产志贺毒素大肠杆菌多重PCR与Vero细胞毒实验对比研究

[目的 ]通过对比研究建立一种具有高特异性、敏感性的检测产志贺毒素大肠杆菌 (STEC)的实验方法。 [方法 ]应用多重 PCR和 Vero细胞毒实验方法 ,对比检测从疫区分离的 142株大肠杆菌菌株。 [结果 ]6 0株多重 PCR stx2或 stx1 阳性大肠杆菌 Vero细胞毒试验均阳性。 82株不含有 stx2 或 stx1 基因大肠杆菌 Vero细胞毒试验均阴性。两者试验结果完全吻合。 [结论 ]多重 PCR方法检测 STEC stx2 和 stx1 具有高度的特异性和敏感性 ,可作为鉴定大肠杆菌是否为

铜绿假单胞菌外毒素A全基因的克隆与分泌性表达

利用PCR技术从铜绿假单胞菌PA103株DNA中扩增到铜绿假单胞菌外毒素A(EPA)全基因,选择合适位点插入pBV221 PLPR启动子下游,构建分泌性表达载体;转化宿主E.coliDH5α、JM109后,热诱导表达;SDS-PAGE分析表明表达产物占菌体总蛋白量的17%左右,分子量69kD左右;分离细胞组分蛋白发现仅有少量重组蛋白以成熟毒素形式分泌到宿主菌的周质间隙,并能检测到Vero细胞毒活性,其余大部分以包涵体形式存在。免疫印迹检测显示,表达产物与兔抗EPA多抗有特异性反应。此项工作为重组EPA的研制建立了有用的技术方法。