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辽宁沈阳株猫泛白细胞减少症病毒VP2基因扩增及生物信息学分析
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作者 刘琪 刘正伟 +4 位作者 梁琳 张利 郝春晖 李玥 赵福庆 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期23-32,共10页
【目的】通过生物信息学方法分析1株2022年辽宁沈阳地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus, FPV)LN3株VP2蛋白的分子特征。【方法】利用FPV胶体金试纸条对临床上表现呕吐、腹泻等症状的患病猫粪便进行检测,提取该病猫粪... 【目的】通过生物信息学方法分析1株2022年辽宁沈阳地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus, FPV)LN3株VP2蛋白的分子特征。【方法】利用FPV胶体金试纸条对临床上表现呕吐、腹泻等症状的患病猫粪便进行检测,提取该病猫粪便的病毒DNA进行FPV VP2基因PCR扩增及测序,使用Seqman软件对序列进行拼接。将所获序列与NCBI数据库中FPV和犬细小病毒(Canine parvovirus, CPV)的VP2基因进行相似性比对及遗传进化分析。使用生物信息学软件对该毒株VP2蛋白进行预测,包括理化性质、亲/疏水性、跨膜区、糖基化位点、亚细胞定位、二级结构、三级结构等。【结果】FPV LN3株VP2基因全长1 755 bp,编码584个氨基酸;与GenBank上登录的15株FPV同属一个大分支,相似性为98.9%~99.7%;与CPV处于不同分支上。生物信息学软件预测显示,FPV LN3株VP2蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构;含有7个潜在N-糖基化位点、86个O-糖基化位点和50个磷酸化位点;VP2蛋白在细胞质、细胞核、线粒体中的可能性分别为43.5%、34.8%和21.7%;VP2蛋白二级结构中无规则卷曲、α-螺旋、延伸链、β-转角分别占61.82%、8.90%、24.32%及4.97%,三级结构预测结果与其一致;VP2蛋白共有20个抗原表位。【结论】VP2是FPV遗传变异的关键基因,FPV LN3株VP2蛋白属于亲水性、非跨膜稳定蛋白,共存在20个抗原表位。试验结果为进一步研究FPV VP2蛋白功能及研发新型疫苗提供理论依据。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 vp2基因 生物信息学 蛋白结构
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猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 王文婕 茹鹏辉 +5 位作者 郁川 杜付熙 陈松彪 尚珂 张春杰 程相朝 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1511-1521,共11页
【目的】研究旨在对猫细小病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)洛阳分离株VP2蛋白进行原核表达和鼠源多克隆抗体制备。【方法】根据已公布的FPV VP 2基因序列(GenBank登录号:EU018143.1)设计1对特异性引物,以洛阳地区7例疑似FPV感染... 【目的】研究旨在对猫细小病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)洛阳分离株VP2蛋白进行原核表达和鼠源多克隆抗体制备。【方法】根据已公布的FPV VP 2基因序列(GenBank登录号:EU018143.1)设计1对特异性引物,以洛阳地区7例疑似FPV感染猫粪便为样本提取DNA,对VP 2基因进行PCR鉴定及测序,利用Mega 11.0软件对VP 2基因进行遗传进化分析;应用在线软件预测分离株VP2蛋白结构特征并找出优势抗原表位,克隆VP2优势抗原(sVP2)并连接pET-32a(+)载体,构建pET-32a-sVP2重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞后进行诱导表达,对重组蛋白表达条件进行优化,并使用SDS-PAGE与Western blotting方法进行鉴定;将pET-32a-sVP2用镍柱亲和层析蛋白纯化后免疫BABL/c小鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价。【结果】分离得到1株FPV,命名为LY-1。遗传进化分析发现,该毒株属于FPV-G2亚群,与北京株(GenBank登录号:MT270581)亲缘关系最近。生物信息学分析显示,VP2属于稳定膜内蛋白,无信号肽与跨膜区,在N-端具有丰富的B细胞抗原表位(1―800 bp,sVP2)。试验成功构建pET-32a-sVP2重组质粒并表达,SDS-PAGE显示重组蛋白分子质量约50 ku,主要以包涵体形式存在,在30℃、1 mmol/L IPTG诱导6 h蛋白表达量最佳;Western blotting结果表明,重组蛋白能与鼠抗His单克隆抗体发生特异性反应;ELISA结果表明,该重组蛋白抗体效价为1∶128000,能够较好地识别免疫原sVP2和原核表达VP2蛋白并发生特异性反应。【结论】本试验克隆获得FPV sVP2片段,并制备多克隆抗体,为进一步研究VP2在FPV复制和致病过程中的作用及建立诊断FPV方法提供参考。 展开更多
关键词 猫细小病毒(FPV) 洛阳分离株 vp 2基因 原核表达 多克隆抗体
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Analysis of Genetic Variation of VP2 Gene in 6 FPV Strainsin China 被引量:2
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作者 Jianxin Wen Zhiqiang Wang Jianwei Ren 《Advances in Microbiology》 2021年第4期191-198,共8页
In order to understand the variation of FPV strains in the Jinan area, Shandong Province, China, the VP2 gene of 6 FPV strains was sequenced, and the analysis of the genetic relationship, evolution and main functional... In order to understand the variation of FPV strains in the Jinan area, Shandong Province, China, the VP2 gene of 6 FPV strains was sequenced, and the analysis of the genetic relationship, evolution and main functional site variation was carried out. It was found that FPV-XY2, FPV-XY3 and FPV-XY6 were the same strain with 100% homology, and also close to FPV-XY1, and the homology between FPV-XY4 and FPV-XY5 was close. The homology between the reference strain and the test strain was over 99.3%. According to the evolutionary analysis, the genetic relationship among FPV-XY1, FPV-XY2, FPV-XY3, FPV-XY6 was close, and the genetic relationship between FPV-XY4 and FPV-XY5 was close, and the result was similar to the homologous result. Compared with the VP2 amino acid sequence of the standard strain FPV-CU4, the VP2 protein of all the test strains changed from I to t on the 101st Amino acid, this may be the cause of immune failure in these 6 cases;the change of a to s in the 91st amino acid position of FPV-XY1, FPV-XY2, FPV-XY3, FPV-XY6 may be the cause of enhanced virulence of FPV. This study provides a reference for exploring the epidemic law of FP in the Jinan area, the standard of FP treatment plan and the research and development of FPV subunit vaccine. 展开更多
关键词 Feline Panleukopenia Feline Panleukopenia Virus vp2 gene EVOLUTIONARY
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犬细小病毒VP2蛋白的原核表达与纯化 被引量:8
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作者 龙丹丹 嵇辛勤 +5 位作者 段志强 阮涌 陈强 雷云 万彪 胡焱 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第3期643-649,共7页
为了研究犬细小病毒(canine parovirus,CPV)VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPVVP2基因插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3... 为了研究犬细小病毒(canine parovirus,CPV)VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPVVP2基因插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件。最佳条件下的诱导产物经超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,重组质粒pET-VP2经双酶切鉴定分别获得大小为5 900bp左右的载体条带和1 755bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-VP2重组质粒;重组VP2蛋白的分子质量约为64ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0mmol/L IPTG、诱导5h条件下表达量最高,条带最亮;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,只在沉淀中出现了目的条带,而上清中并未出现相应条带,说明重组蛋白均以包涵体的形式存在;纯化后获得的重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在64ku处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-VP2。本试验通过对CPV VP2蛋白的原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的CPV VP2蛋白,为今后制备CPV VP2蛋白多克隆抗体及进一步研究该蛋白在对治疗犬细小病毒病中的临床应用价值提供了基础理论依据。 展开更多
关键词 犬细小病毒(CPV) vp2基因 原核表达 纯化
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番鸭细小病毒强、弱毒株VP2基因的序列测定比较 被引量:6
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作者 娄华 白挨泉 +3 位作者 顾万军 贺东生 杨德威 刘福安 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期175-179,共5页
According to the complete nucleotide sequence of Muscovy duck parvovirus registered in the gene bank, two modified primers (LHMP7/LHMP8) were designed and, for each of them, a restriction endonuclease recognition site... According to the complete nucleotide sequence of Muscovy duck parvovirus registered in the gene bank, two modified primers (LHMP7/LHMP8) were designed and, for each of them, a restriction endonuclease recognition site, SacⅡ or KpnⅠ, was included respectively. The DNA encoding VP2 structural protein of the wild strain MDPV Q and the attenuated strain MDPV 26 which had been derived by continued passage of virulent wild type (MDPV Q) in Muscovy duck embryo were amplified by PCR and recombined into T vector and sequenced respectively. It shows that both DNA encoding VP 2 structural protein of MDPV Q and MDPV which has been registered in the gene bank had the high homology (97.9%). MDPV 26 and MDPV Q displayed 99.7% identity, and shared 98.3% homology with that of reported MDPV. 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 vp2基因克隆 序列测定
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传染性法氏囊病病毒超强毒株F9811VP_2基因的克隆及序列分析 被引量:3
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作者 宋秀龙 李春梅 +3 位作者 王笑梅 陈冠春 陈奖励 王秀荣 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期223-226,共4页
根据 NCBIG Gene Bank记载的传染性法氏囊病病毒超强毒 ( vv IBDV) OKYM株的核苷酸序列 ,设计并合成 1对特异性扩增 IBDV主要宿主保护性抗原 VP2 基因的引物。从 IBDV F981 1感染发病鸡法氏囊组织中提取病毒 RNA,经 RT-PCR扩增出约 1 .... 根据 NCBIG Gene Bank记载的传染性法氏囊病病毒超强毒 ( vv IBDV) OKYM株的核苷酸序列 ,设计并合成 1对特异性扩增 IBDV主要宿主保护性抗原 VP2 基因的引物。从 IBDV F981 1感染发病鸡法氏囊组织中提取病毒 RNA,经 RT-PCR扩增出约 1 .5kb的基因片段 ,采用平端连接法将此基因片段克隆至p UC1 1 9质粒的 Sma 位点上。经核苷酸序列测定 ,并与国内外其他 vv IBDV VP2 基因序列进行比较分析 ,发现 F981 1与 OKYM在 VP2 基因上有 1 8个核苷酸不同 ,但在氨基酸序列上仅 2 1 2位存在差异 ,从而从分子生物学角度证明 F981 1为 vv IBDV。对 1 4 3~ 3 82氨基酸区域所作系统进化树分析表明 ,F981 1、G92 0 1与OKYM、UK661、HK4 6相近 ,而 F950 2、G93 0 3与 OKYM、U K661、HK4 6较远 ,说明我国存在许多不同的vv 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 超强毒株 基因克隆 序列分析
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虎源猫瘟热病毒VP2蛋白基因在毕赤酵母中的表达 被引量:5
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作者 杨松涛 夏咸柱 +7 位作者 乔军 王铁成 郑明光 常爽 黄耕 苏建青 冯娜 王化磊 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期29-32,共4页
克隆了虎源猫瘟热病毒VP 2蛋白基因并首次在Pichia pastoris酵母中进行了分泌表达。用特异性引物从虎源FPV中扩增出VP 2基因,将其克隆到pGEM-T载体中,得到重组质粒pTVP 2进行测序。用EcoR I和NotI双酶切pTVP 2,回收目的基因VP 2片段将... 克隆了虎源猫瘟热病毒VP 2蛋白基因并首次在Pichia pastoris酵母中进行了分泌表达。用特异性引物从虎源FPV中扩增出VP 2基因,将其克隆到pGEM-T载体中,得到重组质粒pTVP 2进行测序。用EcoR I和NotI双酶切pTVP 2,回收目的基因VP 2片段将其定向克隆到pPICZαA中,构建出重组质粒pPICZαAVP 2。将pPICZαAVP 2用SacI内切酶线性化后,电转化毕赤酵母细胞GS115,PCR法筛选阳性重组酵母,并用1%甲醇诱导表达。结果在重组酵母菌培养物上清中经SDS-PAGE检测到相对分子量约为32 kD的重组蛋白,W estern-b lotting证实该重组蛋白可以与FPV多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明重组VP 2蛋白具有正确的空间构象,有望作为虎FPV感染的诊断和免疫预防用抗原。 展开更多
关键词 猫瘟热病毒 vp2蛋白基因 毕赤酵母 表达
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蓝舌病毒内蒙古分离株VP_2基因3′端序列的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 李充璧 方天祺 +2 位作者 王升启 程建国 刘小强 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第6期755-757,共3页
内蒙古巴盟地区分离的蓝舌病毒株(BTV-NM)经反转录PCR,克隆、测序、进行计算机分析,证明该部分序列与呼肠孤病毒3 型L3 基因组片段有高度同源性,达91% ,与BTV 17VP2 基因比较,一致性为47%
关键词 蓝舌病毒 vp2基因序列 克隆 家畜 呼肠孤病毒科
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鸡贫血病病毒VP_2基因在大肠杆菌中的表达及其特性 被引量:1
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作者 刘岳龙 秦爱建 +4 位作者 金文杰 叶建强 吉荣 崔治中 段玉友 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期30-32,共3页
将鸡贫血病病毒 (chicken anaem ia virus,CAV) VP2 基因克隆入表达性载体 p GEX- 5 X- 3,在大肠杆菌以谷胱甘肽转移酶 (GST)融合蛋白的形式获得了表达。以此表达产物免疫小鼠 ,制备抗 CAV VP2 的多克隆抗体。通过对 CAV感染的 MSB1细... 将鸡贫血病病毒 (chicken anaem ia virus,CAV) VP2 基因克隆入表达性载体 p GEX- 5 X- 3,在大肠杆菌以谷胱甘肽转移酶 (GST)融合蛋白的形式获得了表达。以此表达产物免疫小鼠 ,制备抗 CAV VP2 的多克隆抗体。通过对 CAV感染的 MSB1细胞作间接免疫荧光试验 (IFA)检测 ,结果为阳性 ,这表明表达产物保留了 CAV相关的抗原特性。本研究为进一步探索 CAV VP2 的生物学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡贫血病病毒 vp2基因 大肠杆菌 表达 特性
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水貂肠炎细小病毒结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析 被引量:5
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作者 闫喜军 张海玲 +5 位作者 柴秀丽 吴威 易立 王凤雪 邵西群 罗国良 《特产研究》 2007年第4期1-3,6,共4页
对水貂肠炎细小病毒SMPV-11株结构蛋白VP2基因进行扩增,获得了基因序列全长为1755bp的SMPV-11株VP2基因,其编码584个氨基酸;应用DNAStar分析软件对该序列进行同源性分析发现,SMPV-11株VP2基因与其他6株水貂肠炎细小病毒株核苷酸和氨基... 对水貂肠炎细小病毒SMPV-11株结构蛋白VP2基因进行扩增,获得了基因序列全长为1755bp的SMPV-11株VP2基因,其编码584个氨基酸;应用DNAStar分析软件对该序列进行同源性分析发现,SMPV-11株VP2基因与其他6株水貂肠炎细小病毒株核苷酸和氨基酸均有较高的同源性,分别为99.2%~99.4%和98.6%~99.1%,与猫泛白细胞减少症病毒标准株CU-4株同源性为99.3%和99.1%,系统发生树分析表明它们属于同一个分支。本研究为水貂肠炎细小病毒分子流行病学调查和新型疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 水貂肠炎细小病毒 vp2基因 序列分析
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鸡传染性法氏囊病病毒内蒙古毒株VP2基因的克隆和序列分析 被引量:1
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作者 哈斯阿古拉 张彤 +1 位作者 张七斤 张鹤龄 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第S1期76-79,81-83,共7页
以鸡传染性法氏囊病病毒内蒙古毒株(IBDVNM)dsRNA为模板,用RTPCR法扩增其主要寄主保护抗原VP2基因的全长cDNA,克隆于pUC19的XbaI/KpnI位点,进行了全序列分析。序列比较发现IBDVN... 以鸡传染性法氏囊病病毒内蒙古毒株(IBDVNM)dsRNA为模板,用RTPCR法扩增其主要寄主保护抗原VP2基因的全长cDNA,克隆于pUC19的XbaI/KpnI位点,进行了全序列分析。序列比较发现IBDVNM毒株VP2基因与已报道的其它7个IBDVCJ801bkf、Cu1、PBG98、52/70、002—73、STC及VariantE毒株之间高度同源,其核苷酸序列的同源率为916%~96.2%,推测的氨基酸序列的同源率为962%~98.6%。IBDVNM毒株VP2高变异区的第一个亲水区氨基酸序列与CJ801bkf、Cu1、PBG98、52/70、STC、002—73比较,有一个氨基酸差异,第二个亲水区氨基酸序列与上述6个毒株完全相同。而与VariantE比较,两个亲水区内各有两个氨基酸差异。此外,IBDVNM毒株VP2具有强毒株所特有的7肽保守区:SWSASGS。这些结果表明,IBDVNM毒株为标准血清Ⅰ型IBDV强毒株。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 主要寄主保护抗原 vp2 基因克隆 核苷酸序列
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IBDV细胞适应株的驯化及其VP2基因的分子特征分析 被引量:1
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作者 王洁琼 赵玉杰 +4 位作者 周薇帆 周云飞 陈田田 刘建勋 李新生 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2018年第8期1-8,共8页
【目的】对从河南某地区发病鸡群中分离出的1株IBDV进行驯化使适应永生细胞DF-1,并对其VP2基因进行克隆和生物信息学分析,对IBDV分离株及其细胞适应株的VP2高变区及七肽区进行比较。【方法】测定IBDV分离株X1对10日龄SPF鸡胚的半数致死... 【目的】对从河南某地区发病鸡群中分离出的1株IBDV进行驯化使适应永生细胞DF-1,并对其VP2基因进行克隆和生物信息学分析,对IBDV分离株及其细胞适应株的VP2高变区及七肽区进行比较。【方法】测定IBDV分离株X1对10日龄SPF鸡胚的半数致死量(ELD50);通过SPF鸡胚-CEF-DF-1途径对X1进行驯化,使其适应永生细胞DF-1;根据IBDVVP2基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV分离株和细胞适应株的VP2基因并测序,将其与参考毒株进行同源性和进化树分析,同时对二者在VP2高变区及七肽区的推导氨基酸序列进行对比分析。【结果】IBDV分离株X1对10日龄SPF鸡胚的ELD_(50)为10-8 mL^(-1),经驯化获得了细胞适应株C1。对2株病毒的VP2基因进行克隆并鉴定,测序分析得IBDV X1株在第222,256,294和299位上具有A、I、I、S4个特征性氨基酸,与IBDV超强毒株(vvIBDV)HK46 VP2基因氨基酸序列的同源性高达99.3%,确定X1株为IBDV超强毒株。同源性及进化树分析结果显示,C1株与IBDV减毒株CEF94亲缘关系较近,同源性较高,为99.6%,确定C1株为IBDV减毒株。在VP2高变区及七肽区推导氨基酸比对中显示,C1株第330位精氨酸R取代了X1株在330位的丝氨酸S;第222位氨基酸由A变成P;决定病毒毒力的位点第256和284位分别由I、A变为V和T。【结论】成功驯化了1株vvIBDV使其适应细胞,初步揭示vvIBDV在适应细胞、从超强毒力向弱毒力转化的过程中,VP2高变区及七肽区氨基酸序列有明显变化。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 vp2基因 基因克隆 序列分析
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鸡传染性法氏囊病病毒BJ-10株VP2基因的克隆及原核表达 被引量:1
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作者 王俊全 王韦华 刘桂梅 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第9期38-42,共5页
【目的】克隆鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJ-10株VP2基因,构建其原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行高效表达。【方法】根据IBDVVP2基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV BJ-10株VP2基因;将目的基因插入pMD18-T连接载体,... 【目的】克隆鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJ-10株VP2基因,构建其原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行高效表达。【方法】根据IBDVVP2基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV BJ-10株VP2基因;将目的基因插入pMD18-T连接载体,筛选出阳性重组质粒;将该质粒克隆至原核表达载体pET-32α中,转化入JM109,经IPTG诱导表达,对产物进行SDS-PAGE电泳分析,确定IPTG的最佳诱导表达时间和浓度。【结果】克隆到了全长1 356bp的IBDV BJ-10株VP2基因;PCR、酶切鉴定分析表明,成功构建了重组质粒pET-32α-VP2;SDS-PAGE电泳分析表明,在宿主菌JM109中成功表达了约为60ku的VP2蛋白;IPTG诱导表达时间以4.5h为宜,诱导最佳浓度为0.8mmol/L。【结论】成功克隆了IBDV BJ-10株VP2基因,并在大肠埃希菌中表达了VP2蛋白。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 vp2基因 基因克隆 原核表达载体
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传染性法氏囊病病毒VP_2基因真核细胞表达载体的构建及免疫应用研究 被引量:3
14
作者 陈创夫 乔军 +2 位作者 王金富 田晶华 张高轩 《动物科学与动物医学》 2001年第6期29-32,共4页
应用 DNA重组技术将含有 IBDV保护性抗原 VP2 质粒 ,以 Eco RI、xho I酶切 ,将酶切得到的 VP2 基因移入到载体 pc DNA3 CMV启动子下游 ,得到含有 IBDV VP2 基因的真核表达载体 pc D-VP2 基因疫苗。pc DVP2 体外转染细胞能正确表达目的... 应用 DNA重组技术将含有 IBDV保护性抗原 VP2 质粒 ,以 Eco RI、xho I酶切 ,将酶切得到的 VP2 基因移入到载体 pc DNA3 CMV启动子下游 ,得到含有 IBDV VP2 基因的真核表达载体 pc D-VP2 基因疫苗。pc DVP2 体外转染细胞能正确表达目的蛋白。免疫雏鸡后 2 0 d,在体内可检测到特异性抗体。 展开更多
关键词 vp2基因 基因疫苗 免疫 真核细胞表达载体 鸡病 传染性法氏囊病病毒
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人类博卡病毒结构蛋白基因VP2的克隆与表达 被引量:1
15
作者 陈莹 张丹 +1 位作者 李京京 李毅 《化学与生物工程》 CAS 2010年第3期67-69,共3页
采用PCR方法扩增出人类博卡病毒结构蛋白基因VP2,通过双酶切、连接、转化等方法将VP2基因克隆到原核表达载体pMAL-c2x上,构建重组质粒pMAL-c2x-VP2,通过双酶切检测重组质粒构建成功;用0.8 mmol.L-1IPTG诱导融合蛋白表达,经SDS-PAGE检测... 采用PCR方法扩增出人类博卡病毒结构蛋白基因VP2,通过双酶切、连接、转化等方法将VP2基因克隆到原核表达载体pMAL-c2x上,构建重组质粒pMAL-c2x-VP2,通过双酶切检测重组质粒构建成功;用0.8 mmol.L-1IPTG诱导融合蛋白表达,经SDS-PAGE检测、Western Blot分析,证明目的蛋白得到了表达。可为目的蛋白的纯化及结构和功能的研究、相应抗体的制备打下坚实的基础。 展开更多
关键词 人类博卡病毒 结构蛋白基因vp2 克隆 表达
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广州地区犬细小病毒VP2基因的序列分析 被引量:4
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作者 许冬蕾 任常宝 +5 位作者 张晓战 陈叶 余文兰 葛曾旭 陈瑞爱 唐兆新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期38-42,共5页
犬细小病毒病是一种高度接触性传染病,临床上以急性出血性肠炎和心肌炎为特征。为研究广州地区犬细小病毒病的流行亚型,本试验采集2011—2012年间疑似病犬粪便,进行犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)分离鉴定,提取病毒基因组进行VP2基... 犬细小病毒病是一种高度接触性传染病,临床上以急性出血性肠炎和心肌炎为特征。为研究广州地区犬细小病毒病的流行亚型,本试验采集2011—2012年间疑似病犬粪便,进行犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)分离鉴定,提取病毒基因组进行VP2基因扩增和序列分析,与GenBank中登录的参考毒株进行比对,结果发现,分离的8株CPV中SCAU-5为CPV-2b亚型,其余为CPV-2a亚型。结果表明,2011—2012年间广州地区的流行毒株以CPV-2a亚型为主。 展开更多
关键词 犬细小病毒 vp2基因 序列分析 广州
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共表达鸡传染性法氏囊病病毒LX株VP2基因及鸡新城疫病毒PX02/3株F基因的重组火鸡疱疹病毒的构建 被引量:4
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作者 王子书 王萍 +3 位作者 许健 杨大为 李永清 江波 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期26-30,I0004,I0005,共7页
为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1... 为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1-10插入pec启动子调控下的NDV PX02/3株的F基因表达盒,成功构建并拯救出同时表达IBDV和NDV保护性抗原基因的重组HVT病毒(rHVT-VP2-F)。经PCR、Western Blot、IFA鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的VP2蛋白和F蛋白。本研究为研制rHVT-VP2-F活载体疫苗提供了科学依据。 展开更多
关键词 新城疫病毒 传染性法氏囊病病毒 重组火鸡疱疹病毒 F基因 vp 2基因
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传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆和鉴定 被引量:2
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作者 陈忠斌 徐宜为 +4 位作者 于康震 王艳华 袁世山 王秀丽 卢景良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期5-7,共3页
以鸡胚成纤维细胞培养IBDV弱毒疫苗株D78,经蔗糖密度梯度离心纯化,电镜下见典型IBDV粒子。用SDS-蛋白酶K法提取病毒基因组,低熔点胶回收,琼脂糖凝胶电泳,可见IBDV典型双节段基因组。根据已发表的IBDV基因... 以鸡胚成纤维细胞培养IBDV弱毒疫苗株D78,经蔗糖密度梯度离心纯化,电镜下见典型IBDV粒子。用SDS-蛋白酶K法提取病毒基因组,低熔点胶回收,琼脂糖凝胶电泳,可见IBDV典型双节段基因组。根据已发表的IBDV基因组序列,设计并合成了1对特异扩增IBDVVP2基因的引物。以IBDV基因组为模板,利用RT-PCR技术扩增出了1.5kb的cDNA产物,将PCR产物适当处理后与经SmaⅠ酶切的pUC19质粒平端连接,转化大肠杆菌DH5α,在含Amp、Χ-gal和IPTG的琼脂平板上培养,产生大量白色菌落。挑取白色菌落,经质粒大小比较分析初步筛选到一重组质粒。以重组质粒DNA为模板作PCR检测和部分酶切分析证实。 展开更多
关键词 IBDV 病毒 vp2基因 基因克隆 RT-PCR
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14株北京地区犬细小病毒分离毒株的VP2、NS1基因序列分析 被引量:5
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作者 李少晗 由欣月 +4 位作者 范君文 徐一 郝雲峰 崔尚金 秦彤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期262-267,共6页
从北京地区疑似细小病毒感染的犬粪拭子中成功分离鉴定出14株犬细小病毒(CPV)毒株,并对其完整的VP2和NS1基因进行了序列分析。结果表明,鉴定到的14株CPV毒株中,7株为New CPV-2a型,7株为CPV-2c型。此外,NS1的19、33、293、588、624和656... 从北京地区疑似细小病毒感染的犬粪拭子中成功分离鉴定出14株犬细小病毒(CPV)毒株,并对其完整的VP2和NS1基因进行了序列分析。结果表明,鉴定到的14株CPV毒株中,7株为New CPV-2a型,7株为CPV-2c型。此外,NS1的19、33、293、588、624和656位氨基酸以及VP2的13、574位氨基酸为新鉴定的氨基酸突变位点。基于VP2、NS1基因的系统进化分析表明,大部分的New CPV-2a型和CPV-2c型毒株与广西南宁和吉林长春地区的分离毒株亲缘关系密切,说明本次分离毒株与广西或吉林地区分离毒株具有相同的起源。本研究为更好地开展犬细小病毒流行病学调查提供了有益借鉴,也为深入研究犬细小病毒变异和传播的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 分离鉴定 vp2基因 NS1基因 进化分析
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VP-16诱导PC-3细胞凋亡和bcl-2及c-myc基因表达的研究
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作者 李登欣 董素芹 +2 位作者 张建业 张莲英 何维敬 《潍坊医学院学报》 2000年第3期174-176,共3页
目的 研究 VP- 1 6诱导 PC- 3细胞凋亡和癌基因 bcl- 2及 C- myc表达的关系。方法 用末端标记法(TUNEL )和流式细胞术 (FCM)研究 PC- 3细胞凋亡 ,以免疫组化方法研究 bcl- 2及 C- myc蛋白的表达。结果  TUNEL和FCM检测表明 ,PC- 3细... 目的 研究 VP- 1 6诱导 PC- 3细胞凋亡和癌基因 bcl- 2及 C- myc表达的关系。方法 用末端标记法(TUNEL )和流式细胞术 (FCM)研究 PC- 3细胞凋亡 ,以免疫组化方法研究 bcl- 2及 C- myc蛋白的表达。结果  TUNEL和FCM检测表明 ,PC- 3细胞的凋亡率随 VP- 1 6作用浓度增加和作用时间延长而升高 ;免疫组化结果显示 :bcl- 2和 c- myc基因表达的阳性百分率随 VP- 1 6作用浓度增加和作用时间延长而降低。结论 VP- 1 6能够诱导 PC- 3细胞凋亡和抑制其bcl- 2和 c- myc基因的表达 ,且具有作用浓度和作用时间依赖性。 展开更多
关键词 细胞凋亡 PC-3细胞 BCL-2基因 前列腺癌
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