蚕豆萎蔫病毒2号VP37蛋白在BY-2细胞内的定位

将绿色荧光蛋白(GFP)连接于蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus2,BBWV-2)VP37蛋白的N-端,构建融合基因GFP-VP37,用农杆菌法在BY-2悬浮细胞内进行表达,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的分布。结果显示:GFP-VP37主要定位于细胞核的周围呈网络状,并在细胞边缘形成点状结构;ER-tracker标记显示VP37在细胞内与内质网共定位;电镜免疫金标记显示VP37蛋白主要定位在细胞质中;用BFA处理转染细胞后,VP37在细胞质及细胞边缘的定位受到抑制。推测内质网参与VP37的细胞内转运和分布。

发酵条件对细菌工程菌产WSSV-VP37的影响

在pBAD/gIIIA-VP37重组表达载体构建的基础上,研究发酵工艺参数对重组WSSV-VP37(rVP37)蛋白表达量的影响,并对重组质粒的稳定性和重组菌的生长进行研究。结果表明,pBAD/gIIIA-VP37表达的rVP37以包涵体形式存在于菌体中,发酵温度及诱导时间影响rVP37蛋白表达和菌体产量,以37℃诱导5h最佳。重组质粒在宿主菌中具有良好的分离稳定性,WSSV-VP37基因的插入对宿主菌的生长规律影响不大。

中国对虾血淋巴细胞的原代培养及其与量子点标记的VP37p的作用

血淋巴细胞是对虾白斑综合征病毒(WSSV)靶细胞之一,WSSV结构蛋白与血淋巴细胞的作用在病毒感染中起重要作用。论文主要研究中国对虾血淋巴细胞的原代培养及在原代细胞培养条件下观察重组表达的对虾白斑综合征病毒VP37片段(VP37p)与对虾血淋巴细胞的作用。试验表明,中国对虾血淋巴细胞体外培养可存活12d,体外培养的对虾血淋巴细胞与量子点标记的VP37p具有相互作用。

WSSV-VP37小肽在大肠杆菌中的偏爱型表达

选用对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)囊膜蛋白VP37的功能区段,利用大肠杆菌密码子偏爱性,在氨基酸不变的情况下将VP37中的密码子通过人工合成改为大肠杆菌偏爱型密码子,并克隆至表达载体pBAD/gIIIA中,构成重组载体pBAD/gIIIA-VP37p′。将重组载体转化入大肠杆菌Top10中,在相同条件下用L-阿拉伯糖与未优化的重组菌株Top10-pBAD/gIIIA-VP37p一同诱导。结果显示,与野生型基因VP37p相比,经密码子优化的VP37p′基因表达目的蛋白量占总蛋白的40.5%,明显高于野生型6.5%的目的蛋白表达量。

抑制Rho/ROCK通路促进酒精干预星形胶质细胞内吞功能及相关基因Vps37c表达

目的分析酒精及Rho/ROCK路抑制对星形胶质细胞转录组的影响。方法本研究以CTX TNA2大鼠星形胶质细胞为研究对象,选用酒精及Rho/ROCK通路抑制剂法舒地尔进行干预,实验分为对照组、酒精组及法舒地尔组;各组样本干预后Trizol法提取样本总RNA,基于HiSeq平台进行Illumina转录组测序;利用KEGG数据库进行注释及富集分析;qRT-PCR对关键差异基因进行验证。结果酒精组与对照组相比较,获得差异基因14个,KEGG富集分析结果显示,氨基糖和核苷酸糖代谢通路及细胞内吞通路富集程度最高;法舒地尔组与酒精组相比较,获得差异基因149个,KEGG富集分析结果显示,细胞内吞通路排第6位;对照组与酒精组差异基因和酒精组与法舒地尔组差异基因进行差异分析,共获得共有差异基因5个,KEGG富集分析结果显示,细胞内吞通路通路富集程度最高;该通路涉及基因为Vps37c,对该基因进行qRT-PCR验证,结果显示,与对照组相比较,酒精干预后星形胶质细胞Vps37c mRNA表达降低;与酒精组相比较,法舒地尔干预后Vps37c mRNA表达升高。此结果与测序结果一致。结论酒精干预能够抑制星形胶质细胞内吞功能,抑制细胞内吞功能基因Vps37c表达;Rho/ROCK通路抑制能够促进星形胶质细胞内吞功能,促进细胞内吞功能基因Vps37c表达。