于拆方各组。活血益气方治疗性血管生成作用机制可能与其促进内皮细胞分泌NO,从而促进内皮细胞迁移,提高血管通透性有关。其具体作用机制还有待进一步研究。 展开更多
关键词 活血益气方 人脐静脉内皮细胞 vegf165质粒 转染
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肾细胞癌组织与正常组织中VEGF165b的差异表达及其意义 被引量:2
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作者 姜翠苹 王德林 彭波 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期281-284,共4页
目的:研究血管内皮生长因子165b(Vascular endothelial growth factor 165b,VEGF165b)在肾细胞癌(Renalcellcarcino-ma,RCC)组织和正常组织中的表达情况,初步探讨其与肾细胞癌发生发展的关系。方法:(1)用S-P免疫组化法检测30例肾细胞癌... 目的:研究血管内皮生长因子165b(Vascular endothelial growth factor 165b,VEGF165b)在肾细胞癌(Renalcellcarcino-ma,RCC)组织和正常组织中的表达情况,初步探讨其与肾细胞癌发生发展的关系。方法:(1)用S-P免疫组化法检测30例肾细胞癌组织和29例正常肾组织中VEGF165b蛋白的表达情况;(2)用RT-PCR法分别检测32例肾细胞癌组织和30例正常肾组织中VEGF165b mRNA的表达情况。结果:(1)正常肾组织中VEGF165b蛋白表达率为96.55%(28/29),肾细胞癌组织中VEGF165b蛋白的表达率为20.00%(6/30),表达差异有统计学意义(P<0.05)。(2)正常肾组织中VEGF165b mRNA阳性表达率为93.33%(28/30),肾细胞癌组织中VEGF165b mRNA的阳性表达率为18.75%(6/32),具有统计学意义(P<0.05)。结论:VEGF165b在肾细胞癌组织中的表达低于正常肾组织的表达,这种表达差异可能与肾癌发生、发展的机制有关。 展开更多
关键词 肾肿瘤 vegf165B 免疫组织化学 逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)
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ILK和VEGF165b在人肾癌组织中的表达及意义 被引量:1
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作者 蓝建华 唐贤富 +2 位作者 郑兴明 徐小涵 王德林 《生命科学研究》 CAS CSCD 2011年第3期259-262,共4页
探讨整合素连接激酶(ILK)和血管内皮生长因子165b(VEGF165b)在人肾癌组织中的表达及临床意义.利用免疫组织化学S-P法检测35例肾癌组织和25例正常肾组织中ILK和VEGF165b蛋白的表达,并与肾癌临床分期进行比较.35例肾癌组织中,ILK表达率为8... 探讨整合素连接激酶(ILK)和血管内皮生长因子165b(VEGF165b)在人肾癌组织中的表达及临床意义.利用免疫组织化学S-P法检测35例肾癌组织和25例正常肾组织中ILK和VEGF165b蛋白的表达,并与肾癌临床分期进行比较.35例肾癌组织中,ILK表达率为82.9%(29/35),VEGF165b表达率为17.1%(6/35);而25例正常肾组织中ILK表达率为28.0%(7/25),VEGF165b表达率为96.0%(24/25).肾癌中ILK的表达与VEGF165b的表达呈负相关(P<0.01);ILK与VEGF165b的表达均与肾癌的临床分期有关.ILK在肾癌组织中异常活性表达,VEGF165b在肾癌组织的表达明显降低,二者表达成负相关,与肾癌的发生、发展密切相关. 展开更多
关键词 肾肿瘤 整合素连接激酶 血管内皮生长因子165b(vegf165b) 免疫组织化学
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稳定表达人VEGF165的NIH/3T3细胞株的筛选与鉴定 被引量:1
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作者 汤苏阳 谢芳 +4 位作者 杨力 郑岩 夏炜 易成刚 陈晓芳 《武警医学》 CAS 2010年第6期467-469,共3页
目的培养NIH/3T3细胞,并进行慢病毒载体介导的VEGF165基因转染,为建立转基因小鼠血管瘤模型奠定基础。方法采取贴壁培养法分离培养NIH/3T3细胞,细胞随机分为3组,分别为Lenti-VEGF165-EGFP重组慢病毒载体转染组、Lenti-EGFP慢病毒转染组... 目的培养NIH/3T3细胞,并进行慢病毒载体介导的VEGF165基因转染,为建立转基因小鼠血管瘤模型奠定基础。方法采取贴壁培养法分离培养NIH/3T3细胞,细胞随机分为3组,分别为Lenti-VEGF165-EGFP重组慢病毒载体转染组、Lenti-EGFP慢病毒转染组和未转染组,转染后72h荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪分选后用ELISA方法检测VEGF165外分泌。结果 ELISA检测转染后小鼠NIH/3T3细胞,Lenti-VEGF165-EGFP重组慢病毒载体感染组、Lenti-EGFP慢病毒转染组和未转染组培养上清中VEGF165浓度分别为(205±15)、0、0ng/L(P<0.05) 结论 NIH/3T3细胞获得慢病毒载体介导的VEGF165表达基因修饰且稳定传代,为下一步血管瘤动物模型研究奠定了基础。 展开更多
关键词 小鼠成纤维细胞 vegf165基因 慢病毒 转染
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重组人VEGF165蛋白在毕赤酵母中高效表达与多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 王晓 黄晓平 +1 位作者 周宇 刁勇 《华侨大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2014年第6期695-700,共6页
构建pPIC9K-VEGF165分泌型载体,线性化后电击转化至GS115(his4)中,经最小葡萄糖培养基(MD平板)筛选出阳性表达菌株并进行聚合酶链式反应(PCR)验证.菌株发酵上清液经Sephadex G-25,Heparin Sepharose FF和Sephacryl S-100层析介质分离纯... 构建pPIC9K-VEGF165分泌型载体,线性化后电击转化至GS115(his4)中,经最小葡萄糖培养基(MD平板)筛选出阳性表达菌株并进行聚合酶链式反应(PCR)验证.菌株发酵上清液经Sephadex G-25,Heparin Sepharose FF和Sephacryl S-100层析介质分离纯化,目的蛋白纯度达到95%,相对分子质量约为24ku.结果表明:重组人VEGF165蛋白能诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖,提高HUVEC细胞的活性;重组人VEGF165蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测抗体效价达1:51 200. 展开更多
关键词 重组人vegf165蛋白 多克隆抗体 毕赤酵母 高效表达
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VEGF165基因表达载体的构建和鉴定 被引量:5
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作者 马彩虹 贺立新 +1 位作者 曹玉珏 李冬海 《感染.炎症.修复》 2010年第3期143-146,共4页
目的:构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-VEGF165并在哺乳动物细胞中实现目的基因的特异表达,为重组VEGF165进一步的生物学活性和临床研究奠定基础。方法:采用分子生物学方法将扩增的VEGF165基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),在脂质体介导... 目的:构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-VEGF165并在哺乳动物细胞中实现目的基因的特异表达,为重组VEGF165进一步的生物学活性和临床研究奠定基础。方法:采用分子生物学方法将扩增的VEGF165基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),在脂质体介导下将重组质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3,以抗生素培养基筛选抗性细胞,并对抗性细胞进行单克隆化,采用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western Blotting等方法对目的蛋白在细胞中的特异表达进行分析鉴定。结果:完成真核表达载体pcDNA3.1(+)-VEGF165的构建,并成功转染NIH/3T3细胞,筛选到一批G418抗性的阳性细胞,单克隆化的阳性细胞(吸光度值0.345±0.064)与空载体转染(吸光度值0.114±0.012)的对照比较,有显著的VEGF165表达(P<0.01),SDS-PAGE和Western Blotting检测到VEGF165在扩大培养的克隆细胞中的特异表达。结论:应用pcDNA3.1(+)-VEGF165载体转染的NIH/3T3细胞可高效表达具生物学活性的VEGF165重组蛋白。 展开更多
关键词 vegf165 转染 筛选 单克隆化 表达 鉴定
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反义VEGF165腺病毒重组体的构建及鉴定 被引量:3
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作者 王家宁 黄永章 +3 位作者 王俊峰 王卫民 李瑞明 张群林 《郧阳医学院学报》 2001年第1期1-4,共4页
目的 :构建含人反义血管内皮生长因子 16 5 (VEGF16 5 )基因的重组腺病毒载体 ,为采用反义VEGF16 5RNA防治肿瘤的研究奠定基础。方法 :将人VEGF16 5cDNA反向插入到穿梭质粒pHCMVSP1A的CMV启动子之下 ,即pAd -ahVEGF16 5。后者与pJM17通... 目的 :构建含人反义血管内皮生长因子 16 5 (VEGF16 5 )基因的重组腺病毒载体 ,为采用反义VEGF16 5RNA防治肿瘤的研究奠定基础。方法 :将人VEGF16 5cDNA反向插入到穿梭质粒pHCMVSP1A的CMV启动子之下 ,即pAd -ahVEGF16 5。后者与pJM17通过脂质体共转染 2 93细胞 ,经同源重组获得含人反义VEGF16 5基因的重组腺病毒Ad -ahVEGF16 5。通过PCR共扩增法鉴别Ad -ahVEGF16 5的正确与否。根据 2 6 0nm的紫外光吸收值计算病毒滴度。结果 :VEGF16 5cDNA成功地反向插入了pHCMVSP1A载体 ,以重组病毒基因组DNA为模板 ,同时扩增出了5 76bp的反义VEGF16 5基因片段和 86 0bp的腺病毒骨架基因片段 ,证实了Ad -ahVEGF16 5的正确性。病毒滴度为5 .6× 10 11pfu/ml。结论 :成功构建了携带人反义VEGF16 5基因的腺病毒Ad -ahVEGF16 5 ,本研究为采用反义VEGFRNA途径治疗肿瘤的在体。 展开更多
关键词 反义vegf165 腺病毒 反义血管内皮生长因子165 基因重组 治疗 肿瘤
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利用重组人VEGF165制备单克隆抗体的研究
16
作者 孙大军 杨淑华 +2 位作者 李亚萍 杜建时 祁功才 《白求恩医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期475-477,共3页
目的 :制备抗重组人血管内皮生长因子 (VEGF) 16 5单克隆抗体。方法 :构建人 VEGF16 5原核表达载体 p ET- 3a/ VEGF16 5 ,并使其在大肠杆菌中高效表达 ,纯化表达产物。用初步纯化的rh VEGF16 5免疫小鼠制成杂交瘤细胞 ,小鼠腹腔接种 ,... 目的 :制备抗重组人血管内皮生长因子 (VEGF) 16 5单克隆抗体。方法 :构建人 VEGF16 5原核表达载体 p ET- 3a/ VEGF16 5 ,并使其在大肠杆菌中高效表达 ,纯化表达产物。用初步纯化的rh VEGF16 5免疫小鼠制成杂交瘤细胞 ,小鼠腹腔接种 ,收集腹水纯化后制成抗 rh VEGF16 5单克隆抗体。结果 :VEGF16 5诱导的内皮细胞增殖可被本研究制备的单克隆抗体中和 ,并表现出较好的剂量依赖关系。结论 :本研究利用 DNA重组技术制备人 VEGF16 5 ,并利用它进一步制备了抗重组人VEGF16 5单克隆抗体。 展开更多
关键词 载体 重组人vegf165 单克隆抗体 制备 DNA
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VEGF165基因转染真皮多能干细胞的实验研究
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作者 刘志君 徐辉 +2 位作者 粟永萍 冉新泽 许川山 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第18期1854-1856,共3页
目的为获得高表达生物活性血管内皮细胞生长因子VEGF165的皮肤种子细胞,拟将转基因治疗与真皮多能干细胞相结合,为难愈性创面的促愈治疗奠定基础。方法构建真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF165,经脂质体法介导转染真皮多能干细胞;半定量RT-... 目的为获得高表达生物活性血管内皮细胞生长因子VEGF165的皮肤种子细胞,拟将转基因治疗与真皮多能干细胞相结合,为难愈性创面的促愈治疗奠定基础。方法构建真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF165,经脂质体法介导转染真皮多能干细胞;半定量RT-PCR检测VEGF165 mRNA的表达,W estern b lot和酶联免疫ELISA法检测VEGF蛋白的表达;并检测了表达产物的生物活性及转染VEGF(derm almu ltipotential stem cells,DMSCs)增殖活性的变化。结果转染后VEGF165 mRNA和VEGF蛋白的表达均显著增强(P<0.01),约为对照组的1.6倍,且转染VEGF后DMSCs的培养上清显著提高hECV304细胞增殖活性(P<0.01)。MTT结果显示转染VEGF后DMSCs增殖活性显著增高,约为转染空载体组DMSCs的2倍(P<0.01)。结论成功获得了高水平表达并分泌具有生物活性的VEGF的基因治疗种子细胞DMSCs,为下一步动物在体进行基因治疗打下了基础。 展开更多
关键词 vegf165 DMSCs 基因疗法
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经VEGF165转染的成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物的构建与临床应用
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作者 贺立新 马彩虹 +2 位作者 李冬海 曹玉珏 刘强 《临床和实验医学杂志》 2011年第19期1525-1527,共3页
目的构建经血管内皮生长因子165(VEGF165)转染的人成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物,并对其在促进深度烧伤患者创面愈合过程中的作用进行评价。方法将30例深Ⅱ度或Ⅲ度烧伤患者随机分为2组,每组15例。移植转染有VEGF165成纤维细胞-脱细... 目的构建经血管内皮生长因子165(VEGF165)转染的人成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物,并对其在促进深度烧伤患者创面愈合过程中的作用进行评价。方法将30例深Ⅱ度或Ⅲ度烧伤患者随机分为2组,每组15例。移植转染有VEGF165成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物组为实验组,单纯脱细胞异种真皮替代物移植组为对照组。采用分子生物学方法将扩增的VEGF165基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),在脂质体介导下将重组质粒转染至经传代培养的人成纤维细胞,再将转染后的人成纤维细胞接种于猪脱细胞真皮表面得到成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物;而后将此替代物与自体薄皮片移植于深度烧伤患者切痂后创面,对创面愈合情况进行观察并与单纯脱细胞真皮移植组进行比较。结果构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-VEGF165可成功转染人成纤维细胞,经转染的人成纤维细胞可顺利接种于脱细胞真皮形成成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物,替代物移植后实验组患者皮片成活率(90.25±5.39)%,对照组患者皮片成活率(83.98±3.63)%,两者有显著性差异(t=3.737,P<0.01)。实验组新生的毛细血管数量要明显多于对照组。结论经VEGF165转染的人成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物具有显著的促进深度烧伤患者创面愈合的作用。 展开更多
关键词 vegf165 脱细胞异种真皮 转染 移植 烧伤
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6His-hVEGF165融合基因真核表达载体的构建和鉴定
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作者 张显玉 王涛 +1 位作者 陈伟华 庞达 《中国医药导报》 CAS 2010年第7期19-22,共4页
目的:本实验拟构建hVEGF165基因的真核表达载体,为其应用于治疗大鼠缺血皮瓣的研究奠定基础。方法:设计引物P1和P2,在每一个引物的两端分别添加BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点。从人外周血中提取总RNA,用RT-PCR方法得到hVEGF165的cDNA。随后再... 目的:本实验拟构建hVEGF165基因的真核表达载体,为其应用于治疗大鼠缺血皮瓣的研究奠定基础。方法:设计引物P1和P2,在每一个引物的两端分别添加BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点。从人外周血中提取总RNA,用RT-PCR方法得到hVEGF165的cDNA。随后再将得到的cDNA连入中间载体pMD19-T,得到pMD19-T-hVEGF165,双酶切鉴定并测定序列。将hVEGF165的cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA6/HisA中,构建hVEGF165真核表达载体pcDNA6-hVEGF165。结果:对pMD19-T-hVEGF165的测序结果表明,本研究成功地从人外周血中扩增到hVEGF165的cDNA。将hVEGF165定向克隆入真核表达载体pcDNA6/HisA,经双酶切及PCR鉴定,将阳性克隆测序,经测序证实序列正确。结论:本研究成功地构建了VEGF165真核表达载体pcDNA6-hVEGF165,并且目的基因上游融合有His标签。 展开更多
关键词 vegf165 皮瓣 载体构建 融合基因
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骨髓间充质干细胞移植对脑动脉栓塞大鼠VEGF165、Notch1表达的影响
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作者 贺崇欣 汪亮 +2 位作者 曹光东 杜进 杨君 《中南医学科学杂志》 CAS 2018年第6期593-596,620,共5页
为探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑损伤大鼠的改善作用机制,本实验通过建立脑损伤大鼠模型,观察BMSCs移植对脑动脉栓塞大鼠血管内皮生长因子(VEGF) 165、Notch1表达的影响。将45只SD大鼠随机分为假手术对照组、动脉栓塞(MCAO)组、B... 为探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑损伤大鼠的改善作用机制,本实验通过建立脑损伤大鼠模型,观察BMSCs移植对脑动脉栓塞大鼠血管内皮生长因子(VEGF) 165、Notch1表达的影响。将45只SD大鼠随机分为假手术对照组、动脉栓塞(MCAO)组、BMSCs移植组。检测脑组织栓塞区微血管数量,及各组大鼠VEGF165、Notch1蛋白和mRNA的表达。结果发现MACO组、BMSCs移植组大鼠的脑组织中微血管数量明显多于假手术对照组; MACO组和BMSCs移植组的VEGF165与Notch1的蛋白表达、VEGF165与Notch1的mRNA表达均高于假手术对照组; BMSCs移植组较MACO组更高。根据结果推测BMSCs移植可能通过激活Notch信号通路促进VEGF165的表达,而促进脑动脉栓塞区的血管新生。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 干细胞移植 脑动脉栓塞 vegf165 NOTCH1
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