四乙铵对正常及肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞外向钾电流作用的比较

以全细胞膜片钳制技术观察了正常及慢性常压低氧肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞外向钾电流，并进行了四乙铵（ＴＥＡ）对两种动脉外向钾电流作用的量效关系比较．结果表明：将细胞膜电位钳制在－５０ｍＶ，当指令电位大于－５０ｍＶ时，可以记录到电压依赖性的外向钾电流，且慢性常压低氧肺动脉高压时该电流较正常时为小；当指令电位为＋７０ｍＶ。

脱细胞牛心包羊肺动脉补片的实验研究

目的 评价脱细胞牛心包构建有活性的组织工程羊肺动脉补片的可行性。 方法 将新鲜牛心包采用酶 -去污剂联合脱细胞处理作为血管补片材料 ,从小尾寒羊颈外静脉分离血管内皮细胞和成肌纤维细胞进行传代扩增培养 ,然后分层种植到已消毒的脱细胞牛心包 ,体外培养 7d后 ,自体细胞 -脱细胞牛心包补片作为实验组 (n=5 )植入羊肺动脉 ,分别于 4周 ,6周 ,8周 ,12周和 2 4周取材 ;单纯脱细胞牛心包补片作为对照组 (n=3) ,于 4周 ,12周和 2 4周取材 ,对两组牛心包补片均进行大体观察和组织学检查 ;测定钙、胶原和弹性蛋白的含量。 结果 所有动物均存活 ,羊肺动脉补片内未见血栓 ,无明显动脉瘤样扩张 ,两组补片钙含量与正常肺动脉比较无明显差别。随补片植入时间的推移 ,弹性蛋白含量逐渐增加 ,与正常肺动脉弹性蛋白含量相似 ,显示进行性的组织重塑。 结论 自体细胞 -脱细胞牛心包羊肺动脉补片与单纯脱细胞牛心包补片在体内通过组织重塑在一定程度上均可形成有活性的血管壁组织。

海兰地嗪对正常及肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞延迟整流钾电流作用的比较

海兰地嗪对正常及肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞延迟整流钾电流作用的比较１张庆利李智丛华李金鸣赫梅生（中国医科大学基础医学院药理学教研室，沈阳１１０００１）海兰地嗪（ｈｅｒｎａｎｄｅｚｉｎｅ，金丝马尾连碱甲）是从金丝马尾连根中提取分离的生物碱，据报道具...

丹参酮ⅡA磺酸钠和丹参素对猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通道的激活机制

目的研究丹参酮ⅡA磺酸钠(DS-201)和丹参素(DS-182)的冠状动脉舒张作用除了已知的机制外,是否还与钙激活钾通道(KCa)有关。方法猪冠脉平滑肌细胞贴附式和内面向外式膜片钳单通道电流记录技术。结果DS-201和DS-182均可激活冠脉平滑肌细胞KCa,但DS-201在内面向外膜片方式下激活KCa;而DS-182在细胞贴附膜片方式下激活KCa。结论DS-201和DS-182激活KCa的作用机制不同。DS-201能直接激活KCa,而DS-182则可能需要一系列胞内过程。这种差异可能与二者的结构和溶解性质不同有关。

肿瘤坏死因子-α激活ECV304钙激活钾通道及G蛋白的增强效应

目的 观察肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞株 ECV30 4钙激活钾通道 (BKca)的影响以及 G蛋白是否在此过程中起作用。方法 细胞贴附式膜片箝技术。结果 发现 ECV30 4细胞膜上存在大电导钙激活钾通道 (BKca) ,它的电导是 (2 0 2 .5 4± 16 .6 2 ) p S,其活动可被 2 0 0 U / m l TNF-α增强 ,G蛋白在此过程中起介导作用。结论 TNF-α作用于内皮细胞 ,快速激活 BKca,促进钾离子大量外流 ,使细胞膜发生超极化 ,增大静息钙离子内流的电化学驱动力 ,开放静息钙通道升高静息胞内钙离子浓度。G蛋白可增强此激活效应。

血管平滑肌钾通道及其调节因素

血管张力是决定血管阻力和血流量的重要因素 ,而改变钾通道活性能直接影响血管张力。钾通道开放引起钾外流 ,细胞膜超极化 ,关闭电压依赖性钙通道 ,钙内流减少 ,血管舒张 ;当钾通道受抑制时 ,可使细胞膜去极化 ,从而使电压依赖的钙通道开放 ,细胞外钙内流 ,钙离子使肌球蛋白轻链磷酸化 ,粗细肌丝发生相对运动 ,血管收缩。本文介绍血管平滑肌上 4种钾通道的基因结构。

颈部血管超声在短暂性脑缺血发作的应用价值

目的:探讨短暂性脑缺血发作(TIA)与动脉粥样硬化病变的关系,评价颈部血管超声在TIA中的应用价值。方法:选取收治的TIA患者128例作为观察组,选取相同时期128例无该病的受检人员作为对照组,均已采取颈部血管超声检查,回顾性分析其特征,比较两组内膜增厚、管腔狭窄、颈动脉血流动力学及粥样斑块检出情况等。结果:超声对于观察组颈动脉病斑块检出率及血管狭窄情况明显高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:TIA的发生与颈动脉粥样硬化密切相关,颈动脉超声检查能为临床有效地预防和治疗TIA的发生提供客观依据。

G蛋白对血管紧张素Ⅱ抑制ECV304钙激活钾通道的调节效应

目的 探讨血管紧张素 (A )对人脐静脉内皮细胞株 ECV 30 4大电导钙激活钾通道 (BKCa)的影响及 G蛋白在此过程中的作用。方法 用细胞贴附式膜片箝技术记录 BKCa的活动电流。结果 10 - 7mol/ L A 可抑制 ECV30 4细胞膜上 BKCa的活动 ,表现为电流幅值下降 ,开放概率减小 ,通道开放时间缩短 ,关闭时间延长 ;G蛋白稳定激动剂 GTPγS可对抗 A 的抑制效应 ,G蛋白稳定抑制剂 GDPβS则增强 A 的抑制效应。结论 A 可明显减弱 ECV30 4细胞膜上 BKCa的活动 ,使膜向着去极化方向发展 ,从而改变膜的稳定性 ,导致内皮细胞功能障碍。 G蛋白在此过程中起调节作用。

氧自由基对血管内皮细胞钙电流的影响及山莨菪碱的干预作用

目的观察山莨菪碱(anisodamine,Ani)在氧自由基(oxygen free radical,OFR)作用体外培养人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)后对其钙池操纵的Ca2+通道电流(store-operated Ca2+currents,Isoc)的影响。方法利用全细胞膜片钳记录技术,应用快速加药灌流装置将0.5、1.0、1.5 mmol/L三种不同浓度的Ani对OFR作用HUVECs后ISOC的影响。结果OFR能增强HUVECs的ISOC,而Ani对OFR作用HUVECs后所引起ISOC的增大作用具有抑制效应。当膜电位钳制于-100 mV时,1.5 mmol/L Ani可使ISOC的峰值电流从(-388.59±58.66)pA下降至(-287.37±23.03)pA,抑制率为(25.013±9.49)%;OFR作用后,1.5 mmol/LAni可使ISOC的峰值电流从(-577.04±93.69)pA下降至(-302.38±35.13)pA,抑制率为(47.24±3.82)%。各组间及与对照组相比均有显著的统计学差异(P<0.01,n=6)。结论Ani具有明显抑制HUVECs细胞ISOC的作用,对OFR所致的血管内皮损伤确有保护作用。

大鼠脑微血管内皮细胞应力敏感性钾通道的研究

为探讨脑微血管内皮细胞的电生理学特征 ,研究了脑微血管内皮细胞钾离子通道的应力反应性。 1.建立了开放式切应力作用装置并进行了切应力值的计算 ;2 .培养大鼠脑微血管内皮细胞并种植到 1cm× 1cm玻片上 ,采用 Axonpatch2 0 0 A型膜片钳放大器以及全细胞膜片钳技术记录脑微血管内皮细胞的应力敏感性钾通道。结果表明 :1.1dynes/ cm2剪切应力能激发脑微血管内皮细胞的应力敏感性钾通道 ,该通道电流与钳制电压有良好的相关性。脑血管内皮细胞膜上的各种应力反应与细胞膜上的应力敏感性钾通道相关。

四周模拟失重大鼠后身动脉平滑肌细胞钾电流的改变

本文采用全细胞膜片钳方法观察 4周尾部悬吊大鼠 (tail suspendedrats,SUS)隐动脉及肠系膜前动脉第 2～ 6级动脉分支血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells,VSMCs)钾电流密度的变化。结果表明 :SUS大鼠后身动脉VSMCs的静息电位 (RP)较对照大鼠 (CON)后身动脉VSMCs的RP更负。SUS组隐动脉和肠系膜小动脉VSMCs的全细胞钾电流密度较CON组显著增加。其中 ,SUS组的隐动脉和肠系膜小动脉VSMCs的大电导钙激活钾离子通道 (BKCa)和电压激活钾离子通道 (KV)电流密度较CON组的BKCa和KV 电流密度均显著增加。以上结果提示 。

兔血管平滑肌延迟整流钾通道研究及其与克隆Kv1.5通道的电生理特性比较

本文用膜片箝全细胞技术比较研究了单个兔肺动脉血管平滑肌细胞上延迟整流钾通道与克隆Kv1．5通道的电生理及药理学特性。将平滑肌细胞箝制在-40mV，以10mV的步距阶跃去极化（0～60mV）可产生一系列快速上升的外向电流，几无衰减，其激活曲线的V1/2为27．2mV。灌流液中加入100mmol／LTEA和1mmol／L 4AP，电流幅度均明显减小，细胞外Ca2+水平由1．5mmol／L降至0．5mml／L甚至0mmol／L时，该电流无明显改变。而在HBK7细胞（克隆Kv1．5通道），箝制在－80mV，以10mV的步距阶跃去极化（－30～＋60mV），可产生一系列的快速上升的外向电流，激活更快，无衰减，其激活曲线的V1/2为0．8mV。4AP抑制Kv1．5的IC50为7．3mmol／L，呈现频率和使用非依赖性；TEA30，100，300mmol／L分别使该电流幅度下降28.6％，37.4％，46．3％，Quinidine0．1和1mmol／L使其下降29．7％，37．6％。研究表明，我们记录到急性分离的免血管平滑肌细胞延迟整流钾通道，它的电生理及药理学特性与克隆的Kv1．5延迟整流钾通道存在明显差别。

cGMP对原代培养猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通遭的作用

3′，5′-环一磷酸鸟苷（cGMP）具有激活血管平滑肌细胞膜上钙激活钾通道（KCa通道）的作用，从而引起血管平滑肌细胞的舒张。但cGMP激活KCa通道的机制存在争论。本工作应用膜片箝技术以原代培养猪冠状动脉平滑肌细胞为对象研究了cGMP影响KCa通道的机制。实验结果显示：（1）在cell－attached膜片方式下，当浴液内游离Ca2+浓度为10－7mol／L，膜电位为＋70mV时，不同浓度的cGMP的膜透过类似物8－bromo-cGMP（0．25mmol／L，0．50mmol／L，1．00mmol／L）对此类通道有明显的激活作用；（2）在inside-out膜片方式下，1．00mmol／L的8－bromo－cGMP对通道却无激活作用。说明cGMP对KCa通道的激活作用并非是直接的，而是需要经过一系列的胞内过程才能实现。

降钙素基因相关肽对早期糖尿病大鼠血管ATP敏感性钾通道的影响

目的 研究早期糖尿病大鼠血管平滑肌ATP敏感性钾通道 (KATP)的变化 ,进一步探讨糖尿病血管功能的改变机制。方法 大鼠单次注射链佐霉素6 0mg·kg- 1制作糖尿病模型 ;1周或 2周后 ,两步酶消化法进行肠系膜动脉平滑肌细胞 (MASMC)的消化分离 ;全细胞膜片钳制技术记录MASMC的ATP敏感性钾电流 (IKATP)。结果 在保持电位 - 40mV ,指令电位 +5 0mV时 ,对照组 ,糖尿病 1周和 2周组MASMC的IKATP 分别为 (79± 6 ) ,(70± 7)和(4 8± 9)pA·pF- 1,糖尿病 2周组的IKATP明显低于对照组。给予降钙素基因相关肽 0 .0 1～ 10 0nmol·L- 1,3个组的IKATP 均浓度依赖性增加 ,对照组 :Y =118.3+2 .9X ,r =0 .887;糖尿病 1周组 :Y =12 3+4.4X ,r =0 .981;糖尿病 2周组 :Y =10 0 .2 +4.6X ,r =0 .975 ;糖尿病组IKATP对降钙素基因相关肽量效反应斜率高于对照组。结论 早期糖尿病血管平滑肌的基础IKATP减小 ,IKATP对降钙素基因相关肽的量效反应斜率增加。

钩藤碱对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活钾通道的影响

用膜片钳单通道记录法研究钩藤碱（Ｒｈｙ）对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活钾通道（ＫＣａ）的影响．结果：Ｒｈｙ３０，４５和６０μｍｏｌ·Ｌ－１缩短通道的开放时间，但浓度依赖性增加ＫＣａ开放概率，Ｒｈｙ１５，３０，４５和６０μｍｏｌ·Ｌ－１使开放概率由加药前的０．０８５±０．００５分别增加到０．１７６±０．０１１，０．３１５±０．００９，０．４８５±０．０１６和０．７６１±０．０１２（ｘ±ｓ，均Ｐ＜０．０１）．说明Ｒｈｙ有增加肺动脉平滑肌细胞ＫＣａ开放作用．１．４数据处理用ｐＣｌａｍｐ软件对实验记录进行处理．用高斯曲线拟合通道开放的电流幅度，用指数曲线拟合通道的开放和关闭时间，用通道开放的总时间除以总采样时间求出通道的开放概率．并对通道开放进行“爆发开放（ｂｕｒｓｔ）”分析．通道电导（ｇｋ）按下列公式计算：Ｅｋ＝ＲＴ／ＺＦｌｎ［Ｋ＋］ｏ／［Ｋ＋］ｉ，ｇｋ＝△Ｉ／（Ｖｍ－Ｅｋ）．Ｅｋ：平衡电位，Ｒ：气体常数，Ｔ：绝对温度，Ｚ：离子价，Ｆ：法拉第常数，△Ｉ：钳制电位和平衡电位的膜电流差值，Ｖｍ：钳制电位．实验结果以ｘ±ｓ表示．用单因素方差分析进行统计学处理．２实验结果２．１肺动脉平滑肌细胞ＫＣａ的一般特性观察在大鼠肺动?

膜片钳技术在动脉粥样硬化研究中的应用

膜片钳技术是一种先进的电生理技术,在生命科学研究中已得到了广泛的应用.最近几年已把它运用于研究动脉粥样硬化血管平滑肌细胞离子通道电生理特性的改变.研究发现血管平滑肌细胞的凋亡与K+通道活动增加有关,在动脉粥样硬化发生与发展过程中大电导型钙激活钾通道起着重要的功能作用.某些药物影响动脉粥样硬化血管平滑肌细胞离子通道而发挥作用.膜片钳技术给动脉粥样硬化发病机理研究带来了新的亮点.

改良的适合膜片钳试验的血管内皮细胞处理方法

目的建立一种简便的、适合膜片钳试验的人脐静脉内皮细胞(ECV304)处理方法,并在培养的细胞上观察其钙激活钾通道(Kca)特性。方法采用改良的内皮细胞培养方法,用单通道记录法记录内皮细胞Kca电流。结果内皮细胞在光镜下呈梭形,并可以检测到细胞膜上的Kca电流。结论本方法改良了传统的内皮细胞培养方法,能在较短时间内完成膜片钳通道记录,是一种适合膜片钳试验的处理方法。

肾上腺素诱导的血管平滑肌细胞C1^-电流及其与Ca^(2+)运动的关系

为观察肾上腺素对主动脉平滑肌细胞C1- 电流的影响及其与Ca2 + 内流的关系 ,采用膜片钳单离子通道(细胞贴附式 )技术和Fura 2荧光法测定细胞内游离Ca2 + 浓度变化。结果发现 ,10 μmol L肾上腺素可引起氯通道开放概率由对照组的 0 .0 6 1± 0 .0 0 4 2增加到 0 .6 90± 0 .0 11;平均开放时间由 1.0 8± 0 .2 3ms延长到 6 .4 4± 0 .5 7ms。此Cl- 电流可被硝苯地平和EGTA抑制。肾上腺素可引起平滑肌细胞内游离Ca2 + 浓度由静息时 77± 13nmol L快速升高达峰值随后维持在高水平的内流平台相 ,达 2 16± 2 7nmol L。Cl- 通道阻断剂尼氟灭酸在一定范围内呈浓度依赖性抑制肾上腺素诱发的Cl- 电流及Ca2 + 内流 ,8μmol L尼氟灭酸对细胞内游离Ca2 + 浓度的抑制率达 2 7%± 8%。结果表明 ,Cl- 通道开放在调节平滑肌细胞Ca2 + 内流中起重要作用。

颈动脉内膜剥脱术的临床应用

目的探讨应用颈动脉剥脱术治疗颈动脉狭窄和闭塞。方法对2004年6月至2005年4月对8例颈动脉硬化狭窄患者行颈动脉内膜剥脱术的临床资料进行回顾性分析,所有患者颈内动脉狭窄程度均大于70%,术中都应用Brener转流管及血管补片。结果术后所有患者未出现严重并发症,脑部供血好转,术后颈动脉超声及CTA检查见患侧颈动脉血流增加,未见动脉瘤形成。结论颈动脉内膜剥脱术是治疗颈动脉狭窄和闭塞较有效的方法。术中可常规应用转流管,应用血管补片可提高远期疗效。

自发性高血压大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BK_(Ca)通道的活性及表达改变

目的观察自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats,SHR)与Wistar-Kyoto(WKY)大鼠肠系膜动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated po-tassiumchannel,BKCa)电流及通道α亚单位表达的差异。方法实验采用16～18周龄SHR(N=20)及WKY(N=20)大鼠,尾套法测量大鼠尾动脉血压;胶原酶分离VSMCs,全细胞膜片钳技术记录全细胞总钾电流密度及BKCa电流;激光共聚焦观察BKCaα亚单位在VSMCs胞膜及胞质内的分布。结果 SHR较WKY大鼠的收缩压与舒张压均有显著升高(P<0.05);全细胞外向钾电流密度及BKCa电流密度均有显著性增加(P<0.05);SHR的BKCaα亚单位在胞膜及胞质内均有广泛分布,SHR大鼠VSMCs胞质与胞膜的荧光强度较WKY大鼠均有显著性升高(P<0.05)。结论 BKCa电流密度增加可能与BKCa通道α亚单位的表达增多有关,SHR大鼠VSMCs的BKCa电流密度增加引起血管的舒张,不能抵消平滑肌细胞的肌源性收缩可能是导致高血压的发生机制之一。