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根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区VirD1基因的克隆及序列分析 被引量:2
1
作者 刘红玲 祝建波 +1 位作者 朱新霞 楚敏 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2004年第3期194-196,共3页
根据U.Washington报导的根癌土壤农杆菌(Agribacterium tumefaciens)C58Ti质粒基因序列,设计1对引物,利用PCR的方法扩增了c58根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区VirD1基因。通过琼脂糖凝胶电泳,所得目的片段略小于500bp,与引物设计跨幅片段476b... 根据U.Washington报导的根癌土壤农杆菌(Agribacterium tumefaciens)C58Ti质粒基因序列,设计1对引物,利用PCR的方法扩增了c58根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区VirD1基因。通过琼脂糖凝胶电泳,所得目的片段略小于500bp,与引物设计跨幅片段476bp相吻合。将此片段连接到T载体,经蓝白斑筛选、PCR鉴定、测序及DNA序列分析,结果表明:克隆VirD1基因编码序列与报导的序列同源性达100%,说明通过PCR方法获得的VirD1基因片段是正确的,为进一步研究该基因的表达和活性奠定了基础。 展开更多
关键词 vird1基因 克隆 序列分析
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根癌土壤农杆菌Ti质粒毒蛋白基因VirD_1的克隆及原核表达 被引量:1
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作者 王彦芹 李小红 +2 位作者 包慧芳 刘红玲 祝建波 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第4期473-476,共4页
根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区VirD1蛋白表现拓扑异构酶活性,能解除T-DNA边界处25bp重复序列的超螺旋状态,使外源基因的插入成为可能。本实验以C58菌株为模板,设计了一对含有BamHI和XhoI酶切位点的引物,成功克隆了VirD1基因,并构建了原核... 根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区VirD1蛋白表现拓扑异构酶活性,能解除T-DNA边界处25bp重复序列的超螺旋状态,使外源基因的插入成为可能。本实验以C58菌株为模板,设计了一对含有BamHI和XhoI酶切位点的引物,成功克隆了VirD1基因,并构建了原核表达载体pET30a-VirD1,将其在宿主菌BL21中获得了表达,为将来构建含有VirD1基因的植物表达载体并协助目的基因转化奠定基础。 展开更多
关键词 vird1 基因 克隆 原核表达
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根瘤农杆菌T-DNA结合蛋白VirD2和VirE2在水稻中的亚细胞定位研究 被引量:1
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作者 颜廷祥 罗美中 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期22-27,共6页
根瘤农杆菌侵染植物过程中,至少有5种毒性蛋白(Vir)进入宿主细胞发挥作用,而其中VirD2与VirE2的作用最为关键,研究二者在水稻中的亚细胞定位,对农杆菌介导的水稻遗传转化机制的阐明具有重要意义。利用水稻叶鞘原生质体瞬时表达系统,发现... 根瘤农杆菌侵染植物过程中,至少有5种毒性蛋白(Vir)进入宿主细胞发挥作用,而其中VirD2与VirE2的作用最为关键,研究二者在水稻中的亚细胞定位,对农杆菌介导的水稻遗传转化机制的阐明具有重要意义。利用水稻叶鞘原生质体瞬时表达系统,发现3种冠瘿碱型的VirD2均只定位于细胞核中,与在拟南芥中相同;而3种冠瘿碱型的VirE2均主要定位于细胞核中,但在细胞质中仍有较多分布,与在拟南芥中的定位不同。因此,推测不同冠瘿碱型的农杆菌对水稻侵染能力的差异与VirD2和VirE2亚细胞定位的关系不大;同时表明根瘤农杆菌介导的拟南芥及水稻遗传转化机制存在相似性,但也有不同之处。 展开更多
关键词 水稻 根瘤农杆菌 vird2 VirE2 原生质体 亚细胞定位 冠瘿碱型
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根癌土壤农杆菌VirD_2蛋白基因的克隆及原核表达 被引量:2
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作者 刘红玲 朱新霞 祝建波 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第3期12-14,共3页
根据U.Washington发表的根癌土壤农杆菌(Agribacteriumtumefaciens)C58Ti质粒基因序列,设计一对引物含NcoⅠ、SalⅠ酶切位点,利用PCR的方法,扩增了C58根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区蛋白VirD2基因,连接T载体经测序与发表的序列同源性达100... 根据U.Washington发表的根癌土壤农杆菌(Agribacteriumtumefaciens)C58Ti质粒基因序列,设计一对引物含NcoⅠ、SalⅠ酶切位点,利用PCR的方法,扩增了C58根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区蛋白VirD2基因,连接T载体经测序与发表的序列同源性达100%。将目的片段从T载体上切下,连接至原核表达载体PET-30a上,转化E.coliDH5α,筛选出阳性克隆,提质粒转化E.coliBL21,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳,发现与对照比较在近50kD处有特异条带,与理论大小(49.5kD)相符表明所克隆的VirD2基因获得了原核表达。 展开更多
关键词 vird2基因 克隆 表达
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Effect of VirD4 on gastric epithelial-1 cells and its mechanism
5
作者 YANG YANG BENSHUAI YOU CHENGLIN ZHOU 《BIOCELL》 SCIE 2022年第6期1557-1564,共8页
The gene of Helicobacter pylori can encode three to four type IV secretory systems,of which a new gene region has been found in the H.pylori plasticity region.The coding products of this region can form a new T4SS nam... The gene of Helicobacter pylori can encode three to four type IV secretory systems,of which a new gene region has been found in the H.pylori plasticity region.The coding products of this region can form a new T4SS named tfs3,but its function is unclear.This study investigated the effect of VirD4 recombinant protein in the tfs3 secretory system of the H.pylori clinical strain SBK on GES-1 cells.We observed changes in cell morphology after VirD4 treatment.Further analysis indicated that VirD4 increased inflammation by increasing the activation of NF-κB.VirD4 can also inhibited proliferation,and induced migration of cells.Moreover,VirD4 caused apoptosis in GES-1 cells in caspase and ERK1/2/Ras dependent signaling events.Our study laid a foundation for further research on the biological function of VirD4 and the detection and treatment of H.pylori-related diseases. 展开更多
关键词 H.PYLORI tfs3 vird4 NF-ΚB Ras/Erk
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幽门螺杆菌virD4基因的克隆表达及其功能初探
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作者 朱虹 杨洋 +3 位作者 樊书 栾瑄 孟红霞 邵世和 《临床检验杂志》 CAS 2019年第7期539-545,共7页
目的研究幽门螺杆菌SBK临床分离株virD4的功能。方法通过T-A克隆获得virD4基因片段;构建pET-28a(+)-virD4原核表达载体,转化入Rosetta工程菌,IPTG诱导表达;KCl染色切胶纯化法获得重组蛋白质,SDS-PAGE法分析鉴定重组蛋白质;纯化的重组蛋... 目的研究幽门螺杆菌SBK临床分离株virD4的功能。方法通过T-A克隆获得virD4基因片段;构建pET-28a(+)-virD4原核表达载体,转化入Rosetta工程菌,IPTG诱导表达;KCl染色切胶纯化法获得重组蛋白质,SDS-PAGE法分析鉴定重组蛋白质;纯化的重组蛋白质免疫小鼠,获得多克隆抗体,ELISA法检测效价,western blot法分析抗原反应特异性;重组蛋白质与GES-1细胞共培养,检测其对细胞炎症因子的表达及细胞增殖的影响。结果 virD4基因全长为1 728 bp,序列与Shi470菌株的virD4基因同源性较高;成功构建原核表达载体,经诱导及纯化获得相对分子质量为63 000的重组蛋白质;成功免疫小鼠制备多克隆抗体,效价为512 000,抗原抗体反应具有特异性;virD4能诱导GES-1细胞分泌炎症因子和增殖。结论成功克隆并表达virD4基因,制备多克隆抗体,其重组蛋白质能诱导细胞因子分泌及细胞增殖。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 vird4 tfs3编码Ⅳ型分泌系统 原核表达 重组蛋白质
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农杆枪法基因遗传转化技术初报 被引量:2
7
作者 于丽霞 鄢波 +2 位作者 晏慧君 张婷 李涵 《中国农学通报》 CSCD 2008年第1期52-55,共4页
为提高遗传转化的效率,克服受体范围的限制,采用农杆枪法进行基因的遗传转化。根据已报导的VirD1和VirD2基因的序列设计特异引物,以农杆菌C58菌株的质粒为模板进行PCR扩增,对VirD1和VirD2基因进行克隆。将序列正确的VirD1和VirD2基因连... 为提高遗传转化的效率,克服受体范围的限制,采用农杆枪法进行基因的遗传转化。根据已报导的VirD1和VirD2基因的序列设计特异引物,以农杆菌C58菌株的质粒为模板进行PCR扩增,对VirD1和VirD2基因进行克隆。将序列正确的VirD1和VirD2基因连接到植物表达载体PBI121启动子CaMV35S和终止子nos之间,构建VirD1和VirD2基因的表达载体pB-VirD1及pB-VirD2。经PCR及酶切鉴定,基因已成功构建到表达载体上,为农杆枪法进行目的基因转化的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 农杆菌 vird1基因 vird2基因 植物表达载体
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网格环境中资源发现方法研究 被引量:11
8
作者 龚奕利 李伟 孙毓忠 《计算机工程》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第17期162-164,共3页
提出了一种新的C/S和P2P结合的网格环境中的资源发现机制――VIRD。它采用属性-值对的请求描述方法,提供了比基于名字的方法更强的查询能力。VIRD采用3层结构,资源信息在同一域内定期更新传播。用户请求先在域内进行查找,如果不能满足,... 提出了一种新的C/S和P2P结合的网格环境中的资源发现机制――VIRD。它采用属性-值对的请求描述方法,提供了比基于名字的方法更强的查询能力。VIRD采用3层结构,资源信息在同一域内定期更新传播。用户请求先在域内进行查找,如果不能满足,再转发到域间。试验显示,即使在资源频度比较低、允许的最大TTL值很小的情况下,VIRD仍能获得比较高的查找成功率。和flooding和randomwalk相比,在相同查找成功率的情况下,VIRD所需的网络通信量和响应时间远小于二者。 展开更多
关键词 网格 资源发现 P2P vird
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我国木本植物致病性土壤杆菌的分子检测和比较鉴定 被引量:5
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作者 田国忠 李永 +2 位作者 朱水芳 贾瑞祥 王慧敏 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第2期63-72,共10页
根据根癌土壤杆菌Ti质粒的保守序列设计了2对引物,对我国不同木本植物上分离鉴定的10株致病性根癌土壤杆菌进行PCR,致瘤性根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)扩增出427bp和338bp的特异性DNA片段,而发根土壤杆菌(A.rhizogenes)仅扩... 根据根癌土壤杆菌Ti质粒的保守序列设计了2对引物,对我国不同木本植物上分离鉴定的10株致病性根癌土壤杆菌进行PCR,致瘤性根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)扩增出427bp和338bp的特异性DNA片段,而发根土壤杆菌(A.rhizogenes)仅扩增出338bp片段,放线土壤杆菌(A.radiobacter)、丁香假单胞菌(Pseudomonassyringae)和泡桐丛枝病植原体(phytoplasma)皆未有特异扩增带。用CYTCYT’引物对也可鉴定TDNA遗传转化瘤组织,而VirD2AVirD2E可用于工程土壤杆菌株侵染能力鉴定。从北京通州杨树苗圃和河北廊坊桃园的病树冠瘿组织和土壤中经选择培养基分离菌株,然后PCR筛选出6个致病性根癌土壤杆菌菌株,而未能从施用过抗根癌生防制剂的北京玉渊潭公园樱花根癌病园中分离和鉴定出典型的致病根癌土壤杆菌株。将杨树根癌土壤杆菌菌株(CFCC1001)异戊烯基转移酶基因(ipt)片段克隆和序列测定结果显示与A.tumefaciensTi15955菌株的ipt基因序列同源性为83.64%。用此片段制备的iptcRNA基因探针进行斑点杂交和Northernblot,结果显示此探针与杨树根癌土壤杆菌以及玫瑰、樱花、海棠、桃树等木本植物上分离鉴定的致病土壤杆菌菌株所扩增出的427bp片段都有明显杂交信号,但与引起泡桐丛枝病植原体染色质和染色质外DNA均未有明显杂交信号。 展开更多
关键词 土壤杆菌 多聚酶链式反应 ipt和vird2基因 核酸杂交 泡桐丛枝植原体
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高病毒载量E抗原阳性慢性乙型肝炎的优化治疗 被引量:1
10
作者 涂德幸 胡小雄 +2 位作者 詹建明 范惠珍 邓云梅 《当代医学》 2015年第35期1-3,共3页
目的探讨高病毒载量E抗原(HBe Ag)阳性慢性乙型肝炎的优化治疗策略。方法将171例高病毒载量的HBe Ag阳性慢性乙型肝炎患者随机分为3组,A组(n=46)单用干扰素α-2 b治疗,B组(n=42)应用干扰素α-2 b与阿德福韦酯初始联合治疗,C组(n=83)应... 目的探讨高病毒载量E抗原(HBe Ag)阳性慢性乙型肝炎的优化治疗策略。方法将171例高病毒载量的HBe Ag阳性慢性乙型肝炎患者随机分为3组,A组(n=46)单用干扰素α-2 b治疗,B组(n=42)应用干扰素α-2 b与阿德福韦酯初始联合治疗,C组(n=83)应用干扰素α-2 b治疗26周后进行评估,应答较佳者(C 1组,n=36)继续单用干扰素治疗,应答不佳者(C 2组,n=47)加用阿德福韦酯治疗。各组患者的干扰素均于52周后停药,继续随访至104周,阿德福韦酯持续口服至104周。观察各组的生化学、病毒学、免疫学和联合应答率。结果治疗后26、52、104周,联合用药组的病毒学应答率均高于干扰素单药组(均P<0.001)。治疗后104周,观察组(B组、C 1组和C 2组)的生化学应答率、HBe Ag血清转换率均高于对照组(P=0.014,P=0.024),其中B组的联合应答率亦显著高于A组(P=0.027)。各组患者治疗期间未出现严重不良反应。结论相对于单用干扰素,联合阿德福韦酯治疗高病毒载量HBe Ag阳性慢性乙型肝炎能够获得更高的应答率。 展开更多
关键词 病毒性肝炎 乙型 干扰素 阿德福韦酯 疗效
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细菌的IV型分泌系统 被引量:12
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作者 赵岩 李明 胡福泉 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期128-133,共6页
细菌的分泌系统与细菌的生存及致病性密切相关。细菌的分泌系统包括I-VI型,其中,IV型分泌系统是与细菌接合机制有关的一类分泌系统。IV型分泌系统不但可以转运DNA,还可以转运蛋白质及核糖核蛋白复合物等大分子物质,这点区别于其他几种... 细菌的分泌系统与细菌的生存及致病性密切相关。细菌的分泌系统包括I-VI型,其中,IV型分泌系统是与细菌接合机制有关的一类分泌系统。IV型分泌系统不但可以转运DNA,还可以转运蛋白质及核糖核蛋白复合物等大分子物质,这点区别于其他几种分泌系统。IV型分泌系统介导基因水平转移,通过细菌间接合作用,传递抗性基因和毒力基因,有利于细菌进化;另一方面,IV型分泌系统转运效应蛋白质分子到宿主细胞,参与细菌致病。本文着重从IV型分泌系统几种主要类型的分泌机制等方面对IV型分泌系统进行概述。 展开更多
关键词 IV型分泌系统 VirB/vird4系统 Dot/Icm系统 基因组岛
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