Valproic acid as a micro RNA modulator to promote neurite outgrowth

Valproic acid （VPA） has been a first-choice drug for clinical treatment of epilepsy and manic disorder. For decades, its phar- macological action was believed to act on inhibition of gam- ma-aminobutyric acid （GABA） transaminase, in turn, increas- ing GABA in inhibitory synapses. However, in recent years, VPA has been investigated on other therapeutic actions. Those investigations demonstrate that VPA shows neuroprotective ef- fects by promoting neurogenesis, neuronal differentiation, and neuroregeneration （Foti et al., 2013）.

Valproic Acid Enhances the Anti-tumor Effect of(-)-gossypol to Burkitt Lymphoma Namalwa Cells

Burkitt lymphoma is a highly aggressive B-cell neoplasm. New therapeutic methods are needed to overcome the adverse effect of intensive chemotherapy regimens. Valproic acid and （-）-gossypol are two kinds of chemical compounds used as new anti-tumor drugs in recent years.

应用VPA调节组蛋白乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase的影响

目的：探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠（VPA）调节染色体组蛋白低乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达及活性的影响,同时通过检测VPA与Caspase3、Caspase8、Caspase9特异性抑制剂协同作用后细胞凋亡的变化加以验证。方法：应用0.75~4.0 mmol/L VPA干预肝癌细胞HepG2、胃癌细胞BGC-823、乳腺癌细胞MCF-7 48小时后,流式细胞术分析细胞凋亡的变化;分光光度法检测Caspase3、Caspase8、Caspase9活性;流式细胞仪间接免疫荧光法定量分析Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达。结果：0.75~4.0 mmol/L VPA干预48小时后,FCM分析可见HepG2、BGC-823、MCF-7细胞凋亡率显著增加,与对照组比较差异有显著意义（P〈0.001）并且呈剂量依赖趋势;HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达均被明显上调、活性升高,与对照组相比有显著差异（P〈0.001）;Caspase8活性及蛋白表达在HepG2、MCF-7细胞未见明显改变,BGC-823细胞仅轻度增加。VPA与Caspase3、9相应特异性抑制剂共同作用后,Caspase3、Caspase9活性被抑制,细胞凋亡率较VPA单独干预组显著降低（P〈0.005）;VPA与Caspase8特异性抑制剂共同作用组细胞凋亡率与VPA单独作用组比较无明显变化（P〉0.05）。结论：应用VPA干预组蛋白乙酰化修饰对HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达及活性可起明显的调控作用;对Caspase8的调控作用则随肿瘤细胞来源及表型的不同而有所差异,但总体趋势不明显。

VPA对牛胎儿成纤维细胞体外培养的影响

为了研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)丙戊酸(VPA)处理对牛胎儿成纤维细胞体外培养的影响,试验采用培养到第3代的牛胎儿成纤维细胞经VPA处理后,进行细胞生长曲线绘制及形态、活力、细胞周期的检测,并通过Real-time PCR检测Oct4和Cdx2的表达情况,经梯度浓度的VPA处理牛胎儿成纤维细胞,于24 h后观察细胞形态。结果表明:当VPA浓度高于0.5 mmol/L时,细胞开始出现异常形态,死细胞数目增多。0.5 mmol/L VPA处理牛成纤维细胞24 h可以显著抑制细胞活力,可将60%以上细胞的周期阻滞在G0/G1期;但处理48 h将导致细胞染色体整倍率显著下降。与对照组相比,VPA处理后,Oct4的表达量显著升高,而Cdx2基因的表达量则显著降低。说明用HDACIs VPA处理过的牛成纤维细胞作为体细胞核移植的供体细胞,可能更有利于克隆胚胎重编程及发育。

黄连温胆汤辅助丙戊酸钠缓释片治疗痰火扰神型癫痫临床研究

目的:观察黄连温胆汤辅助丙戊酸钠缓释片治疗痰火扰神型癫痫的临床疗效。方法:采用随机数字表法将丽水市第二人民医院收治的62例痰火扰神型癫痫患者分为对照组与治疗组各31例。对照组口服丙戊酸钠缓释片治疗,治疗组给予丙戊酸钠缓释片联合黄连温胆汤治疗。比较2组治疗前后中医证候评分、简易智能精神状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、成人癫痫患者生活质量问卷-31-P (QOLIE-31)评分及炎症因子,评估2组临床疗效及不良反应发生情况。结果:治疗组总有效率96.77%,高于对照组77.42%(P<0.05)。治疗后,2组中医证候评分及白细胞介素-6 (IL-6)、白细胞介素-1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)水平均较治疗前降低(P<0.05),且治疗组中医证候评分及炎症因子均低于对照组(P<0.05)。2组治疗后MMSE、MoCA、QOLIE-31评分均较治疗前升高(P<0.05),且治疗组MMSE、 MoCA、 QOLIE-31评分高于对照组(P<0.05)。治疗组不良反应发生率6.45%,低于对照组29.03%(P<0.05)。结论:黄连温胆汤辅助丙戊酸钠缓释片治疗痰火扰神型癫痫疗效确切,能够改善患者症状,提升认知功能和生活质量,减少炎性反应,安全性较高。

应用丙戊酸钠调节组蛋白乙酰化修饰抑制肝癌细胞增殖的作用及机制

目的观察应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠调节染色体组蛋白低乙酰化水平对肝癌细胞增殖的作用，并进一步检测Cyctin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21^Waf/cip1蛋白及mRNA表达变化，探讨其分子作用机制。方法应用0．75～4．0mmol／L丙戊酸钠作用于肝癌细胞系HepG2细胞后，MTT法检测细胞生长抑制、细胞克隆形成试验观察克隆形成率、碘化丙啶标记流式细胞术检测细胞周期、间接免疫荧光法分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21^Waf/cip1蛋白表达，RT—PCR检测分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21^Waf/cip1 mRNA表达。结果0．75～4．0mmol／L丙戊酸钠作用24、48、72、96h，观察组出现了时间-剂量依赖趋势的生长抑制，同时细胞克隆形成率显著降低，对照组细胞增殖周期G1、S、M期所占比例未见明显改变，而观察组则随药物浓度、作用时间的不同而出现不同程度的细胞增殖周期G1期阻滞，G1期比例由55．4％～82．8％不等，差异有统计学意义（P〈0．01）。观察组Cyclin A、Cyclin D1蛋白及mRNA表达均被明显下调而P21^Waf/cip1蛋白、mRNA表达则被明显上调，与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）；而Cyclin E蛋白和mRNA表达变化则未见明显差异（P〉0．05）。结论通过应用特异性组蛋白脱乙酰酶抑制剂调节组蛋白乙酰化修饰可明显抑制肝癌细胞生长、抑制细胞克隆形成、阻滞细胞增殖周期于G1期；丙戊酸钠作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂可明显抑制肝癌细胞增殖，其作用机制是通过上调P21^Waf/cip1 mRNA蛋白表达，下调Cyclin D1、Cyclin A mRNA蛋白表达分别和／或协同实现。

丙戊酸治疗成人癫致血浆肉毒碱下降

目的观察丙戊酸(valproic acid,VPA)治疗成人癫患者后患者血浆游离肉毒碱改变规律,并探讨导致其改变的相关因素。方法VPA治疗组为41例成人癫患者,其中接受VPA单药治疗者33例,联合其他抗癫药物治疗者8例,30例非VPA治疗的成人癫患者作为癫对照组,包括其他抗癫药物治疗的患者14例,和未进行药物治疗的患者16例。33名同龄健康者作为正常对照,用酶循环法测定血浆游离肉毒碱浓度,3组间进行比较。结果VPA治疗组血浆游离肉毒碱浓度(31.43±11.75μmol/L)明显低于正常对照组(43.25±12.57μmol/L)和非VPA治疗的癫对照组(40.71±12.83μmol/L,P均<0.05)。血浆游离肉毒碱浓度与VPA剂量、VPA疗程、其他抗癫药物、年龄、性别、血ALT、AST无相关性。结论VPA治疗成人癫可能导致血浆游离肉毒碱水平下降,其下降程度和VPA无剂量和疗程依赖性,也不受患者的生理状态以及其他抗癫药物的影响。

组蛋白去乙酰化酶8对肾性高血压大鼠心肌肥大的影响

目的:研究组蛋白去乙酰化酶8(histone deacetylase 8,HDAC8)在肾性高血压大鼠左心室肥厚中的表达变化及HDAC抑制剂丙戊酸钠(valproic acid sodium,VPA)对心肌肥厚的影响。方法:建立2肾2夹肾性高血压大鼠模型,术后4周开始给药,VPA高剂量(400 mg.kg-1.d-1)组及VPA低剂量(200 mg.kg-1.d-1)组连续腹腔注射VPA给药4周,同时设立假手术组和阳性对照坎地沙坦(10 mg.kg-1.d-1)组,实验结束时测量左心室/体重比值,HE染色检测心肌组织形态学变化,RT-PCR检测心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)和HDAC8mRNA表达,Western blotting检测HDAC8的表达情况。结果:HDAC8 mRNA和蛋白表达水平在肾性高血压大鼠心肌组织中明显上调;VPA能够剂量依赖性降低HDAC8的表达,同时VPA治疗组与坎地沙坦组高血压大鼠的左心室肥厚得到明显逆转,表现为心室体重比降低,肥大心肌形态明显改善且ANF的表达下调。结论:HDAC8参与了肾性高血压大鼠心肌肥厚的发病过程,VPA可以下调其表达并部分逆转心肌肥厚。

丙戊酸钠抑制Kasumi-1细胞增殖及诱导分化和凋亡机制的研究

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)通过抑制组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)的活性,消除AML1-ETO融合蛋白转录抑制作用,抑制Kasumi-1细胞增殖及诱导凋亡的机制。方法:不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞不同时间后,应用台盼蓝拒染人工计数法观察VPA对细胞增殖的影响,普通光学显微镜观察细胞形态改变,流式细胞术分析细胞周期和检测髓系分化抗原CD11b的表达水平的变化,DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡。结果:VPA能显著抑制Kasumi-1细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性,VPA处理Kasumi-1细胞72h时的半数抑制浓度(IC50)为2.33mmol/L;VPA处理后,细胞周期检测G0/G1期细胞比例逐渐增高;VPA能诱导髓系分化抗原CD11b表达水平的阳性率升高,呈时间及剂量依赖性;VPA能诱导Kasumi-1细胞凋亡,Kasumi-l细胞经VPA3mmol/L处理72h后,出现典型的凋亡细胞所具有的梯形DNA条带。结论:VPA能抑制Kasumi-1细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导细胞部分分化和凋亡。

奥卡西平治疗儿童癫痫的病例对照研究

目的探讨奥卡西平(OXC)单药治疗新诊断的儿童部分性癫痫的临床疗效、安全性和对认知功能的影响,为儿童癫痫的治疗提供临床依据。方法 92名部分性癫痫儿童,按就诊顺序分为OXC治疗组(46例)和丙戊酸钠(VPA)治疗组(46例),采用前瞻性对照研究的方法随访观察1年,评价各治疗组治疗前后及各组间患儿的临床疗效、认知功能及不良反应。结果临床疗效:两组患者随访3月癫痫发作控制率比较差异无统计学意义(x^2=0.099,P>0.05);随访12月癫痫发作控制率比较差异均无统计学意义(x^2=0.005,P>0.05)。认知功能:4.5~6岁OXC组患者言语测试、词汇较治疗前评分增高,差异均有统计学意义(t值分别为-3.050、-3.847,均P<0.05),6~14岁OXC组患者言语测试、词汇及数字广度分较治疗前测验评分增高,差异具有统计学意义(t值分别为-8.375、-6.129、-7.023,均P<0.05)。两组副作用均比较轻微。结论奥卡西平单药治疗新诊断儿童部分性癫痫疗效与丙戊酸钠相近,不良反应轻微,且对认知具有一定的改善作用。

我院ICU患者血药浓度监测结果分析

目的对重症监护室(ICU)常规监测的地高辛、丙戊酸钠、茶碱和万古霉素4种药物血药浓度监测结果进行分析,为临床合理用药提供科学依据。方法对采用荧光偏振免疫(FPIA)法测定的地高辛、丙戊酸钠、茶碱和万古霉素血药浓度监测结果进行回顾性统计分析。结果 ICU共监测287例次,地高辛119例次(41.46%),丙戊酸钠74例次(25.78%),茶碱48例次(16.78%),万古霉素46例次(16.03%);各监测药物血药浓度达标比例分别为地高辛62.18%、丙戊酸钠35.14%、茶碱68.75%、万古霉素45.65%;丙戊酸钠未达标患者多伴有丙戊酸与酶诱导类抗癫痫药物或碳青霉烯类抗生素合并使用的情况;万古霉素血药浓度超标的患者出现了肾毒性。结论对ICU患者进行血药浓度监测,实施个体化给药,对促进临床安全、有效、合理用药具有重要意义。

醒脑静联合拉莫三嗪、丙戊酸钠治疗老年脑卒中继发性癫痫患者的疗效观察

目的:探讨中成药醒脑静联合拉莫三嗪、丙戊酸钠治疗老年脑卒中继发性癫痫患者临床效果。方法:选取本院2014年12月—2015年12月收治的76例老年脑卒中继发性癫痫患者进行研究,按照临床试验随机抽样的方法将患者分为两组,其中对照组38例采用拉莫三嗪联合丙戊酸钠进行治疗,观察组38例在对照组的基础上给予中成药醒脑静辅助治疗,疗程均为4周,观察两组患者治疗后的疗效及安全性。结果:观察组治疗后总有效率和显效率分别为94.74%和60.53%,显著高于对照组的78.95%和42.11%,两组治疗后总有效率和显效率相比,差异均有统计学意义,P<0.05;两组患者治疗后其癫痫发作次数均显著低于治疗前,P<0.05;观察组治疗后癫痫发作次数及发作时持续时间均优于对照组,差异均有统计学意义,P<0.05;两组患者治疗期间主要不良反应为皮疹、感觉异常以及胃肠道反应,其中观察组不良反应发生率为10.53%,与对照组不良反应发生率的7.89%相比,差异无统计学意义,P>0.05。结论:中成药醒脑静联合拉莫三嗪、丙戊酸钠治疗老年脑卒中继发性癫痫效果显著,且不增加不良反应,具有临床推广价值。

丙戊酸钠调控组蛋白乙酰化对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡影响

目的探讨组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。方法不同浓度的VPA处理Hela细胞,应用Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平,荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测p21基因mRNA表达,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果经VPA作用后,人宫颈癌Hela细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,p21基因mRNA表达增加;同时细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。结论 VPA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖和诱导细胞凋亡。

丙戊酸钠对视网膜色素变性小鼠光感受器细胞的保护作用

观察在视网膜变性小鼠(retinal degeneration mouse,rd小鼠)视网膜色素变性过程中,丙戊酸钠(valproate sodium,VPA)是否对光感受细胞具有保护作用。取48只新生rd小鼠,随机分为VPA组和正常对照组,每组24只。(1)VPA组,出生后每日以VPA100mg/kg的剂量进行腹腔注射;(2)对照组,出生后每日腹腔注射与VPA相同体积的生理盐水。于出生后7天、14天、21天、28天分别将VPA组和对照组的6只小鼠处死,取眼球做冰冻切片,行HE染色,对两组视网膜光感受器细胞数进行计数,并测量外核层厚度;用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxy-nucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL法)检测凋亡细胞数,并对凋亡细胞数目进行统计分析。结果显示:(1)出生后7天VPA组光感受器细胞数和外核层厚度与对照组相比并无统计学差异,出生后14天、21天、28天,VPA组光感受器细胞和外核层厚度多于对照组,两者具有统计学差异(P<0.05);(2)两组光感受器细胞均于出生后7天开始出现凋亡,在出生后7天、14天VPA组外核层凋亡数少于对照组,两者具有统计学差异。提示VPA具有对抗视网膜色素变性小鼠光感受器细胞凋亡的作用,能延缓光感受器细胞的进行性退变。

L-肉碱对幼鼠丙戊酸肝毒性的保护作用及其机理探讨

目的:研究L-肉碱对丙戊酸(VPA)肝毒性的保护作用及相关机制。方法:采用VPA及苯巴比妥钠(PB)灌胃制作幼鼠VPA肝损伤的动物模型,同时以L-肉碱作为干预措施,观察其对实验动物肝脏,尤其肝线粒体功能的保护作用。化学比色法测定血氨、L-肉碱、肝脏凝血因子合成功能、线粒体呼吸酶系等;高效液相色谱、流式细胞仪分别检测VPA与PB血药浓度及肝线粒体跨膜电位(MMP);采用Oil-Red-O染色观察肝细胞脂肪变性。结果:(1)VPA/VPA+PB组肝线粒体呼吸链关键酶琥珀酸脱氢酶(SDH)及细胞色素氧化酶(CCO)活性与对照组均存在非常显著性差异(P<0.01),而补充L-肉碱对SDH和CCO活性均有明显保护作用;(2)VPA+PB组MMP下降21.47%,与对照组差异显著(P<0.05)。L-肉碱能有效维护MMP正常;(3)在VPA+PB组,凝血因子PT、TT、APTT、Fbg,以及血氨和L-肉碱含量均有显著改变。补充L-肉碱改善肝脏凝血因子合成、使血氨正常;(4)Oil-Red-O染色显示,VP/VPA+PB组均出现门管区为主的肝细胞脂肪变性,脂肪细胞数分别高出对照组9.2倍和15.7倍,差异非常显著(P<0.01)。L-肉碱干预后脂肪变性肝细胞数均有非常显著减少(P<0.01),表明L-肉碱能有效的阻止肝细胞脂肪变性。结论:L-肉碱对VPA肝损伤有较好防治作用,这一作用主要是通过阻止肝脂肪沉积和保护线粒体功能而实现。另外,当VPA与肝酶诱导剂联合运用时,虽然VPA血药浓度值可能不高,但由于肝酶诱导剂使具有非常强肝毒性的VPA中间代谢产物明显增加,所以仍应密切监测其肝毒副作用。

抗癫痫类药物的血药浓度监测结果分析

目的分析抗癫痫药物(AEDs)临床疗效与血药浓度之间的关系,为临床合理用药提供个体化用药参考,探讨如何开展抗癫痫类药血药浓度监测后的药学服务。方法采用酶扩增均相免疫分析法(EMIT)监测抗癫痫类药物丙戊酸钠(VPA)、苯妥英钠(PHT)、卡马西平(CBZ)血药浓度,回顾性调查、统计分析2009-2011年945例次VPA、278例次PHT、157例次CBZ血药浓度监测结果。结果其中55.3%的患者VPA监测结果在有效参考血药浓度范围以内,31.7%的患者PHT监测结果在有效血药浓度范围以内,79.0%的患者CBZ监测结果在有效参考血药浓度范围内。结论抗癫痫药物血药浓度监测是临床用药的依据之一,临床药师于血药浓度监测后为患者提供个体化给药建议,对合理用药有重要的指导意义。

老年癫痫患者丙戊酸钠血药浓度监测及影响因素分析

目的了解影响老年癫痫患者丙戊酸钠血药浓度的因素,为临床用药提供科学依据,促进丙戊酸钠的合理使用。方法采用荧光偏振免疫法测定丙戊酸钠血药浓度,并对某三甲医院老年癫痫患者丙戊酸钠血药浓度监测结果进行回顾性分析。结果 60岁及以上的老年患者共计295例次,其中男152例次,女143例次;男性、女性丙戊酸钠血药浓度无差异;随着年龄的增高,丙戊酸钠血药浓度在治疗窗内的构成比逐渐降低,80岁以上组与60∽69岁组相比丙戊酸钠血药浓度降低（P〈0.05）;丙戊酸钠合并酶诱导类抗癫痫剂组或碳青霉烯类抗生素组与单用丙戊酸钠组相比,丙戊酸钠血药浓度降低（P〈0.05）。结论丙戊酸钠血药浓度影响因素复杂,应对老年人尤其是高龄人群进行丙戊酸钠血药浓度监测,结合临床疗效,进行个体化给药。

丙戊酸钠的合成工艺改进

本文以丙二酸二乙酯为原料,经烷基化、水解、酸化、脱羧、成盐五步操作,合成了丙戊酸钠,并在大量的实验基础上,对丙戊酸钠的合成工艺进行优化,探索出适合工业化生产的丙戊酸钠的合成工艺,总收率近50%,通过~1H-NMR、^(13)C-NMR等分析手段对其结构进行了表征。此工艺生产原料易得,收率高,环境友好,操作简便,适用于大规模工业化生产。

丙戊酸钠的血药浓度监测及合理用药分析

目的建立人血清中丙戊酸钠浓度测定方法。方法以二氯甲烷为提取溶剂,ω-溴苯乙酮为衍生试剂,环己烷羧酸为内标,采用高效液相色谱法测定,色谱柱:Hypersil ODS-C18(4.6mm×250mm,5μm)不锈钢色谱柱,流动相:甲醇-水(75∶25),检测波长:248nm,流速:1.0mL·min-1。结果丙戊酸钠浓度在25～150μg·mL-1范围内苯甲酰甲基丙戊酸和苯甲酰甲基环己烷羧酸的峰面积比与丙戊酸钠浓度呈现良好线性关(R2=0.9953),日内和日间RSD<4.19%。结论该方法快速、简便、准确,适合于临床血药浓度监测。

101例丙戊酸钠血药浓度监测及结果分析

目的探讨影响丙戊酸钠血药浓度明显波动的原因。方法病例收集:2013年我院使用丙戊酸钠治疗癫痫的患者的血药浓度监测情况(共101例,高效液相色谱法);对病例基本数据进行统计与分析。结果列表格体现患者基本信息(包括患者年龄、用药剂型、合并用药等情况)同丙戊酸钠血药浓度变化的关系。分析讨论可能存在的影响因素,对比其他文献得出影响丙戊酸钠血药浓度监测结果的原因。结论丙戊酸钠血药浓度波动大受多方面因素共同影响,个体差异大,使用丙戊酸钠治疗癫痫时,应监测血药浓度,根据血药浓度及时调整给药剂量,以提高临床疗效、降低不良反应。