大孔吸附树脂纯化重组降血压肽VLPVPR的研究

考察大孔吸附树脂(DA201-CⅡ,D4020和HPD100B)对重组降血压肽VLPVPR的吸附性能及纯化效果,确立纯化VLPVPR的优化工艺。通过大孔树脂静态吸附解吸及动态吸附解吸实验,结果表明DA201-CⅡ最适于VLPVPR的纯化。最优纯化工艺为:样品pH9.8,上样流速为2mL/min,上样量为100mL,70%乙醇洗脱75mL,洗脱流速为2.7mL/min。该条件下VLPVPR的回收率为96.9%,纯度为27.4%。

凝胶层析和离子交换层析结合法纯化重组降血压肽VLPVPR

为了提高VLPVPR的纯度,采用凝胶层析结合离子交换层析的方法对VLPVPR进行纯化。先用Sephadex G-10凝胶对VLPVPR溶液脱盐,再考察离子交换剂(SP Sepharose Fast Flow和Q Sepharose Fast Flow)对重组降血压肽VLPVPR的纯化效果,确立纯化VLPVPR的优化工艺。实验结果表明SP Sepharose Fast Flow不适于VLPVPR的纯化。采用Q Sepharose Fast Flow的纯化工艺为:上样量为柱床体积的10%,用10mmol/L pH9.0的CHES缓冲液洗脱,流速为1mL/min。VLPVPR回收率为93.8%,纯度达到47.2%。采用Q Sepharose Fast Flow纯化提高了VLPVPR的纯度。

大孔树脂纯化血管紧张素酶抑制肽VLPVPR的工艺优化

考察大孔树脂(AB8,D101,DM130,HPD100B,HPD826)对血管紧张素酶抑制肽VLPVPR的吸附性能及纯化效果,确立纯化VLPVPR的较优工艺。结果表明,HPD100B最适于VLPVPR的纯化。最优纯化工艺为:温度20℃,pH9.8,上样流速为3mL/(cm2·min),上样量达到180mL,洗脱液乙醇溶液浓度为60%,洗脱流速为0.25mL/(cm2·min),洗脱体积为45mL。此条件下,VLPVPR的解吸率达93.1%,纯度为28.8%,血管紧张素酶抑制率IC50为4.1μmol/L。

胰蛋白酶水解工程菌表达产物制备重组降血压肽

本实验研究了胰蛋白酶对工程菌E.coliBL21表达产物的酶解作用,以酶解产物降血压多肽VLPVPR含量为指标,分析pH值、酶解温度、酶浓度和酶解时间等因素对酶解反应的影响。结果表明,最佳酶解条件为:酶解温度37℃,pH8.0,酶浓度90U/mL,酶解时间4h。在此条件下酶解产物VLPVPR含量为211.1mg/L。