轮状病毒LLR疫苗株VP7基因的遗传变异研究

目的研究轮状病毒(RV)LLR疫苗株VP7基因的遗传特征,为疫苗的质量控制和发展提供依据。方法将LLR株轮状病毒毒种LLR38在原代牛肾细胞上连续传至49代。提取第38、43、44、49代病毒RNA。通过RT-PCR扩增VP7基因片段,将其克隆入质粒pGEM-T中,进行序列测定与分析。结果LLR株VP7基因全长1062bp,含编码326个氨基酸的单一的开放读码框架(ORF)。各代次病毒的VP7基因核苷酸与推导的氨基酸变化完全一致,与GenBanK中LLR参考株(L11602)同源性分别为99.9%和99.7%。与14株G10血清型RV毒株之间,核苷酸与推导的氨基酸序列同源性分别为84.3%～87.4%和92.7%～94.9%;与不同血清型RV代表株间,VP7基因核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为62.2%～76.8%和72.9%～83.1%;在A、B、C3个重要抗原表位,LLR株与同一血清型RV代表株B223氨基酸同源性高达97.5%,而与不同血清型仅为42.5%～62.5%。结论轮状病毒LLR疫苗株VP7基因具有良好的遗传稳定性,与来自不同国家同一型别的RV株VP7蛋白氨基酸序列之间无明显差异,在遗传上密切相关,从VP7基因分子水平证明LLR株毒种及其制备的疫苗是安全可靠的。

轮状病毒G3血清型抗原蛋白VP7在马铃薯中的表达

采用RT-PCR方法扩增得到轮状病毒外壳蛋白G3VP7基因,其5′端和3′端分别与马铃薯Y病毒(PVY)的前导序列和PVY 3′端的非编码区序列相连接,将拼接好的目的片段克隆到植物表达载体pB I121质粒上,利用三亲融合法将重组质粒转入农杆菌,农杆菌介导转化植株,经PCR、PCR-Southern b lot、Southern b lot和ELISA鉴定,确定VP7基因已转入马铃薯基因组,并得以正确表达,为以植物为生物反应器生产口服疫苗奠定了基础。