[M(N)X2]-(M=Ru，Os；X=S2C6H4，mnt)的电子结构和光谱性质的理论研究

利用密度泛函理论(DFT)中的B3LYP方法优化了氮化钌和氮化锇配合物[M(N)X2]-[M=Ru,Os;X=S2C6H4,mnt(maleonitriledithiolate)]的基态几何结构,得到的几何参数与实验结果吻合得很好.采用TD-DFT方法,得到了配合物在CH3CN溶液中的激发态电子结构和电子吸收光谱.利用SCRF方法中的CPCM模型来模拟溶剂化效应.研究结果表明,配合物1~4在CH3CN溶液中的吸收跃迁性质相似,低能吸收均被指认为LMCT和LLCT的混合跃迁,高能吸收均被指认为ILCT/LLCT跃迁.

过硫酸氢钾复合物和二氧化氯泡腾片对禽流感病毒、新城疫病毒消毒效果的评价

试验旨在研究过硫酸氢钾复合物和二氧化氯泡腾片对禽流感病毒、新城疫病毒的消毒效果。试验以H9亚型禽流感病毒SS株和新城疫活疫苗Ⅰ系克隆株CS2株为研究对象,通过接种鸡胚后测定病毒血凝效价,确定过硫酸氢钾复合物和二氧化氯泡腾片对2×10^(5) EID50/mL禽流感病毒和新城疫病毒的消毒效果、杀毒剂量以及杀毒时间。结果显示:过硫酸氢钾复合物及二氧化氯泡腾片均能杀灭禽流感病毒和新城疫病毒,其中二氧化氯泡腾片5 min内杀灭99.9%新城疫病毒的最低浓度为15 mg/L,但对H9亚型禽流感病毒的杀灭效果仅为60%;过硫酸氢钾5 min内杀灭99.9%新城疫病毒和H9亚型禽流感病毒的最低浓度分别为2.5 g/L和5 g/L;二氧化氯泡腾片杀灭80%禽流感病毒的最低浓度为120 mg/L,最快杀灭时间为60 min,杀灭99.9%新城疫病毒的浓度为15 mg/L,最快杀灭时间为5 min;过硫酸氢钾复合物杀灭99.9%禽流感病毒的最低浓度是5 g/L,最快杀灭时间是5 min,杀灭99.9%新城疫病毒的最低浓度是2.5 g/L,最快杀灭时间是5 min;5 g/L过硫酸氢钾复合物对发生H9亚型禽流感的养殖场临床杀灭试验显示,过硫酸氢钾复合物处理15 min后无法检测到病毒核酸。研究表明,过硫酸氢钾复合物对禽流感病毒和新城疫病毒具有较好的杀灭效果,可作为养禽场及其周围环境的消毒剂,但使用时应注意有效浓度和作用时长。

流行性乙型脑炎病毒(JEV)全长感染性克隆的制备及恢复病毒的获得

根据JEV病毒减毒株SA14-14-2基因组序列,设计覆盖全长的4对重叠引物,以提取的活疫苗病毒RNA为模板,RT-PCR扩增出4个片段,并克隆到质粒载体中,进一步构建两个半端分子克隆,然后将全长cDNA序列克隆到一个新改造的低拷贝质粒载体pBR-kpn中,构建我国流行性乙型脑炎病毒(JEV)基因组全长cDNA克隆。经过体外转录后得到的转录子转染BHK-21细胞,重新获得JEV的恢复病毒,通过生物学特性、分子生物学水平、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定。结果获得了稳定的全长cDNA克隆,转录子转染BHK-21细胞后,第4天开始出现细胞病变(CPE),第6～7天时CPE为 ,经过Vero细胞进一步放大培养后,间接免疫荧光实验和RT-PCR实验均为阳性。证实了构建的JEV的全长cDNA克隆有感染性,为进一步的研究奠定了基础。

马铃薯三糖五环三萜类化合物体外抗H5N1流感病毒的活性评价

目的研究3种不同类型的马铃薯三糖五环三萜能否通过抑制H5N1流感病毒进入靶细胞,作为潜在的新型抗流感药物进行研发。方法以马铃薯三糖薯蓣皂苷衍生物1为先导化合物,设计并合成3个目标化合物,利用建立的H5N1假病毒活性检测方法,测试化合物的抑制活性。结果目标化合物1a、1b和1c对源自A/Thailand/Kan353/2004的H5N1假病毒毒株均具有明显的抑制作用,且化合物1b的活性最好,其IC50达到(1.25±0.22)μmol·L-1。结论初步构效关系研究表明,将先导化合物1结构中的薯蓣皂苷苷元替换成五环三萜苷元后可提高其抗病毒活性;五环三萜的苷元类型对抗病毒活性有重要影响,乌苏烷型的五环三萜为苷元其抗病毒活性最强。

江西省白背飞虱消长动态及南方水稻黑条矮缩病带毒率的测定

为明确白背飞虱Sogatella furcifera(Horváth)的消长动态及其对南方水稻黑条矮缩病带毒率的影响,分别采用诱虫灯测报和田间取样方法测定江西省崇义、井冈山、莲花和万安等4个县(市)灯下和水稻田间白背飞虱的消长动态,并采用RT-PCR方法测定4个县(市)不同时期灯下和水稻田间白背飞虱的带毒率。结果表明:江西省4个县(市)灯下和田间白背飞虱消长动态与带毒率变化规律相同,即白背飞虱高发期其带毒率也较高。崇义和万安白背飞虱及南方水稻黑条矮缩病发生高峰期较早,在7月28日左右;其次是井冈山,高峰期在8月8日左右;莲花则最晚,高峰期在8月18日左右。根据白背飞虱发生高峰期的时间差异,可以推测携带南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)的白背飞虱是从东南方向传入江西省的,并进一步传播到邻近省份。

中药二黄散对伴有HPV感染的CINⅠ患者宫颈局部微环境的影响

目的研究中药二黄散对伴有HPV感染的CINⅠ患者对宫颈局部免疫状态的影响及治疗效果。方法选取伴有HPV感染的CINⅠ患者100例,将其随机分为二黄治疗组(50例)和对照组1(不作任何治疗,50例),同期50例正常妇女为对照组2。观察不同时间宫颈病变及HPV转归情况,并应用酶联免疫吸附试验测定不同时间的阴道灌洗液辅助性T淋巴细胞(Th细胞)1、2细胞因子水平,其中Thl细胞因子以白细胞介素(IL)2、IFN-γ表示,Th2细胞因子以IL-4、10表示,并结合临床资料进行分析。结果治疗组CINⅠ及HPV不同时间转归率明显高于与对照组1,比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),治疗组患者治疗后IL-2水平均有不同程度升高,与治疗前及对照组1比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗组患者治疗后IL-4、IL-10水平均无明显变化,与治疗前及对照组1比较,差异也均无统计学意义(P>0.05)。治疗组患者治疗后IFN-γ水平均明显升高,与治疗前及对照组1比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论中药二黄散对伴有HPV感染的CINⅠ患者有较好的治疗作用,其治疗机制可能为:通过调节Th1/Th2的免疫平衡清除HPV病毒,且通过调节Th1细胞因子IFN-γ在宫颈病变发展过程中的作用较IL-2可能更为重要。

肝源性糖尿病对HBV相关慢性肝衰竭患者临床特征的影响

目的:观察肝源性糖尿病(hepatogenous diabetes,HD)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关慢性肝衰竭(chronic liver failure,CLF)患者临床特征的影响.方法:187例HBV相关CLF患者分为肝源性糖尿病组(HD组,n=65)和非肝源性糖尿病组(对照组,n=122).回顾性分析HD组及对照组间肝肾功、凝血功能、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,Hb Alc)水平、ChildPugh评分、终末期肝病模型(model for endstage liver disease,MELD)评分、并发症及24w k死亡率差异.分析H b A lc水平与H B V相关CLF患者并发症及预后的相关性.结果:H B V相关C L F患者中H D发生率为34.76%.H D组总胆红素、I N R、肌酐(creatinine,CRE)、Hb Alc水平及Child-Pugh评分、MELD评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).HD组患者原发性腹膜炎、肝肾综合征发生率及24 wk死亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).HBV相关CLF患者Hb Alc水平与Child-Pugh评分(r2=0.17,F=14.74,P=0.021)及MELD评分正相关(r2=0.19,F=16.61,P=0.014).H b A lc水平是H B V相关C L F患者发生原发性腹膜炎(P=0.019,OR=2.27)、肝肾综合征(P=0.023,OR=1.02)及24 wk死亡(P=0.032,OR=0.85)的危险因素.结论:并发HD的HBV相关CLF患者病情更为严重,预后更差.高Hb Alc水平是HBV相关CLF患者并发症的发生和不良预后的危险因子.

重组戊型肝炎病毒抗原免疫恒河猴及其对病毒攻击的保护

目的了解重组抗原免疫恒河猴的抗体应答情况及其对病毒攻击的保护作用。方法利用大肠杆菌表达的戊型肝炎(HEV)病毒3个不同的片段,分别为Ag1(ORF2C端431aa)、Ag2(ORF2C端128aa片段)、Ag3犤ORF3122aa与ORF26287-6404碱基编码的39aa片段以及C端128aa依次以(Gly)n短臂连接的嵌合抗原犦免疫恒河猴,用ELISA方法检测IgG抗体水平,3周后达到较高水平应答时,用HEV阳性粪便样静脉注射进行攻击,经肝脏病理切片观察、血清IgG、丙氨酸转氨酶(ALT)水平测定及粪便排毒的RT-nPCR检测来评价抗原对病毒攻击的保护作用。结果对照组3只猴中两只发现肝脏组织产生明显的病理性改变,而免疫了抗原的试验组12只猴正常;对照组均在攻毒后3～4周发生ALT异常,为正常值的10～20倍,而试验组有部分猴不同程度轻微的ALT异常,其余正常;试验组免疫抗原后IgG水平迅速上升,滴度可达1∶12800;对照组粪便中病毒RNA的检出在攻毒后7～50d左右,而试验组7～21d内以低水平存在。结论重组的抗原片段诱发机体产生针对HEV的抗体应答,能够抑制HEV感染引起的肝炎症状的产生。

EB病毒和人巨细胞病毒核酸检测的实验研究

目的检测血浆和外周血单个核细胞（PBMC）中EB病毒（epsteinbarrvirus，EBV）与人巨细胞病毒（humancyto—megalovirUs，HCMV）DNA含量，以期为两种病原体的早期诊断与监测提供敏感、准确、及时的实验室结果，并为两种病原体感染的实验室诊断筛选出适宜的标本类型。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（realtime—PCR）分别对270份血浆和外周血单个核细胞中EB痛毒和HCMV病毒进行核酸检测并分析。结果270份血浆和外周血单个核细胞中EBVDNA检出率分别是30％和96．7％，血浆和外周血单个核细胞两种类型标本检测EBVDNA的联合检出率为100％；血浆和外周血单个核细胞两种类型标本对HCMVDNA检出率分别是40％和86．7％，两种类型标本对HCMVDNA的联合检出率为100％。结论外周血单个核细胞标本对EB病毒和HCMV的检出率明显高于血浆标本，血浆和单个核细胞两种类型标本对EBVDNA和HcMVDNA的联合检出率为100％。临床医生在疑似EBV和HCMV感染患者的诊疗中要选择适宜的标本类型；首选外周血单个核细胞标本进行检测，条件允许的情况下与血浆标本联合检测，以提高检测的敏感性和准确性。

酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞中HCV 1b NS3结合蛋白基因

目的:应用酵母双杂交技术筛选人胰腺cDNA文库中与HCV1b亚型非结构蛋白NS3相互作用的结合蛋白的编码基因,为进一步研究HCV影响糖、脂代谢机制奠定实验基础.方法:扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定,纯化后的文库质粒转化酵母菌Y187;构建诱饵质粒PGBKT7-NS3并转化酵母菌AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后提取质粒测序,对测序结果进行序列比对和分析.结果:成功构建人胰腺cDNA文库和pGBKT7-NS3重组质粒;将pGBKT7-NS3质粒转化AH109酵母菌株后,并从人胰腺cDNA文库中筛选出11种与HCVNS3蛋白相结合的蛋白基因.结论:筛选出的与HCVNS3蛋白结合的胰腺蛋白基因中,部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关.

虚拟旅游中海量3D点云数据的细节层次索引技术研究

虚拟旅游中的3D点云数据特别庞大,批量索引成为了当今的研究热点。许多索引树存在兄弟结点空间区域重叠、不能实现细节层次索引、索引效率低等问题。为此,将点数据反射强度和细节层次技术引入R树,在改进R树的基础上提出LODR树。建树前,将点云数据进行排序、分组、去除空间重叠等预处理。树的每层设有不同反射强度阈值,把叶结点中满足阈值条件的索引记录沿父-祖父-曾祖父的家谱关系上移,并插入对应的非叶结点,利用该方法创建细节层次索引树。利用反射强度控制数据冗余,棱锥裁剪技术实现查询优化。实验结果表明,LODR树在细节层次索引、查询效率等方面具有明显优势。

基因枪法和肌内注射法免疫HCV NS3/4A诱导小鼠免疫应答的比较

目的比较肌内注射法和基因枪法对免疫效果的影响。方法将携带HCV NS3/4A基因的质粒pcDNA3.1-NS3/4A,分别肌内注射和基因枪免疫BALB/c小鼠。基因枪免疫采用2μg/只和10μg/只两种剂量,肌内注射免疫的剂量为100μg/只,共免疫3次。分别于第3次免疫后10 d和20 d,收集小鼠血清、分离脾细胞;ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体水平;ELIspot检测小鼠IFN-γI、L-2和IL-4;非放射性细胞毒性试验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用,从而比较肌内注射和基因枪法激发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答的影响。结果免疫后第10 d检测结果表明,2μg/只和10μg/只基因枪法免疫产生的抗体效价分别为1∶500和1∶1 000,100μg/只肌内注射免疫产生的抗体效价为1∶1 000。第20 d再次检测,基因枪法产生的抗体效价仍为1∶500和1∶1 000,肌内注射降低为1∶500。2μg/只和10μg/只基因枪免疫产生的IFN-γ和IL-2均高于100μg/只肌内注射免疫。但这两种免疫方法均未激发IL-4的水平。在不同的效靶比情况下,10μg/只和2μg/只基因枪免疫激发的CTL细胞杀伤活性均高于100μg/只肌内注射免疫。结论基因枪法免疫小鼠诱导的体液免疫和细胞免疫应答均显著高于肌内注射免疫。

基于纳米材料的电化学免疫传感器检测H5N1亚型禽流感病毒的研究

利用氧化石墨烯(GO)负载H5N1亚型禽流感病毒多克隆抗体(PAb-H5N1)及牛血清白蛋白(BSA)作为信号放大材料,构建一种新型电化学免疫传感器用于检测H5N1亚型禽流感病毒。结果表明:以PAb-H5N1-GO-BSA纳米复合物作为信号放大材料构建的电化学免疫传感器的灵敏度比不用此纳米复合物作为信号放大的高256倍。以PAb-H5N1-GO-BSA纳米复合物作为信号放大材料构建的电化学免疫传感器对H5N1亚型禽流感病毒的检测限为2-15 HA unit·50μL-1,检测线性范围为2-15～2-8 HA unit·50μL-1。此传感器特异性好,灵敏度高,在病原微生物快速检测领域具有良好的应用前景。

两种方法检测乙型肝炎患者血清HBV-DNA的应用价值

目的:观察两种不同方法检测乙型肝炎患者血清中的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)-DNA的应用价值比较.方法:分别使用PCR-EB定性及Amp-lisensor定量法对HBV患者,乙型肝炎表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)与抗-HBs同时阳性、HBsAg阳性、抗-HBs阳性、HBsAg与抗-HBs同时阴性进行血清HBV-DNA检查,观察2组患者阳性检测率.结果:B组(HBsAg阳性)患者HBSAg(S/N)值高于A组(P<0.05),C组抗-HBs值高于A组(HBsAg与抗-HBS同时阳性)(P<0.05),Amp-lisensor定量检测下,患者HBV-DNA阳性率明显高于PCR-EB定性组(P<0.05).Amp-lisensor定量检测中,C组(抗-HBS阳性)患者的阳性检测率最低(P<0.05),乙型肝炎患者血清中H B V-D N A对数值均有明显的上升,与E组(乙型肝炎两对半全阴性)比较均有统计学意义(P<0.05).A组与B组HBV-DNA对数值明显高于C组与D组(HBsAg与抗-HBs同时阴性)(P<0.05),A组与B组HBV-DNA对数值比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:Amp-lisensor定量法检测血清HBV-DNA的灵敏度较高,在抗-HBs阳性患者中仍可以检测到HBV-DNA.

应用生物技术脱除大蒜病毒的研究

大蒜普遍感染病毒,是影响产量的关键因素.应用生物技术对大蒜进行脱毒研究,获得了脱毒再生植株和脱毒蒜.结果表明,选用带一片叶原基的茎端作外殖体比较适宜,既能保证成活率,又有较好的脱毒效果;筛选出适宜茎端生长的培养基MS附加KT0.5mg/l,NAA0.5mg/l,成苗率70%以上;筛选出低浓度盐的生根培养基,生根率100%;采用电镜定量检测法进行病毒测定,再生株脱毒率达到53.8%.已获得脱毒的二代两瓣大蒜,其直径和重量已经超过正常的商品蒜.

一种新的单核钌配合物的合成

合成了一种新的配体Ｌ（Ｌ＝Ｃ１０Ｈ６Ｎ２Ｃ＝Ｎ－Ｃ６Ｈ４ＯＨ）和一种新的单核钌配合物〔ＲｕＬ（ｂｉｐｙ）２（ＢＰｈ４）２·Ｈ２Ｏ〕（ｂｉｐｙ＝２，２－联吡啶，ＢＰｈ４＝四苯硼酸根）并对单核钌配合物进行了元素分析，红外、紫外－可见和发光光谱表征。

日本山药花叶病毒外壳蛋白多克隆抗体的制备及检测方法的建立

日本山药花叶病毒(Japanese yam mosaic virus, JYMV)是最重要的山药病毒之一,影响山药产量和品质。本研究通过对来自河南、山东和江苏的JYMV分离株的外壳蛋白(coat protein, CP)氨基酸序列进行分析,筛选出亲缘关系较远的3株分离株JYMV-WX3、JYMV-SG1和JYMV-FX1,将其CP基因与pET-30a原核表达载体连接并进行原核表达,纯化融合蛋白后进行等比例混合,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清,经抗原亲和纯化获得的多克隆抗体针对纯化的JYMV-CP的效价为1:512 000。基于该抗体还建立了针对JYMV-CP的酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、免疫斑点杂交(dot-blot enzyme-linked immunosorbent assay, Dot-ELISA)和免疫捕获反转录聚合酶链式反应(Immuno-capture reverse transcription-polymerase chain reaction, IC-RT-PCR)检测方法。IC-RT-PCR对山药叶汁中JYMV的检测灵敏度比ELISA高2个数量级,IC-RT-PCR的灵敏度为1:100 000倍稀释(w/v, g·mL^(-1)),而Dot-ELISA和ELISA的灵敏度分别为1:100和1:1 000倍稀释(w/v, g·mL^(-1))。本研究建立的JYMV免疫学检测方法可用于山药种质交流、健康种苗生产和田间病害流行监测等应用场景,辅助该病毒的致病机制研究。

芪灵汤联合高效抗逆转录病毒疗法对HIV/AIDS患者Th17和Treg细胞表达水平的影响

目的探讨芪灵汤联合高效抗逆转录疗法（HAART）对HIV／AIDS患者外周血Thl7和Treg细胞表达水平的影响。方法将55例HIV／AIDS患者随机分成HAART治疗组28例和联合治疗组27例，并选取21例HlV阴性患者为健康对照组。HAART治疗组给予HAART治疗，联合治疗组给予芪灵汤联合HAART治疗，观察24周。同时根据治疗前外周血CD4＋T细胞计数水平，将HIV／AIDS患者分为3层，第一层：1～100个／μL；第二层：101～200个/μL；第三层：201～350个/μL，运用流式细胞术（FCM）检测HIV，AIDS患者治疗前基线、治疗4、12、24周时间点、健康对照组外周血Thl7、Treg细胞的表达水平及CD4＋T细胞数目。结果与健康对照组比较，HlV／AIDS患者外周血中Thl7细胞基线表达水平及CD4＋T细胞数显著降低，Treg细胞基线表达水平则升高，差异有统计学意义（P〈0．01）；与同组治疗前比较，HAART治疗组与联合治疗组治疗4、12和24周时CD4＋T细胞计数均升高，差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。不同CD4＋T细胞水平，两组患者有效率差异无统计学意义（P〉0．05）。各时间点上，HAART治疗组与联合治疗组Thl7细胞、Treg细胞表达水平无统计学意义（均P〉0．05）。与HAART治疗组比较，治疗24周后，联合治疗组Thl7／Treg比例显著升高，差异有统计学意义（U=2．135，P=0．038）。结论芪灵汤能够改善Thl7/Treg细胞免疫平衡，这可能是芪灵汤提高HlV／AIDS患者免疫功能的机制之一。

人乳头状瘤病毒6型类病毒颗粒的制备及其中和抗体的检测

目的利用大肠杆菌表达系统制备人乳头状瘤病毒6型（human papillomavims type6，HPV-6）类病毒颗粒（virus-like particles，VfJP）并研究其免疫原性。方法在大肠杆菌ER2566中表达HPV-6L1蛋白，并以硫酸铵沉淀、离子交换色谱、疏水相互作用色谱等手段对其进行纯化。纯化后的HPV-6L1经体外组装形成VLP后以动态光散射，透射电镜对其形态进行检测，并以假病毒中和实验评价HPV-6L1VLP在实验动物体内所诱导的抗HPV-6／11中和抗体水平。结果HPV-6L1蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达，经过纯化后的HPV-6L1蛋白可以在体外组装为半径25rim左右的VLP。该VLP可以在山羊及兔体内诱导高滴度的HPV-6／11中和抗体。结论大肠杆菌表达系统可以简便高效制备具有免疫原性的HPV-6VLP，可以用于HPV-6疫苗的研究。

乙肝病毒因素对肝癌肝切除及肝移植术后复发的影响

肝切除术是目前公认的治疗肝癌的首选方式，但术后肿瘤复发率较高。中国肝癌患者多数合并乙肝感染，乙肝病毒（HBV）因素如：病毒基因型、血清e抗原状态、血清HBVDNA水平、肝内HBVDNA水平与肝切除术后肿瘤复发相关。抗病毒治疗，尤其是干扰素治疗可能是预防肝癌复发的有效方式之一。乙肝病毒因素也可影响肝移植术后患者复发率。