白术、茯苓、白术茯苓汤对脾虚大鼠VIP及VIPR2的基因表达的影响

目的:研究白术、茯苓及白术茯苓汤对血管活性肠肽(VIP)及其VIPR2基因表达的影响。方法:运用大黄厚朴枳实加饥饱失常法复制脾气虚证的动物模型,采用放射免疫及RT-PCR等方法,观察白术、茯苓、白术茯苓汤对脾气虚大鼠血浆及结肠组织VIP的影响。结果:(1)与模型组比较,白术茯苓汤组能下调血浆及结肠组织VIP含量(P<0.05),茯苓组呈下调趋势,白术组则不明显;(2)与模型组比较,三组方药均可使脾虚大鼠VIPR2的基因表达量下降(P<0.05)。结论:(1)白术茯苓汤组下调脾气虚大鼠VIP含量优于单味药,表明中药配伍运用的必要性和科学性;(2)三组方药均能降低脾虚大鼠VIPR2的基因表达量,可能与白术、茯苓及白术茯苓汤对VIP的作用靶点有异。

加味四逆散对身心应激模型大鼠胃肠组织GASR、VIPR2 mRNA表达的影响

目的：建立慢性应激性胃溃疡大鼠模型，探讨加味四逆散对应激模型大鼠胃液pH、胃黏膜溃疡指数（UI）、胃粘膜病理形态及胃组织胃泌素受体（GASR）和空肠组织血管活性肠肽II型受体（VIPR2）mRNA表达的影响，阐明加味四逆散干预应激性胃粘膜损伤的机制。方法：将Wistar大鼠60只随机分为正常对照组、模型对照组、奥美拉唑组、加味四逆散高、中、低剂量组，每组10只，采用慢性心理性应激方法建立应激性胃溃疡大鼠模型，经加味四逆散等干预后，检测胃液pH并评估胃黏膜溃疡指数（uI），常规HE染色镜下观察胃粘膜形态学改变，RT—PCR法检测胃组织GASR、空肠组织VIPR2mR—NA表达的变化。结果：与模型组比较，加味四逆散方各剂量组、奥美拉唑组大鼠胃液pH不同程度升高，而胃粘膜溃疡指数明显减小，差异均具有显著性意义（P〈0．05～0．01）；与奥美拉唑组比较，加味四逆散中、高剂量组胃液pH无显著性差异（P〉0．05），而胃粘膜溃疡指数明显减小，差异有显著性意义（P〈0．05～0．01）；胃粘膜HE染色结果显示模型组大鼠胃粘膜弥漫出血、溃疡糜烂，较正常组损伤明显，加味四逆散高、中、低剂量组大鼠胃粘膜损伤较模型组不同程度减轻。正常组及各治疗组胃组织GASR mRNA表达均较模型组升高，空肠组织VIPR2mRNA表达则降低，差异有统计学意义（P〈0．05～0．01），加味四逆散中、高剂量组胃组织GASR mRNA表达均较奥美拉唑组明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05～0．01），中药高剂量组空肠组织VIPR2 mRNA表达较奥美拉唑组则明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：加味四逆散可显著减轻应激性胃粘膜损伤程度，抑制应激所致胃酸分泌，并可改善胃组织GASR、空肠组织VIPR2 mRNA表达。

VIPR2拷贝数变异检测方法的建立及应用

目的建立VIPR2基因拷贝数变异检测方法,并应用于VIPR2拷贝数变异与精神分裂症的相关性研究中。方法将2010年11月至2012年8月南京医科大学附属无锡市精神卫生中心收治的310例精神分裂症住院患者纳入精神分裂症组,同期选择300例健康志愿者纳入健康对照组。采用多重竞争性实时荧光定量聚合酶链反应法,对610例受试者进行VIPR2微重复分析。结果精神分裂症组中VIPR2拷贝数变异检测阳性率为0.97%(3/310),健康对照组VIPR2拷贝数变异检测阳性率为0.00%(0/300),两组比较差异无统计学意义(χ2=1.275,P=0.259)。结论多重竞争性聚合酶链反应法能对多位点拷贝数变异进行快速分型,是验证拷贝数变异的有效方法。

Vipr2敲除对小鼠视网膜功能的影响

目的:检测血管活性肠肽受体2(Vipr2)敲除小鼠多巴胺(DA)等神经递质含量和视网膜电生理,明确Vipr2敲除对视网膜功能的影响。方法:实验研究。利用RT-PCR检测血管活性肠肽(Vip)、Vipr2在4周龄雄性C57BL/6J小鼠眼球组织中的表达水平。通过CRISPR-Cas9基因编辑技术构建Vipr2敲除(Vipr2-KO)小鼠,然后在4周龄时检测Vipr2-KO和Vipr2野生型(Vipr2-WT)小鼠视网膜中DA等神经递质含量及视网膜电生理功能。Vipr2-KO小鼠与Vipr2-WT小鼠DA等神经递质含量比较采用独立样本t检验,而2种小鼠视网膜电生理数据比较采用双因素重复测量方差分析。结果:Vip和Vipr2 mRNA在小鼠视网膜、脉络膜+视网膜色素细胞、角膜和巩膜中均有表达;在虹膜和晶状体中Vipr2呈低表达,未检测到Vip表达。与Vipr2-WT小鼠相比,Vipr2-KO小鼠表现为近视(t=2.51,P=0.017),视网膜DA、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)含量均明显升高(t=3.42,P=0.001;t=2.15,P=0.037;t=3.27,P=0.002),DOPAC/DA比值无变化;而玻璃体液中DA、DOPAC、DOPAC/DA、HVA、去甲肾上腺素含量差异均无统计学意义。视网膜和玻璃体液中天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、牛磺酸和γ氨基丁酸含量在Vipr2-KO小鼠与Vipr2-WT小鼠之间差异均无统计学意义。在暗适应不同光刺激强度下(-3.699、-2.201、-0.699、0.301、0.799 log cd·s/m2),Vipr2-KO小鼠相比Vipr2-WT小鼠,b波振幅明显增加(F=8.65,P=0.015)。结论:Vipr2敲除可引起4周龄小鼠屈光向近视发展,影响视网膜中DA、DOPAC、HVA合成代谢,并引起视网膜电生理功能异常。提示Vipr2敲除可能通过影响视网膜功能参与近视形成,但具体作用机制有待进一步研究。

鸡VIPR受体基因多态性与鸡冠性状的关联分析

为探究鸡血管活性肠肽受体基因(VIPR1和VIPR2)多态性与鸡冠性状的关系,采用PCR-SSCP和测序验证技术检测了优质肉鸡F系287只种鸡的SNPs,并进行了关联性分析。结果表明:VIPR1基因发现2个突变位点,分别为g.73352C>T突变,g.68818T>C突变;VIPR2基因发现1个突变,为g.36127A>G突变。χ~2检验发现,3个突变位点并不处于Hardy-Weinberg平衡状态;遗传参数分析发现,g.73352C>T属于高度多态,其余位点均属于中度多态。关联性分析表明:3个突变位点各基因型个体间生长激素(GH)和睾酮激素(TEST)含量无显著差异(P>0.05)。VIPR1基因g.73352C>T突变位点,TT基因型个体冠高、冠面积和肉垂面积显著大于CC基因型个体(P<0.05),g.68818T>C位点各基因型个体间冠高、冠面积、肉垂面积差异显著(P<0.05),VIP2基因g.36127A>G位点GG基因型个体冠高、冠面积和肉垂面积显著大于AA和AG基因型个体(P<0.05)。由此可见,VIPR1和VIPR2可能是影响鸡冠性状的主效基因或与控制该性状的主效基因连锁,能够作为候选基因用于鸡冠的分子标记辅助选择。

加味四逆散对身心应激大鼠胃黏膜形态学的作用机制

目的:探讨加味四逆散(jiaweisinisan,JWSNS)对身心应激大鼠胃黏膜的保护作用及其机制.方法:大鼠随机分为正常组、模型组、JWSNS大、中、小剂量组及奥美拉唑组,采用慢性心理性应激方法建立应激性胃溃疡大鼠模型,经JWSNS等干预后评估胃黏膜溃疡指数(ulcer index,UI),常规HE(hematoxylin and eosinstain,HE)染色镜下观察胃黏膜形态学改变,透射电镜法观察腺胃区胃黏膜组织细胞及细胞间连接的超微结构改变,放射免疫法检测大鼠胃组织中胃泌素(gastrin,GAS)及血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)水平并用RT-PCR法检测胃组织GASR、空肠组织VIPR2mRNA表达变化.结果:与模型组比较,正常组、JWSNS中、大、小剂量组及奥美拉唑组大鼠胃黏膜溃疡指数(分)明显减小(0.32±1.58、8.50±3.88、4.67±3.08vs25.33±4.33,P<0.01;13.70±2.26、12.00±2.73vs25.33±4.33,P<0.05);与奥美拉唑组比较,JWSNS中、大剂量组胃黏膜溃疡指数明显减小(P<0.05,P<0.01);胃黏膜HE染色结果显示模型组大鼠胃黏膜弥漫出血、溃疡糜烂,较正常组损伤明显,JWSNS大、中、小剂量组大鼠胃黏膜损伤较模型组不同程度减轻.电镜观察显示正常组大鼠胃黏膜上皮细胞间连接紧凑,胞膜完整,胞核形态及大小正常;模型组大鼠胃黏膜上皮细胞间连接松解,胞质中细胞器及胞核受损严重,染色质明显边集、浓缩或均一化分布;其余治疗组均较模型组不同程度好转.与模型组比较,正常组、JWSNS中、大剂量组、奥美拉唑组、JWSNS小剂量组大鼠胃窦组织中GAS含量显著增高(39.23±5.54、27.52±4.28、38.27±4.18、28.30±5.53vs8.33±4.63,P<0.01;15.74±4.56vs8.33±4.63,P<0.05),与奥美拉唑组比较,JWSNS大剂量组胃窦组织中GAS含量增高(P<0.05);与模型组比较,正常组、JWSNS大、中剂量组及奥美拉唑组大鼠胃窦组织中VIP含量降低(36.32±1.68、39.67±2.98vs89.33±4.43,P<0.01;60.50±3.85、59.00±2.89vs89.33±4.43,P<0.05),与奥美拉唑组比较,JWSNS大剂量组胃窦组织中VIP含量降低(P<0.05);与模型组比较,正常组、JWSNS中、大、小剂量组及奥美拉唑组胃组织GASRmRNA表达均升高(1.00±0.10、0.53±0.03、0.62±0.05vs0.19±0.05,P<0.01;0.25±0.02、0.43±0.03vs0.19±0.05,P<0.05),正常组、JWSNS大、中、小剂量组及奥美拉唑组空肠组织VIPR2mRNA表达则降低(1.00±0.20、1.15±0.33vs3.40±0.57,P<0.01;1.83±0.30、2.39±0.36、1.79±0.35vs3.40±0.57,P<0.05);与奥美拉唑组比较,JWSNS大剂量组胃组织GASRmRNA表达明显升高(P<0.05),而JWSNS大剂量组空肠组织VIPR2mRNA表达则明显降低(P<0.01).结论:JWSNS对身心应激大鼠胃黏膜有较好的保护作用.

黄连提取物抑制结核分枝杆菌的机理初探

目的研究黄连提取物在体内及体外对结核分枝杆菌的抑制作用及部分机理。方法本实验用体外抑菌试验和体内造模实验检测黄连提取物抑制结核分枝杆菌(H37Ra)的作用及机理。抑菌试验:将黄连提取物按不同浓度添加到分枝杆菌固体培养基中,在培养基表面滴加H37Ra菌液,设空白组、利福平组做为对照,37℃培养2个月,观察有无菌落生长。造模实验:用结核分枝杆菌减毒株H37Ra感染小鼠,分为未感染组(正常组)、感染未治疗组(模型组)、感染治疗组(黄连组、利福平组)。做结核菌素试验验证造模阳性率,用ELISA实验检测小鼠血清IL-2的表达,使用RNA-seq检测小鼠肺的基因型改变。结果体外抑菌试验结果显示除空白组外其他各组均未见菌落生长,证明黄连提取物对结核菌有抑制作用。造模实验的结核菌素试验阳性率63%,证明造模成功。小鼠血清IL-2的表达显示黄连组IL-2的表达升高。小鼠肺RNA-seq检测测得数百条有意义的差异基因,揭示了黄连提取物抑制结核杆菌的作用机制,如Vipr2提高小鼠的细胞免疫,H2-Ea增强小鼠抵抗肺纤维化等。结论黄连提取物对结核分枝杆菌有抑制作用且抑制机理是多渠道、多靶点的。

旋覆代赭汤对胃动力低下大鼠胃窦组织中脑肠肽受体mRNA表达的影响

[目的]观察旋覆代赭汤对胃动力低下大鼠胃窦平滑肌细胞促胃液素受体(GASR)及血管活性肠肽2受体(VIPR2)mRNA表达的影响。[方法]将70只大鼠随机分为正常组和模型组,正常组10只,模型组60只。模型组每只大鼠按10 g/kg体重的甘草煎剂灌胃后,随机分为模型3 d、模型7 d组,旋覆代赭汤低、中、高剂量组及多潘立酮组。多潘立酮组予0.27 mg/ml的多潘立酮混悬液灌胃,旋覆代赭汤低、中、高剂量组分别予浓度为0.369、0.738、1.476 g/ml的旋覆代赭汤灌胃,给药5 d。采用原位杂交法检测大鼠胃窦平滑肌细胞GASR及VIPR2 mR-NA的表达。[结果]一定剂量甘草煎剂可复制大鼠胃动力低下模型,旋覆代赭汤可使胃动力低下大鼠胃窦平滑肌细胞GASR mRNA的阳性细胞平均光密度升高,平均灰度值降低;而VIPR2 mRNA的阳性细胞的平均光密度降低,平均灰度值升高(P<0.05或<0.01)。[结论]旋覆代赭汤可通过调节脑肠肽受体在胃窦组织中的表达达到促胃动力的作用。