蓝莓VcMYB启动子克隆及其功能初步分析

为探究VcMYB启动子在转录过程中如何发挥调控作用,利用FPNI-PCR法从蓝莓中克隆到调控原花青素合成相关的转录因子VcMYB的768 bp启动子序列。用PLACE和Plant CARE在线启动子预测工具分析了该启动子,结果表明其序列中存在启动子的基本元件CAAT-box和TATA-box,还包含一系列的响应元件,如光响应元件、低温响应元件、防御与胁迫响应元件和茉莉酸甲酯响应元件等。为进一步分析该启动子的功能,构建了该基因启动子与GUS基因融合的植物表达载体VcMYBpro::GUS,并用农杆菌转化拟南芥。对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色分析,结果表明该VcMYB启动子能驱动GUS基因在转基因拟南芥中表达,并且经脱落酸(ABA)、4℃低温、LED光照和持续光照处理后,转基因拟南芥中GUS的表达活性增强,推测该基因受ABA、低温和光的调控。

蓝莓转录因子VcMYB21在果实着色及幼苗UV处理中的响应

本研究通过RACE-PCR从蓝莓中克隆得到一个R2R3-MYB转录因子,命名为Vc MYB21,该基因全长1 373 bp,编码区722 bp,编码233个氨基酸。生物信息学分析发现其理论分子量为58.37 k Da,p I值为5.12,中部有1个2Fe-2S结合域和1个EGF-like结构域,属于膜外蛋白,结构不稳定。酵母双杂交实验表明Vc MYB21蛋白无自激活活性,能自身形成同源二聚体。组织特异性表达实验显示Vc MYB21主要在蓝莓的果皮和叶片中表达。在蓝莓果实发育过程中,Vc MYB21基因的表达量整体呈下降趋势,在果实发育早期表达量最高,之后迅速下降,全红果时期略微上升;花青素的含量随果实发育持续上升,在紫果期达到最大。UV-B与UV-C处理均显著诱导Vc MYB21在蓝莓幼苗叶片组织中的表达,其中对UV-B处理更为敏感。UV-B处理5 min以及UV-C处理10 min均能显著诱导该基因的表达,随处理时间的延长,基因表达量下降;花青素的含量在基因表达量下降后迅速上升,之后花青素分解,积累量下降。这些研究结果表明Vc MYB21在UV处理后叶片花青素积累过程及蓝莓果实着色过程中可能发挥着负调控作用。