霍乱弧菌致病因子诱导人肠上皮细胞炎症反应的实验研究

目的:鉴定诱导人肠上皮细胞炎性反应的霍乱弧菌分泌产物。方法:野生型霍乱弧菌O1株C6706及其变异株培养上清刺激极化的人单层肠上皮T84细胞体外模型上层腔面,分析细胞受刺激后通透性和细胞活性以及白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达改变;分析上清中霍乱弧菌蛋白酶(Vibrio choleraeprotease,PrtV)和霍乱弧菌溶细胞素(Vibrio choleracytolysin,VCC)含量以及溶血能力。结果:PrtV缺失株培养上清可引起T84细胞层的炎性反应,表现为通透性增加和IL-8,TNF-α基因表达增加。肠上皮细胞炎性反应及红细胞溶血反应与VCC活性有关。结论:VCC是霍乱弧菌引起人肠上皮细胞炎性反应的主要因素,PrtV通过降解VCC而降低对肠上皮细胞的炎性反应。

霍乱弧菌蛋白酶PrtV对霍乱弧菌溶细胞毒素引起人肠上皮细胞炎性反应的修饰

目的研究霍乱弧菌分泌的蛋白酶PrtV(Vibrio cholerae protease,PrtV)对霍乱弧菌溶细胞毒素(Vibrio cholera cytolysin,VCC)引起人肠上皮细胞炎性反应的修饰作用。方法用VCC或PrtV处理后的VCC刺激人单层肠上皮T84细胞体外模型上层腔面,分析细胞受刺激后通透性和细胞活性改变以及细胞因子白细胞介素-8(interlukine-8,IL-8)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因表达。结果VCC可引起极性的肠道T84细胞的炎性反应,表现为通透性增加和IL-8以及TNF-α基因表达增加。纯VCC蛋白在浓度为160ng/ml时引起肠上皮细胞炎性反应,而高浓度的VCC则导致肠上皮细胞损伤。VCC经PrtV处理后对肠上皮细胞炎性作用明显消失。结论结果表明VCC在低浓度时引起肠道上皮的局部免疫防御反应,而高浓度的VCC则直接导致肠道上皮细胞损伤。此外,PrtV可以介导由VCC引起的肠上皮细胞炎性反应的修饰作用。