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Expression and Immunological Analysis of Capsid Protein Precursor of Swine Vesicular Disease Virus HK/70 被引量:3
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作者 Hong TIAN Jing-yan WU You-jun SHANG Shuang-hui YING Hai-xue ZHENG Xiang-tao LIU 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2010年第3期206-212,共7页
VP1, a capsid protein of swine vesicular disease virus, was cloned from the SVDV HK/70 strain and inserted into retroviral vector pBABE puro, and expressed in PK15 cells by an retroviral expression system. The ability... VP1, a capsid protein of swine vesicular disease virus, was cloned from the SVDV HK/70 strain and inserted into retroviral vector pBABE puro, and expressed in PK15 cells by an retroviral expression system. The ability of the VP1 protein to induce an immune response was then evaluated in guinea pigs. Western blot and ELISA results indicated that the VP1 protein can be recognized by SVDV positive serum, Furthermore, anti-SVDV specific antibodies and lymphocyte proliferation were elicited and increased by VP1 protein after vaccination. These results encourage further work towards the development of a vaccine against SVDV infection. 展开更多
关键词 猪水泡病病毒 核衣壳蛋白 免疫分析 逆转录病毒载体 前体 PK15细胞 P1蛋白 ELISA法
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热休克蛋白27对水泡性口炎病毒体外增殖的调控作用
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作者 李殿玉 莫荣纤 +6 位作者 赵旭 高铭 李洪珊 白辉盛 马瑞仙 李向茸 冯若飞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2540-2549,共10页
本研究旨在探究热休克蛋白27(heat shock protein 27, HSP27)对水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)体外增殖及VSV感染介导的维甲酸诱导基因I样受体家族(retinoid acid-inducible gene-I-like receptor, RLR)信号通路的作... 本研究旨在探究热休克蛋白27(heat shock protein 27, HSP27)对水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)体外增殖及VSV感染介导的维甲酸诱导基因I样受体家族(retinoid acid-inducible gene-I-like receptor, RLR)信号通路的作用及机制。利用实时荧光定量PCR、免疫印迹、免疫共沉淀、病毒滴度测定及免疫荧光等方法,首先检测VSV感染对HSP27 mRNA和蛋白表达的影响,进而验证过表达和干扰HSP27对VSV增殖的影响,进一步探究HSP27对VSV感染介导的RLR信号通路的影响,最后分析HSP27与RLR信号通路靶分子的相互作用及共定位情况。结果表明,VSV感染可促使HSP27基因转录和蛋白表达上调,稳定过表达和瞬时过表达HSP27均能显著抑制VSV的体外增殖;干扰宿主细胞中HSP27表达可促进VSV增殖。HSP27能够增强VSV及维甲酸诱导基因I蛋白(retinoic acid-inducible gene I protein, RIG-I)介导的IFN-β的产生及RIG-I的蛋白表达,而且HSP27与RIG-I相互作用并共定位于细胞质中。本研究揭示了HSP27靶向RIG-I上调其表达,增强RLR信号通路的转导,进而负调控VSV体外增殖,为深入揭示宿主因子HSP27在病毒感染中的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 热休克蛋白27 水泡性口炎病毒 RLR信号通路 维甲酸诱导基因I蛋白
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细胞外基质蛋白ABI3BP抗水疱性口炎病毒初步作用研究
3
作者 孟祥博 陈美桦 +5 位作者 许诺 李天琪 李帅臣 周孙欣 陈欢 张彤 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2024年第1期1-8,I0001,共9页
目的探讨细胞外基质蛋白ABI3BP对水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)基因组复制和先天免疫信号通路的影响。方法在人皮肤成纤维细胞BJ-5ta中转染小干扰RNA(siRNA)敲低ABI3BP基因,建立ABI3BP基因缺失的VSV-GFP病毒感染细胞... 目的探讨细胞外基质蛋白ABI3BP对水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)基因组复制和先天免疫信号通路的影响。方法在人皮肤成纤维细胞BJ-5ta中转染小干扰RNA(siRNA)敲低ABI3BP基因,建立ABI3BP基因缺失的VSV-GFP病毒感染细胞模型。通过鬼笔环肽细胞免疫荧光实验,检测敲低ABI3BP后细胞内肌动蛋白(F-actin)形态结构的变化。在ABI3BP基因缺失的VSV-GFP病毒感染细胞模型上,利用RT-qPCR方法检测细胞中病毒mRNA水平的变化。利用免疫印迹法(Western blotting)检测IRF3和TBK1磷酸化水平的变化。结果成功建立敲减ABI3BP基因的VSV-GFP感染的细胞模型。鬼笔环肽细胞免疫荧光染色表明,敲减ABI3BP基因后,细胞内F-actin的表达发生结构重排。采用不同剂量的病毒感染细胞,与对照组相比,ABI3BP敲低细胞中基因拷贝数分别增加2.5~3.5倍(P<0.01)和2.2~4倍(P<0.01),VSV-GFP病毒蛋白表达水平显著上调;在ABI3BP基因敲低的细胞模型上,VSV-GFP病毒感染导致Ⅰ型干扰素免疫通路关键免疫分子p-IRF3和p-TBK1蛋白磷酸化水平明显下调。结论本研究表明细胞外基质蛋白ABI3BP对维持细胞内F-actin纤维网状结构具有重要作用。ABI3BP缺失促进RNA病毒的复制,ABI3BP是I型干扰素通路激活的重要调控分子。 展开更多
关键词 细胞外基质蛋白 肌动蛋白 水疱性口炎病毒 病毒复制
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新型抗癫痫发作药物布瓦西坦作用机制及临床研究进展
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作者 万丽君(综述) 刘学伍(审校) 《中风与神经疾病杂志》 CAS 2024年第6期507-510,F0003,共5页
癫痫是神经系统常见疾病之一,是以脑神经元异常放电引起反复痫性发作为特征。布瓦西坦是第三代抗癫痫药物之一左乙拉西坦的类似物,通过与突触囊泡蛋白2A结合而起作用。本文就癫痫的概述、布瓦西坦在癫痫中的作用机制、药代动力学特征、... 癫痫是神经系统常见疾病之一,是以脑神经元异常放电引起反复痫性发作为特征。布瓦西坦是第三代抗癫痫药物之一左乙拉西坦的类似物,通过与突触囊泡蛋白2A结合而起作用。本文就癫痫的概述、布瓦西坦在癫痫中的作用机制、药代动力学特征、临床疗效、安全性及不良反应等方面进行综述,以期为癫痫治疗提供更好的药物选择。 展开更多
关键词 癫痫 布瓦西坦 抗癫痫药物 突触囊泡蛋白
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Eukaryotic Expression and Activity Analysis of Capsid Gene of Swine Vesicular Disease Virus HK/70
5
作者 TIAN Hong WU Jingyan SHANG Youjun YING Shuanghui ZHENG Haixue LIU Xiangtao XIE Qingge 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2009年第4期25-30,共6页
The capsid protein precursor (P1), which plays a major role for the generation of polypeptides of swine vesicular disease virus (SVDV), was cloned from SVDV HK/70 strain into the retroviral vector pBABE puro and e... The capsid protein precursor (P1), which plays a major role for the generation of polypeptides of swine vesicular disease virus (SVDV), was cloned from SVDV HK/70 strain into the retroviral vector pBABE puro and expressed in the mammalian cell line PK15 through the retroviral expression system. The activity of recombinant protein to induce immune response was evaluated in guinea pigs. IFA and Western Blot were used to detect the recombinant protein expression. The results showed that the recombinant protein could be recognized by SVDV positive serum, and animal test showed SVDV-specific antibodies. All of those results indicate that a retroviral-based vaccine carrying the capsid protein precursor (P1) of SVD is able to be expressed in the eukaryotic cell and elicites strong SVDV-specific immune responses in guinea pigs. 展开更多
关键词 swine vesicular disease virus capsid protein precursor gene gene expression immune response
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植物病原菌氧化固醇结合蛋白的功能及其靶向抑制剂研究进展
6
作者 刘静 郝楠 +4 位作者 张芷萌 刘晓飞 刘颖超 赵斌 董金皋 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期245-256,共12页
氧化固醇结合蛋白(OSBP)及其同系物(ORPs)共同构成脂质结合/转移蛋白(LTPs)的保守家族,它们在真核生物细胞中广泛表达,主要作用是参与细胞中的脂类代谢、囊泡运输及信号转导等方面。本文主要对植物病原菌中氧化固醇结合蛋白的结构、功... 氧化固醇结合蛋白(OSBP)及其同系物(ORPs)共同构成脂质结合/转移蛋白(LTPs)的保守家族,它们在真核生物细胞中广泛表达,主要作用是参与细胞中的脂类代谢、囊泡运输及信号转导等方面。本文主要对植物病原菌中氧化固醇结合蛋白的结构、功能等进行系统阐述,并对基于氧化固醇结合蛋白的靶向抑制剂的设计合成工作进行综述,可为基于新靶标农药的合理设计与应用提供理论支撑。 展开更多
关键词 氧化固醇结合蛋白 甾醇转运 非囊泡运输 膜接触位点 氧化固醇结合蛋白抑制剂
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33.5kDa胆汁泡蛋白促成核活性及其对泡形态学影响的研究 被引量:8
7
作者 项建斌 蔡端 +1 位作者 张延龄 马保金 《肝胆胰外科杂志》 CAS 1999年第1期8-10,共3页
目的探讨33.5kDa泡蛋白在胆固醇成核过程中的作用。方法利用超速离心技术结合PAGE电泳及区带定位法制备33.5kDa泡蛋白;并将其加入Smal模拟胆汁及综合模拟胆汁作为试验组,相应地以人体白蛋白为对照组,用偏光显... 目的探讨33.5kDa泡蛋白在胆固醇成核过程中的作用。方法利用超速离心技术结合PAGE电泳及区带定位法制备33.5kDa泡蛋白;并将其加入Smal模拟胆汁及综合模拟胆汁作为试验组,相应地以人体白蛋白为对照组,用偏光显微镜观察胆固醇成核时间,在透射电镜下观察模拟胆汁泡的大小、形态及数量。结果Smal试验组成核时间为3.83±0.31天,对照组为12.33±0.56天(P<0.001);综合试验组平均成核时间为3.17±0.17天,而对照组长达10.33±0.21天(P<0.001)。随着时间的推移,Smal试验组及综合试验组泡逐渐增大、聚集、融合,最终形成巨大复层泡。两组均较相应的对照组变化显著(P<0.05)。结论33.5kDa泡蛋白具有很强的促进泡形成、聚集、融合及胆固醇单水结晶析出的作用(成核活性约为0.310)。 展开更多
关键词 胆汁泡蛋白 促成核因子 胆结石
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胆宁片对胆汁33.5kDa泡蛋白含量和结构的影响 被引量:15
8
作者 赵滨 杨培民 +1 位作者 项建斌 蔡端 《中国临床医学》 2011年第1期74-75,共2页
目的:探讨胆宁片对胆石症患者胆汁中33.5kDa泡蛋白含量及其结构的影响。方法:2008年1月—2010年3月对60例胆囊切除病例和40例胆总管探查病例进行前瞻性临床研究,其中60例胆囊切除病例随机分为3组:胆固醇结石胆宁片组(n=20)、胆固醇结石... 目的:探讨胆宁片对胆石症患者胆汁中33.5kDa泡蛋白含量及其结构的影响。方法:2008年1月—2010年3月对60例胆囊切除病例和40例胆总管探查病例进行前瞻性临床研究,其中60例胆囊切除病例随机分为3组:胆固醇结石胆宁片组(n=20)、胆固醇结石对照组(n=20)、胆色素性结石组(n=20),另外设立正常对照组(n=20)。通过酶联免疫吸附法检测每份胆汁中33.5kDa泡蛋白含量,比较各组之间的差异。40例胆总管探查病例分为研究组和对照组(n=20),通过蔓陀螺凝集素探针(DSA)介导的蛋白印迹法检测胆汁中33.5kDa泡蛋白糖链条带DSA结合率,比较2组糖链结构的变化。结果:胆固醇结石组胆汁中33.5kDa泡蛋白含量显著高于胆色素结石组和正常对照组,胆固醇结石胆宁片治疗组胆汁33.5kDa泡蛋白含量较对照组显著降低(P<0.01)。胆固醇结石治疗组泡蛋白糖链条带DSA结合率较对照组显著下降(P<0.05)。结论:胆宁片能降低胆固醇结石患者胆汁中33.5kDa泡蛋白含量,并通过改变糖链结构而使其促成核活性发生变化。 展开更多
关键词 胆宁片 胆石 泡蛋白
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胆宁片对胆汁33.5kDa泡蛋白糖链结构的影响 被引量:3
9
作者 马保金 郭跃鹏 +1 位作者 项建斌 蔡端 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期197-199,共3页
目的探讨胆宁片对胆汁33.5 kDa泡蛋白糖链结构的影响。方法按随机序贯原则将胆石症患者分成治疗组(10例)和对照组(10例),治疗组术后第3天口服胆宁片治疗,对照组术后则不服用。取手术当天(外参对照组)及术后第3、10天的T管胆汁,通过蔓... 目的探讨胆宁片对胆汁33.5 kDa泡蛋白糖链结构的影响。方法按随机序贯原则将胆石症患者分成治疗组(10例)和对照组(10例),治疗组术后第3天口服胆宁片治疗,对照组术后则不服用。取手术当天(外参对照组)及术后第3、10天的T管胆汁,通过蔓陀螺凝集素探针(DSA)介导的Western印迹法分析两组患者胆汁中33.5 kDa泡蛋白糖链天线数目的变化情况。结果治疗组术后3 d的胆汁33.5 kDa泡蛋白糖链Western印迹染色条带亮度降低;治疗组术后10 d与外参对照组的33.5 kDa泡蛋白糖链条带DSA结合率糖链显著下降(P<0.05)。结论33.5 kDa泡蛋白糖链天线数目变化的时间(用药后7 d)要早于文献报道的变化时间(14 d),进一步证实了33.5 kDa泡蛋白糖链数目的增加导致泡蛋白含量及促成核活性改变的推测。 展开更多
关键词 胆石成因 泡蛋白 糖链 蛋白印迹法
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Livin与肿瘤研究新进展 被引量:13
10
作者 吕建 陈智超 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2006年第17期1347-1350,共4页
Livin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,具有凋亡抑制蛋白家族的特征性结构——BIR结构域。这一结构域介导了Livin与Caspase-3、7、9的直接结合,从而阻断caspase凋亡作用的发挥,达到抑制细胞凋亡的作用。Livin基因定位于染色体20q13,编码Livi... Livin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,具有凋亡抑制蛋白家族的特征性结构——BIR结构域。这一结构域介导了Livin与Caspase-3、7、9的直接结合,从而阻断caspase凋亡作用的发挥,达到抑制细胞凋亡的作用。Livin基因定位于染色体20q13,编码Livinα和β两种蛋白。亚细胞定位显示,在细胞质和细胞核均有表达,羧基末端的RING结构域介导了Livin的亚细胞定位。目前的研究表明,Livin可表达于消化系统的胃癌、泌尿系统的膀胱癌、呼吸系统肺癌和血液系统的淋巴细胞性白血病等多个系统的肿瘤中,也存在于乳腺癌及黑色素瘤中,在肿瘤的细胞系中也有较广泛的表达,但在各系统的正常组织中却很少表达。研究还表明,在药物诱导凋亡时,Livin的表达有明显升高。用RNA干扰技术对Livin基因的表达进行干预后,细胞对诱导凋亡药物和放射线的敏感性增加。根据Livin设计的抗原肽可以特异性诱导肺癌患者杀伤性T细胞的活化。目前的研究已表明,Livin在肿瘤的发展和耐药中都有重要作用。Livin特异表达于肿瘤组织的特性有可能为肿瘤的早期诊断、基因治疗和细胞治疗提供新靶点。 展开更多
关键词 肿瘤 衔接蛋白质类 膜泡运输 细胞凋亡 肿瘤蛋白质类 综述文献
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胆汁泡蛋白酶联免疫吸附检测法的建立与初步临床应用 被引量:3
11
作者 蔡端 项建斌 +1 位作者 张延龄 马保金 《中西医结合学报》 CAS 2003年第3期218-220,共3页
目的 建立胆汁泡蛋白快速检测法 ,作为防治胆石症临床研究的指标。方法 提取 3 3 .5kd胆汁泡蛋白 ,建立酶联免疫吸附检测法 (ELISA)标准曲线 ,并应用ELISA药盒测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量 ,同时观察利胆冲剂、胆通... 目的 建立胆汁泡蛋白快速检测法 ,作为防治胆石症临床研究的指标。方法 提取 3 3 .5kd胆汁泡蛋白 ,建立酶联免疫吸附检测法 (ELISA)标准曲线 ,并应用ELISA药盒测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量 ,同时观察利胆冲剂、胆通胶囊等对泡蛋白的影响。结果 ELISA曲线方程为Y =0 .0 3 5X(r=0 .99) ;胆固醇性结石组胆囊胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量分别为 (2 13 .4± 70 .1)mg/L、(179.8± 97.9)mg/L ,明显高于胆色素性结石症、非胆石症胆道疾病组以及正常人组 (P <0 .0 5) ,而后三者之间没有显著差异 (P >0 .0 5) ;利胆冲剂治疗两周后 ,胆汁和血清泡蛋白含量显著降低 ,而对照组和胆通胶囊治疗组未见明显变化。结论 胆汁泡蛋白的含量在不同人群差异显著 ;利胆冲剂等药物能降低胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量 。 展开更多
关键词 胆汁泡蛋白 酶联免疫吸附检测法 临床应用 利胆冲剂
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胆汁泡蛋白成核活性及其氨基酸序列分析的研究 被引量:6
12
作者 马保金 蔡端 张延龄 《外科理论与实践》 1999年第1期22-23,共2页
分离胆汁泡蛋白,研究其成核活性和末端氨基酸序列。方法:应用超速离心法分离胆石症患者胆汁泡,运用SDS-PAGE电泳分离其中胆汁泡蛋白,并经HPLC系统纯化,研究其成核活性和N-端氨基酸序列。结果:分离到一种分子量为33.5kd的胆汁泡蛋白,其... 分离胆汁泡蛋白,研究其成核活性和末端氨基酸序列。方法:应用超速离心法分离胆石症患者胆汁泡,运用SDS-PAGE电泳分离其中胆汁泡蛋白,并经HPLC系统纯化,研究其成核活性和N-端氨基酸序列。结果:分离到一种分子量为33.5kd的胆汁泡蛋白,其促成核活性为0.30,N-端氨基酸具有较多的极性氨基酸(天冬酰、苏、丝和谷氨酰等)。结论:33.5kd胆汁泡蛋白有明显的促成核活性,其N-端极性氨基酸可能参与促成核机制。 展开更多
关键词 胆汁泡蛋白 成核活性 氨基酸序列 胆结石
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参与植物膜泡运输的蛋白质家族及功能研究进展 被引量:5
13
作者 柳忠玉 黄亚东 庄楚雄 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期447-452,共6页
真核细胞的内吞和分泌途径中蛋白质和脂类的运输主要由膜泡运输介导。参与膜泡运输的蛋白质家族包括SNARE蛋白家族、RAB蛋白家族、被膜蛋白复合体、Sec1蛋白家族、Arf蛋白家族。这些蛋白质家族在进化中高度保守,并且在植物中已经鉴定了... 真核细胞的内吞和分泌途径中蛋白质和脂类的运输主要由膜泡运输介导。参与膜泡运输的蛋白质家族包括SNARE蛋白家族、RAB蛋白家族、被膜蛋白复合体、Sec1蛋白家族、Arf蛋白家族。这些蛋白质家族在进化中高度保守,并且在植物中已经鉴定了许多哺乳动物和酵母蛋白的同源物。近年来一些研究发现这些蛋白质不仅仅调节植物细胞的膜泡运输,还影响植物的许多生理活动和功能,例如向重性生长、胞质分裂、激素极性运输、气孔运动以及抗病性等。现主要阐述迄今在植物中研究这五类蛋白质家族功能的最新进展。 展开更多
关键词 膜泡运输 蛋白质家族 功能
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水泡性口炎病毒核蛋白基因的克隆和序列分析 被引量:5
14
作者 花群义 徐自忠 +4 位作者 金宁一 杨云庆 董俊 杨晶焰 周晓黎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期4-7,共4页
目的 对水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因进行PCR扩增、克隆和序列分析。方法 将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T载体中 ,构建N基因重组质粒载体。进行PCR及限制性内切酶分析 ,筛选获得N基因插入的阳... 目的 对水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因进行PCR扩增、克隆和序列分析。方法 将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T载体中 ,构建N基因重组质粒载体。进行PCR及限制性内切酶分析 ,筛选获得N基因插入的阳性克隆。经核苷酸序列分析 ,并与Genbank中的VSV编码核衣壳蛋白N基因序列进行比较。结果 该序列与VSVNewJersey型的 0 9/ 82 HD B株同源性最高 ,核苷酸和推测氨基酸的同源性分别为 98.9%和 98.8% ,有 13个核苷酸差异 ,伴有 5个氨基酸改变 ,第 72位的酪氨酸变为组氨酸 ,第 89位的缬氨酸变为异亮氨酸 ,第 183位的天冬氨酸变为天冬酰胺 ,第 2 0 5位的苯丙氨酸变为亮氨酸 ,第 4 18位的丙氨酸变为缬氨酸 ;与In diana型各株的同源性较低 ,与Glasgow株相比 ,核苷酸和氨基酸的同源性分别为 6 7.9%和 71.6 %。结论 已成功地克隆了水泡性口炎病毒N基因 。 展开更多
关键词 水泡性口炎病毒 核蛋白基因 克隆 序列分析 免疫血清学 分子生物学
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胆汁泡蛋白ELISA检测法的建立与初步临床应用 被引量:1
15
作者 蔡端 项建斌 +2 位作者 张延龄 马保金 王丽影 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期341-344,共4页
目的 建立胆汁泡蛋白快速检测法 ,筛选有效的胆石症防治手段。方法 获取 33.5kd胆汁泡蛋白 ,通过微量抗原免疫法获得高效价抗体 ,建立ELISA标准曲线 ;并应用ELISA法测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量 ,同时观察不同溶石... 目的 建立胆汁泡蛋白快速检测法 ,筛选有效的胆石症防治手段。方法 获取 33.5kd胆汁泡蛋白 ,通过微量抗原免疫法获得高效价抗体 ,建立ELISA标准曲线 ;并应用ELISA法测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量 ,同时观察不同溶石防石药物如利胆冲剂、胆酸钠等对泡蛋白的影响。结果 建立了ELISA标准曲线 ,其曲线方程为Y =0 .0 35X(r=0 .99) ;正常人胆汁和血清中 33.5kd泡蛋白含量都明显较胆固醇结石患者低 (0 .0 0 7± 0 .0 0 3)mg/mlvs(0 .0 5 0± 0 .0 11)mg/ml,(0 .0 15± 0 .0 10 )mg/mlvs(0 .0 45± 0 .0 2 1)mg/ml,P <0 .0 5 ;利胆冲剂治疗 2周后 ,胆汁和血清泡蛋白含量显著降低 ,而对照组和胆酸钠治疗组未见明显变化。结论 在不同人群胆汁泡蛋白的含量差异有显著性 ;利胆冲剂等溶石防石药物能降低胆汁和血清 33.5kd泡蛋白含量 ,改变胆汁致石性 。 展开更多
关键词 酶联免疫法 胆汁泡蛋白 胆结石 诊断
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水泡口炎病毒M蛋白对小鼠Lewis肺癌LL/2c细胞增殖与凋亡的影响 被引量:4
16
作者 赵菊梅 刘涛 +3 位作者 徐健蓉 王国庆 杜小波 文艳君 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第3期230-235,共6页
背景与目的:水泡口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)具有明显的抗肿瘤作用,在人的A549肿瘤模型和小鼠的LL/2c模型中已取得了明显的治疗效果。但复制完全型病毒在临床应用中存在着一定的安全隐患,且研究报道VSV抗肿瘤作用与其基... 背景与目的:水泡口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)具有明显的抗肿瘤作用,在人的A549肿瘤模型和小鼠的LL/2c模型中已取得了明显的治疗效果。但复制完全型病毒在临床应用中存在着一定的安全隐患,且研究报道VSV抗肿瘤作用与其基质蛋白(matrix protein,M蛋白)有关。本研究旨在探讨VSV-M蛋白对小鼠的LL/2c肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用分子克隆技术构建VSV-M蛋白重组真核表达质粒pcDNA3.1-M,经酶切、PCR、测序鉴定得到阳性重组子,体外转染LL/2c细胞,RT-PCR、Western blot检测M蛋白的表达。采用噻唑蓝(MTT)法检测了M蛋白质粒对LL/2c肿瘤细胞增殖的影响。DNALadder、Hoechst33528染色检测LL/2c肿瘤细胞凋亡。结果:构建了VSV-M蛋白真核表达质粒pcDNA3.1-M。重组质粒体外转染LL/2c细胞后,检测到M蛋白的表达;倒置显微镜下观察到细胞形态学的改变,且48h后细胞生长抑制明显,抑制率达41.3%(P<0.05),而空载体转染组只有6.5%的抑制率(P>0.05)。琼脂糖凝胶电泳可见DNA ladder形成,Hoechst33528染色检测到LL/2c细胞凋亡,细胞核改变。结论:VSV-M蛋白可抑制小鼠LL/2c细胞增殖,并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 水泡口炎病毒 M蛋白 细胞增殖 凋亡 肺肿瘤
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水泡性口炎病毒核蛋白基因的表达及初步应用 被引量:6
17
作者 花群义 金宁一 +4 位作者 徐自忠 杨云庆 董俊 杨晶焰 周晓黎 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期130-135,共6页
将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T克隆载体质粒中 ,构建N基因克隆重组质粒 ,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD ThioTOPO表达载体 ,经PCR限制性内切酶分析、测序鉴定 ,筛选获得N基因正向插入、有正确读... 将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T克隆载体质粒中 ,构建N基因克隆重组质粒 ,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD ThioTOPO表达载体 ,经PCR限制性内切酶分析、测序鉴定 ,筛选获得N基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆 ,成功构建了水泡性口炎病毒N基因重组表达载体。经L Arabinose诱导表达 ,可稳定、高效地表达N蛋白抗原。SDS PAGE、Westernblotting及间接ELISA试验结果表明 ,表达蛋白为融合蛋白 ,质量约 6 3 5kD ,其表达产量约占菌体总蛋白的 16 % ,相当于 92mg L。融合蛋白中含有水泡性口炎病毒群特异性的核蛋白抗原 ,应用表达的VSV核蛋白抗原建立了酶联免疫吸附试验 ,通过对 186份山羊、豚鼠实验动物人工感染VSV的血清样品和参考血清样品的检测 ,并与微量血清中和试验进行了比较 ,结果表明 :以表达的VSV核蛋白为包被抗原的酶联免疫吸附试验是一种特异性强、敏感性高、快速、简单、安全的检测方法 ,抗原制备成本低。 展开更多
关键词 水泡性口炎病毒 核蛋白基因 克隆 表达
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表达增强绿色荧光蛋白重组水疱性口炎病毒印第安纳株的构建 被引量:13
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作者 温志远 葛金英 +2 位作者 胡森 王永 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期905-911,共7页
通过负链RNA病毒反向遗传操作技术,成功救获了表达增强绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组印地安纳株水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus Indiana serotype)、救获的重组病毒保持了野生型VSV高滴度... 通过负链RNA病毒反向遗传操作技术,成功救获了表达增强绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组印地安纳株水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus Indiana serotype)、救获的重组病毒保持了野生型VSV高滴度生长特性,细胞连续传代10次仍保持GFP的稳定表达及生物学特性不变。本研究为VSV作为新型重组活病毒载体疫苗和肿瘤治疗载体研制及基础病毒学相关研究提供了理想的技术平台。 展开更多
关键词 重组水疱性口炎病毒 增强绿色荧光蛋白 反向遗传操作
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植物种子贮藏蛋白质及其细胞内转运与加工 被引量:16
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作者 韩宝达 李立新 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期492-505,共14页
高等植物种子成熟过程中贮存大量的贮藏蛋白质作为种子发芽和初期生长的重要营养来源。根据溶解性不同,种子贮藏蛋白质可分为白蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白4类。在种子胚发育过程中,醇溶蛋白在粗面内质网合成后形成蛋白质聚集体,直... 高等植物种子成熟过程中贮存大量的贮藏蛋白质作为种子发芽和初期生长的重要营养来源。根据溶解性不同,种子贮藏蛋白质可分为白蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白4类。在种子胚发育过程中,醇溶蛋白在粗面内质网合成后形成蛋白质聚集体,直接出芽形成蛋白体并贮存其中。白蛋白、球蛋白和谷蛋白在粗面内质网以分子量较大的前体形式合成后,根据各自的分选信号进入特定的运输囊泡,经由受体依赖型运输/聚集体形式运输转运至蛋白质贮藏型液泡中,然后经过液泡加工酶等的剪切转换为成熟型贮藏蛋白质并贮存其中。蛋白质的合成、分选、转运和加工等过程影响种子蛋白质的品质及含量。该文对种子贮藏蛋白质的分类和运输、加工以及这些过程对种子蛋白质品质和含量的影响进行了概述。 展开更多
关键词 蛋白质液泡分选 种子贮藏蛋白质 液泡蛋白质的加工 膜泡运输
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逆转录病毒的高效包装及转基因鸡技术平台的建立 被引量:1
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作者 满朝来 张庆 +1 位作者 陈岩 朱大海 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第5期1111-1117,共7页
转基因鸡及输卵管生物反应器正日益成为生物领域研究的热点之一,当前研究转基因鸡最成功的方法即为逆转录病毒介导法,但目前国内尚无系统报道逆转录病毒法制备转基因鸡的平台技术。为加快国内这一领域的研究步伐,本文较详尽的介绍了从... 转基因鸡及输卵管生物反应器正日益成为生物领域研究的热点之一,当前研究转基因鸡最成功的方法即为逆转录病毒介导法,但目前国内尚无系统报道逆转录病毒法制备转基因鸡的平台技术。为加快国内这一领域的研究步伐,本文较详尽的介绍了从逆转录病毒包装、竞争法包装泛嗜性VSV-G病毒、病毒包装条件的优化、病毒的浓缩、辅助病毒检测、鸡胚盘下腔注射等方法技术,并分别在体外鸡胚胎原代成肌细胞(CFM)和体内鸡胚中检测目的标记基因GFP的病毒感染整合效率,为今后转基因鸡的研究提供了一个实用的技术平台。 展开更多
关键词 逆转录病毒 增强型绿色荧光蛋白 疱疹性口腔炎病毒G蛋白 转基因鸡
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