益母草注射液通过其生物碱成分上调Tie-2、VEGFR2和VEGF促进斑马鱼血管新生

目的:研究益母草注射液在斑马鱼血管损伤模型中的促血管生成作用,并阐明潜在的物质基础和分子机制。方法:采用HPLC-PAD和TLC技术检测益母草注射液的主要成分;利用舒尼替尼诱导转基因Tg(flk1:eGFP)斑马鱼血管损伤模型,益母草注射液干预治疗后,测量斑马鱼节间血管(ISVs)长度,QT-PCR检测血管生成相关基因的表达水平。结果:发现益母草注射液的主要成分是水苏碱、胆碱和葫芦巴碱;其中,益母草注射液、葫芦巴碱和胆碱可减轻化学诱导的斑马鱼血管损伤,其作用机制涉及益母草注射液上调Tie-2、VEGF和VEGFR2的表达,其主要成分葫芦巴碱上调Tie-2和VEGF的表达,胆碱上调VEGF和VEGFR2的表达。结论:益母草注射液及其主要生物碱成分可通过上调Tie-2、VEGFR2和VEGF来促进血管生成。

人肝癌Huh7细胞上皮间充质转化与VEGFa/VEGFR2自分泌途径的相关性及华蟾素的调控作用

目的探究华蟾素(cinobufagin,CBG)注射液对人肝癌Huh7细胞血管内皮生长因子a(vascular endothelial growth factor a,VEGFa)/血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)自分泌信号通路及上皮间充质转化进程的影响。方法通过CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验和成球实验检测人肝癌Huh7细胞增殖、迁移、侵袭和成球能力;免疫荧光双标实验对人肝癌Huh7细胞VEGFa/VEGFR2进行共定位分析,ELISA法检测人肝癌Huh7细胞上清液中VEGFa水平,Western blot法检测人肝癌Huh7细胞中VEGFa/VEGFR2通路及上皮间充质转化相关蛋白表达水平。结果CBG注射液能显著抑制人肝癌Huh7细胞的增殖、迁移、侵袭和成球能力;人肝癌Huh7细胞可能存在VEGFa/VEGFR2自分泌途径;CBG注射液能抑制VEGFa的分泌,降低下游p-VEGFR2、p-PI3K、p-AKT及间充质标志物N-Cadherin、Vimentin、Snail蛋白的表达水平,升高上皮标志物E-Cadherin蛋白的表达水平。结论CBG注射液可能通过VEGFa/VEGFR2自分泌途径调控人肝癌Huh7细胞上皮间充质转化。

ATG5和VEGFR2在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

肝癌组织中ATG5的表达与临床病理(TNM)分期的关系,以及二者与肝癌TNM分期的关系。方法 本研究拟选择肝癌临床标本89份,按最大直径及TNM分期分为若干亚组,检测VEGFR2、ATG5蛋白及miRNA的表达,并进行关联研究。结果 VEGFR2、ATG5基因在癌组织中的阳性表达水平明显升高,且在瘤体直径≥50mm基TNMⅡ、Ⅲ分期及以上患者中更高。VEGFR2-miRNA、ATG5-miRNA在癌组织中表达更高。VEGFR2-miRNA、ATG5-miRNA、TNM分期成正向关联,ATG5-miRNA与TNM分期也同样如此。结论 肝癌组织中VEGFR2、ATG5的高表达与肝癌的恶性度及TNM分级相关,可得,VEGFR2、ATG5高参与肝细胞癌的发生、发展。

隔药饼灸对动脉粥样硬化兔胸主动脉VEGF-A、VEGFR-2及DLL4表达的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化兔胸主动脉血管内皮生长因子(VEGF)-A、血管内皮生长因子受体(VEGFR)-2、DLL4表达的影响,探讨其促进受损血管内皮修复的机制。方法将45只兔按随机数字表法分为正常组、模型组、隔药饼灸组、直接灸组和药饼敷贴组,每组9只。正常组采用普通饲料喂养,其余各组采用高脂饲料喂养8周制备动脉粥样硬化兔模型,造模成功后,各治疗组于“巨阙”和双侧“天枢”“丰隆”,或双侧“心俞”“肝俞”“脾俞”予相应处理,30 min/次,每日1次,连续8周。HE染色观察胸主动脉血管壁形态,Western blot检测胸主动脉组织VEGF-A、VEGFR-2、DLL4蛋白表达,ELISA检测血清VEGF含量。结果与正常组比较,模型组兔胸主动脉壁结构受损明显,胸主动脉组织VEGF-A、VEGFR-2、DLL4蛋白表达明显升高(P<0.01),血清VEGF含量明显增加(P<0.01);与模型组比较,隔药饼灸组兔胸主动脉内皮损伤好转,直接灸组和药饼敷贴组兔胸主动脉内皮病理变化有所减轻,隔药饼灸组、直接灸组和药饼敷贴组兔胸主动脉组织VEGFR-2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),直接灸组和药饼敷贴组兔胸主动脉组织DLL4蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),隔药饼灸组和药饼敷贴组兔血清VEGF含量明显减少(P<0.01)。结论隔药饼灸可能通过下调动脉粥样硬化兔胸主动脉VEGF-A、VEGFR-2、DLL4表达,降低血清VEGF含量,促进受损血管内皮修复,从而减轻动脉粥样硬化病变。

血府逐瘀胶囊联合顺铂对小鼠Lewis肺癌移植瘤血管新生及VEGFA、VEGFR2表达的影响

目的探讨血府逐瘀胶囊联合顺铂对小鼠Lewis肺癌移植瘤血管新生及血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)表达的影响。方法从75只C57BL/6小鼠中随机取15只作为正常组,其余小鼠均进行Lewis肺癌荷瘤造模。将造模成功的60只小鼠随机分为模型组、顺铂组、血府逐瘀胶囊组、血府逐瘀胶囊联合顺铂组,每组15只。血府逐瘀胶囊组给予血府逐瘀胶囊0.36 g/kg灌胃,模型组给予生理盐水灌胃,均2次/d;顺铂组给予2 mg/kg的顺铂腹腔注射,2 d 1次;血府逐瘀胶囊联合顺铂组给予0.36 g/kg血府逐瘀胶囊灌胃(2次/d)和2 mg/kg的顺铂腹腔注射(2 d 1次);正常组不给予任何干预。各组连续干预15 d后,统计存活率,摘取瘤组织并称量瘤重,计算抑瘤率,免疫组化法检测肿瘤组织中微血管数量,ELISA法测定血浆VEGFA、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平,免疫印迹法检测肿瘤组织中VEGFA、VEGFR2蛋白表达情况。结果顺铂组和血府逐瘀胶囊联合顺铂组小鼠存活率明显高于模型组和血府逐瘀胶囊组(P均<0.05);血府逐瘀胶囊联合顺铂组瘤重明显低于其他组(P均<0.05),抑瘤率明显高于顺铂组和血府逐瘀胶囊组(P均<0.05),肿瘤组织中微血管数明显少于模型组和血府逐瘀胶囊组(P均<0.05);顺铂组瘤重明显低于模型组和血府逐瘀胶囊组(P均<0.05),抑瘤率明显高于血府逐瘀胶囊组(P<0.05),肿瘤组织中微血管数明显少于其他组(P均<0.05)。顺铂组血浆VEGFA、bFGF水平和肿瘤组织中VEGFA、VEGFR2蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05);血府逐瘀胶囊联合顺铂组血浆bFGF水平和肿瘤组织中VEGFR2蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05)。结论血府逐瘀胶囊联合顺铂对Lewis肺癌荷瘤小鼠具有显著的抑瘤及抑制肿瘤血管新生的作用,其机制可能与VEGFA/VEGFR2信号通路相关。

VEGF/VEGFR2通路在牙髓血运重建术模型大鼠牙髓血管新生中的作用

目的探究血管内皮生长因子(VEGF)/VEGF受体(VEGFR)2在牙髓血运重建术(REPs)中的表达变化,揭示其调控牙髓血管新生的机制。方法取雄性SD大鼠25只,随机分为正常对照组、根尖周炎组、REPs术后7、14、28 d组,每组5只;正常对照组不做任何处理,根尖周炎组于左右两侧下颌第一磨牙处行牙髓摘除术,REPs术后7、14、28 d组在根尖周炎组基础上行REPs。苏木素-伊红(HE)染色观察左侧牙根尖及牙周组织形态变化;免疫组化染色法检测左侧牙根尖及牙周组织VEGF阳性表达情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测右侧牙根尖周组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平;以Western印迹检测右侧牙根尖周组织VEGFR2、骨桥蛋白(OPN)、整合素(αv)β3蛋白表达。结果与正常组相比,根尖周炎组可见牙根管壁薄、根尖孔呈开放状态、根管内坏死物质较多、根尖周炎性细胞浸润等病理现象,根尖周组织TNF-α及IL-1β水平、VEGF阳性表达水平、VEGFR2蛋白表达均显著升高,OPN、αvβ3蛋白表达均显著降低(均P<0.05);与根尖周炎组相比,REPs术后7、14、28 d组根管壁逐渐增厚、根尖孔逐渐闭合,根管内矿化基质、致密结缔组织逐渐生成,根尖周围骨细胞沉积逐渐明显,根尖周组织VEGF阳性表达水平、VEGFR2、OPN、αvβ3蛋白表达显著均增高,TNF-α及IL-1β水平显著均降低(均P<0.05)。结论REPs术可通过激活VEGF/VEGFR2通路,上调OPN、αvβ3蛋白表达,促进牙根生长及牙髓再生。

后肾间充质细胞作用于VEGFR2/3促进成骨细胞成骨

目的:探讨后肾间充质细胞(MMC)及其上清液和其活性成分VEGF-C所作用受体VEGFR2/3对成骨细胞成骨的影响。方法:将MMC与成骨细胞系MC3T3-E1混合培养,检测成骨标志物碱性磷酸酶(ALP)活性与染色情况;茜素红染色法观察矿化结节形成情况。制备MMC上清液,将成骨细胞分为成骨诱导对照组和MMC上清液组,CCK-8法检测细胞增殖活性;检测ALP活性、染色情况与矿化结节形成情况;蛋白质印记法检测成骨相关蛋白Runx2、OCN、OPN的表达水平。加入VEGFR2和VEGFR3的特异性抑制剂Ki8751和MAZ51后,通过检测上述指标观察其促成骨作用有无减弱。结果:混合培养使成骨细胞ALP活性升高、染色增强,细胞表面矿化结节数量增多、体积增大。加入MMC上清液后,成骨细胞增殖活性升高,ALP活性升高、染色增强,Runx2、OCN、OPN表达升高,矿化结节数量增多、体积增大。抑制VEGFR2/3后,MMC上清液的促成骨作用减弱,ALP活性下降、染色减弱,Runx2、OCN、OPN的表达下降,细胞表面矿化结节数量减少、体积减小。结论:MMC可通过作用于VEGFR2/3促进成骨细胞成骨。

阿帕替尼靶向抑制VEGFR-2/STAT3信号通路干预恶性梗阻性黄疸模型大鼠的效果观察

目的:分析靶向抑制血管内皮细胞生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2)/信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路对恶性梗阻性黄疸(malignant obstructive jaundice,MOJ)模型大鼠的干预效果。方法:选取8周龄SPF级SD大鼠随机将其分为5组:假手术组(A组)、模型组(B组)、阿帕替尼低剂量组(42.5 mg/kg,C组)、阿帕替尼中剂量组(85.0 mg/kg,D组)和阿帕替尼高剂量组(170.0 mg/kg,E组),每组10只。A组:行假手术;B、C、D、E组均将Walker-256肝癌株培养出的瘤块植入大鼠距肝门5 mm处的肝中叶、肝右叶的交界部位,以造成胆道癌性狭窄,依次缝合、关腹,制备MOJ模型。从术后起,C、D、E组大鼠每日阿帕替尼溶液灌胃,A、B组大鼠灌胃等体积生理盐水。治疗5周后观察大鼠一般情况,检测肝功能指标、血清肝酶指标,采用Western blot蛋白印迹法检测大鼠移植瘤中p-VEGFR-2、VEGFR-2、p-STAT3、STAT3、Bax和Bcl-2蛋白表达。结果:与A组比,B组总胆红素(total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、间接胆红素(indirect bilirubin,IBIL)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)水平明显升高;与B组比,C组、D组、E组TBIL、DBIL、IBIL、ALP、AST、ALT及肿瘤生长率明显降低,且E组降低水平最显著(P<0.05)。与A组比,B组p-VEGFR-2、p-STAT3、Bax表达水平明显升高,Bcl-2表达水平明显降低(P<0.05);与B组比,C、D、E组p-VEGFR-2、p-STAT3、 Bax表达水平明显降低,Bcl-2表达水平明显升高,且E组降低/升高水平最显著(P<0.05);各组的VEGFR-2和STAT3表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阿帕替尼治疗MOJ的可能机制在于促进癌细胞凋亡,与靶向抑制VEGFR-2/STAT3信号通路活性相关,进而有效缓解MOJ的肝脏微胆管阻塞、减轻肝细胞及肝损伤,上述作用呈剂量依赖性关系,170.0 mg/kg的阿帕替尼效果最佳。

LKB1、VEGFR2在非小细胞肺癌组织中表达及临床意义

目的探究LKB1、VEGFR2在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及临床意义。方法收集病理确诊的NSCLC 52例患者,分别取材自病灶癌组织及癌旁正常肺组织,检测其LKB1、VEGFR2的表达水平,分析其表达情况与临床病理特征的相关性。结果在癌组织中LKB1阳性表达率低于正常组织(61.54%VS96.15%),VEGFR2阳性表达率高于正常组织(57.69%VS5.77%);在淋巴转移、有吸烟史、中低分化、鳞癌、肿瘤直径≥3 cm、分期Ⅲ-Ⅳ患者中LKB1阳性率更低,VEGFR2阳性率更高,鳞癌高于腺癌;二者表达率呈负相关(P均<0.05)。结论LKB1、VEGFR2表达与肺癌临床病理特征密切相关,二者参与肺癌的发生发展;LKB1低表达与VEGFR2高表达提示患者淋巴转移以及低分化程度;二者表达呈负相关。

BET溴域抑制通过阻断VEGFR2介导的PAK1和eNOS激活抑制糖尿病大鼠视网膜病变机制

目的探究BET溴域抑制通过阻断血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)介导的p21激活激酶1(PAK1)和内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)激活抑制糖尿病大鼠视网膜病变机制。方法选择36只雄性SD大鼠,随机选取10只大鼠作为对照组,余下大鼠采用单次注射链脲霉素60 mg/kg建立糖尿病模型。将建模成功的20只大鼠随机分为模型组和BET抑制组,每组10只。对照组大鼠不建模。BET抑制组大鼠建模后,腹腔注射80 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量的JQ1。使用ZEISS数码显微镜和免疫组织化学分析大鼠视网膜心血管生成。通过蛋白质印迹法分析视网膜屏障功能相关蛋白的表达。通过FITC-葡聚糖泄漏实验检测大鼠内外视网膜屏障完整性。通过RT-qPCR分析大鼠视网膜炎症因子的表达。通过酶联免疫吸附试验试剂盒检测大鼠房水VEGF浓度。通过蛋白质印迹法分析视网膜VEGFR2/PAK1/eNOS的蛋白表达。结果与对照组相比,模型组和BET抑制组视网膜新血管生成量、CD34表达、albumin蛋白表达、内外视网膜FITC-葡聚糖泄漏量、IL-1β、iNOS和ICAM-1 mRNA表达、VEGF浓度、视网膜P-PAK1、P-VEGFR2和eNOS蛋白表达均升高,ZO-1和occludin蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,BET抑制组视网膜新血管生成量、CD34表达、albumin表达、内外视网膜FITC-葡聚糖泄漏量、IL-1β、iNOS和ICAM-1mRNA表达、VEGF浓度、P-PAK1、P-VEGFR2和eNOS蛋白表达均降低,ZO-1和occludin蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论BET溴化域通过调节VEGFR2介导的PAK1和eNOS信号通路激活抑制血管生成,降低血管通透性,改善糖尿病大鼠视网膜病变。抑制BET溴化域的策略可能为限制血管生成相关疾病提供一种新的治疗方法。

程序性死亡配体1通过激活c-JUN/VEGFR2信号通路调节卵巢癌血管生成和转移

背景与目的细胞程序性死亡配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)通过与细胞程序性死亡受体1(programmed cell death-1,PD-1)相互作用,在免疫检查点应答中发挥作用,但是,PD-L1在肿瘤细胞中的作用机制尚未阐明。本研究探讨了PD-L1在卵巢癌进展和转移过程中的分子调控机制。方法对良性卵巢肿瘤组织和卵巢癌组织标本进行免疫组化分析,在PD-L1敲减的卵巢癌细胞中进行迁移、侵袭和血管生成实验。通过免疫沉淀、质谱、染色质免疫沉淀、斑马鱼和小鼠实验,探讨PD-L1在卵巢癌中的具体功能和作用的分子机制。结果体内和体外实验结果表明,PD-L1通过促进血管生成促进卵巢癌的转移和侵袭。在机制上,PD-L1直接与血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR2)相互作用,并激活FAK/AKT通路,进而促进血管生成和肿瘤进展,并与卵巢癌患者预后不良相关。同时,研究发现PD-L1为致癌转录因子c-JUN的下游调控因子,从而使PD-L1在卵巢癌中高表达。此外,实验表明PD-L1抑制剂度伐利尤单抗(durvalumab)和抗血管生成药物阿帕替尼(apatinib)联合使用可以增强抗血管生成作用,抑制卵巢癌细胞转移和侵袭。结论我们的研究结果表明,PD-L1通过激活c-JUN/VEGFR2信号轴促进卵巢癌的血管生成和转移,PD-L1抑制剂和抗血管生成药物联合使用可能是治疗卵巢癌患的潜在方法。

COUP-TFⅡ在胃癌组织中表达及对胃癌SGC7901细胞中VEGFR3-NRP2轴转录活性的调控

目的:探讨COUP-TFⅡ在胃癌中对淋巴转移相关因子VEGFR3-NRP2轴的调控分子机制。方法:收集2015年3月至2015年8月在滨州医学院附属医院手术切除的60例胃癌组织和相应的癌旁组织及正常胃黏膜活检组织,用免疫组化和qPCR法检测COUP-TFⅡ、VEGFR3和NRP2的表达;培养胃癌细胞SGC7901和BGC823,构建过表达和siRNA-COUP-TFⅡ质粒后转染SGC7901细胞,用WB和qPCR检测转染后SGC7901细胞中COUP-TFⅡ、VEGFR3、NRP2的表达,用免疫共沉淀(CHIP)和双荧光素酶报告基因实验验证COUP-TFⅡ与VEGFR3-NRP2轴的靶向关系。结果:免疫组化检测显示,VEGFR3、NRP2、COUP-TFⅡ在胃癌组织中呈高表达(P<0.01);q PCR结果显示,与癌旁组织和正常组织相比,胃癌组织VEGFR3、NRP2和COUPTFⅡ的mRNA呈高表达(P<0.05或P<0.01);WB和qPCR法结果显示,与对照组相比,过表达COUP-TFⅡ组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平表达均显著升高(均P<0.01);敲减组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05或P<0.01),且VEGFR3和NRP2 mRNA水平也均显著下降(均P<0.01);CHIP结果显示,SGC7901和BGC823细胞中COUP-TFⅡ抗体的免疫共沉淀物中含有VEGFR3和NRP2启动子DNA序列;双荧光素酶报告基因实验结果显示,COUP TFⅡ表达水平与VEGFR3和NRP2表达水平呈正相关。结论:COUP-TFⅡ在胃癌组织中高表达且对VEGFR3-NRP2轴存在正性调控作用,且在胃癌中高表达,COUP-TFⅡ可能为胃癌治疗的新靶点。

镇肝熄风汤联合尼莫地平对急性脑梗死患者神经功能及VEGF/VEGFR2信号通路的影响

目的观察镇肝熄风汤联合尼莫地平对急性脑梗死(ACI)患者(阴虚风动证)神经功能及VEGF/VEGFR2信号通路的影响。方法将120例急性脑梗死患者随机分为试验组与对照组各60例。对照组给予西医常规药物及尼莫地平治疗,试验组在对照组基础上加用镇肝熄风汤。比较两组临床疗效及不良反应;对比两组治疗前后中医证候积分、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及Barthel指数(BI);比较两组治疗前后血清血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)表达水平;比较两组治疗前后的血清髓鞘碱性蛋白(MBP)、S100B蛋白(S100B)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达水平。结果试验组总有效率高于对照组,治疗后中医证候积分及NIHSS评分低于对照组,BI评分高于对照组,VEGF及VEGFR2表达水平高于对照组,NSE、MBP、S100B水平低于对照组(P<0.05)。两组间不良反应发生情况差异无统计学意义(P>0.05)。结论镇肝熄风汤联合尼莫地平治疗ACI可进一步提高治疗效果,改善患者神经功能及日常活动能力,促进VEGF及VEGFR2的表达,保护神经元,安全可靠。

VEGFR2、p53在非小细胞肺癌中的表达及其与临床特征和化疗疗效的相关性

目的观察血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)和p53在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,并分析其与临床特征和化疗疗效的相关性。方法应用免疫组化染色法检测158例NSCLC组织中VEGFR2和p53的表达情况。收集患者的性别、年龄、吸烟史、病理类型、肿瘤大小、区域淋巴结转移、远处转移、临床分期、肿瘤标志物和近期疗效等临床资料,分析其与VEGFR2和p53的相关性。结果VEGFR2和p53在NSCLC中的高表达率分别为38.6%、23.4%,两者在不同病理类型NSCLC中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。VEGFR2在Ⅱ-Ⅵ期患者中的高表达率显著高于Ⅰ期患者(P=0.007);p53在有淋巴结转移、Ⅱ-Ⅵ期患者中的高表达率显著高于无淋巴结转移及Ⅰ期患者(P=0.005,0.002)。VEGFR2高表达患者中p53高表达率明显升高(P=0.000),表明VEGFR2与p53的表达显著相关。接受2周期化疗后,疗效评估为疾病进展的患者VEGFR2高表达率显著高于部分缓解的患者(P=0.040)。结论VEGFR2和p53的高表达与NSCLC的恶性程及化疗敏感性有关,VEGFR2、p53联合检测可能有助于NSCLC患者的个体化治疗。

VEGFR-2/KDR三区的载体构建、表达及胃癌患者抗-KDR抗体的检测

目的扩增人血管内皮细胞生长因子受体-2/激酶插入受体(VEGFR-2/KDR)三区基因,构建表达载体,在大肠埃希菌中表达,获得纯化蛋白。检测胃癌术前患者外周血中抗-KDR抗体水平,为进一步研究KDR与抗-KDR抗体在胃癌中的作用奠定基础。方法从人血管内皮细胞株ECV304提取总RNA,逆转录后,聚合酶链反应(PCR)扩增KDR胞外段三区基因,连接到pMD18-T载体测序;酶切后将目的基因插入原核表达载体pET28a(+)构建重组质粒,将重组质粒转化到大肠埃希菌DH5α内并提取质粒,经双酶切鉴定后,再转化入表达菌株BL21(DE3),异丙基-β-D硫化半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni2+-NTA树脂纯化、复性;用获得的蛋白包被酶联免疫吸附试验(ELISA)板,用ELISA检测32例胃癌患者和35名健康对照者外周血抗-KDR抗体水平。结果构建了表达载体pET28a(+)-KDR3,并获得高效表达,表达的蛋白质相对分子质量为16 000,重组蛋白以包涵体形式存在。胃癌患者外周血中抗-KDR抗体水平显著高于健康对照组(P<0.01)。结论VEGFR-2/KDR三区基因成功克隆到表达质粒内并表达。为进一步研究KDR与抗-KDR抗体在胃癌中的作用奠定了基础,及可能为胃癌的血清学诊断提供新的方法。

基于计算机辅助药物设计的VEGFR2和PD-L1双靶点抑制剂的筛选

肝细胞癌(HCC)是世界上最具侵袭性的实体恶性肿瘤之一,尽管近几十年来在肝切除术、射频消融和肝移植等方面取得了显著进展,但HCC患者的愈后仍不乐观,主要原因是HCC的高复发率和转移率以及该疾病对化疗和靶向治疗的耐受性。VEGFR2和PD-L1抑制剂联合应用能对小鼠体内的HCC肿瘤进行显著抑制并延长其寿命,因此开发VEGFR2与PD-L1双靶点抑制剂对HCC的治疗具有十分重要的意义。本文基于计算机辅助药物设计(CADD),经过以分子对接为基础的虚拟筛选、MM-GBSA和ADMET评价以及QSAR模型预测,得到了一系列VEGFR2和PD-L1的双靶点活性化合物,有望为后续抑制剂的开发提供思路和方向。

阿帕替尼联合参一胶囊抑制VEGFR-2高表达胃腺癌细胞SGC-7901增殖机制研究

目的探讨阿帕替尼联合参一胶囊对VEGFR-2高表达的胃癌细胞增殖的影响。方法选择不同人胃腺癌细胞SGC-7901、BGS-823、AGS、MKN-45、MGC-83以及人脐静脉内皮细胞HUVEC(空白对照组)进行培养。RT-PCR筛选出VEGFR-2 mRNA水平高表达的细胞;western blotting检测VEGFR-2高表达胃腺癌细胞中相关蛋白表达量;实验药物分为空白对照组、阿帕替尼组、参一胶囊组、阿帕替尼联合参一胶囊组,除空白对照组外,每组设立7个浓度梯度;MTT法检测不同浓度下阿帕替尼、参一胶囊、阿帕替尼联合参一胶囊组对细胞增殖抑制率;利用中效原理绘制Fa-CI曲线,评价两药联合作用机制;流式细胞术检测空白对照组、阿帕替尼组、参一胶囊组、阿帕替尼+参一胶囊组中细胞凋亡率;免疫组化法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、及死亡受体Fas蛋白的分布量。结果RT-PCR、western blotting结果显示胃腺癌细胞SGC-7901在VEGFR-2 mRNA、蛋白水平上均为高表达,为后期实验所选用。MTT结果显示两药效抑制细胞增殖,浓度为阿帕替尼:16μg/mL、参一胶囊:64μg/mL;根据药物中效原理,该浓度下药物联合指数CI<1,两药联合作用为协同。流式细胞术结果示阿帕替尼+参一胶囊组vs.空白对照组、阿帕替尼组、参一胶囊组其细胞凋亡率明显增高(P<0.0001),有显著统计学差异。免疫组化法检测发现阿帕替尼联合参一胶囊组vs.对照组和单药组,其凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、及死亡受体Fas分布量显著增加。结论阿帕替尼联合参一胶囊具有协同增效增强细胞的作用,其机制可能通过联合用药组调控细胞中抑凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bax及死亡受体Fas蛋白表达,并激活线粒体途径和死亡受体Fas途径诱导细胞凋亡。

藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖及VEGFR2表达的影响

目的:观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和血管内皮细胞受体2(VEGFR2)表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制。方法:以不同浓度的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48h后,应用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析VEGFR2蛋白的变化。结果:藤黄酸对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性。流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率随藤黄酸浓度增加逐步上升。用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24h,VEGFR2蛋白的表达随药物浓度的增加而减少(P<0.01)。结论:藤黄酸能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与抑制VEGFR2表达有关。

有氧运动对2型糖尿病大鼠肾脏VEGF-A及VEGFR2蛋白表达的影响

目的:研究有氧运动对2型糖尿病大鼠肾脏VEGF-A、VEGFR2蛋白表达的影响,并对其可能机制进行探讨。方法:通过高糖高脂饲喂5周加低剂量腹腔注射STZ复制2型糖尿病大鼠模型,7周后成模SD大鼠被随机分为糖尿病安静组和糖尿病运动组,另设正常对照组。采用7周有氧游泳运动只对糖尿病运动组进行干预,实验末测定血糖、24 h UA、肾皮质VEGF-A及VEGFR2和p-VEGFR2蛋白的表达及光镜、电镜观察肾小球形态结构的变化。结果:光镜下糖尿病运动组大鼠肾小球增大不明显,毛细血管袢大多数开放,球囊壁渗出、粘连等现象较糖尿病安静组明显改善;基底膜无明显增厚,足突融合等现象较糖尿病安静组均有所减轻;血糖浓度和24 h UA排泄量降低显著(P<0.05或P<0.01);肾皮质VEGF-A、VEGFR2和p-VEGFR2蛋白的表达均较糖尿病安静组显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:运动对2型糖尿病大鼠肾脏有保护作用,其作用机制可能是通过其降低血糖及下调2型糖尿病状态下表达增加的VEGF-A和VEGFR2蛋白水平,而减轻大鼠肾脏损伤。

益气化瘀解毒方对人肝癌裸鼠HepG2移植瘤MVD、HIF1a、VEGF/KDR表达的影响

目的:观察益气化瘀解毒方对人肝癌裸鼠HepG2移植瘤MVD、HIF1a、VEGF/KDR表达的影响。方法:建立人肝癌移植瘤模型,分为7组,分别以益气化瘀解毒方、黄芪、莪术、重楼、壁虎、顺铂药物干预21 d后,取瘤组织行免疫组化检测。结果:①对MVD的影响:全方组与除顺铂外的其它组比较有统计学意义(P<0.05);除黄芪、莪术外的其它组与空白组比较有统计学意义(P<0.05)。②对HIF1a的影响:全方组与除黄芪外的其它组比较有统计学意义(P<0.05);各组与空白组比较有统计学意义(P<0.05)。③对VEGF表达的影响:全方组与除顺铂外的其它组比较均有统计学意义(P<0.05);莪术组与空白组比较无统计学意义(P>0.05)。④对KDR表达的影响:全方组与其它各组比较均有统计学意义(P<0.05);黄芪组与空白组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:益气化瘀解毒方能明显抑制人肝癌裸鼠移植瘤MVD、HIF1a、VEGF和KDR的表达而发挥抗血管生成作用;各单味药对其作用各有侧重,但作为整方的有机组成从不同环节发挥了协同作用。