5种主要海水养殖病原菌多重微流控荧光定量PCR快速检测技术的建立

在养殖现场开展多病原的快速检测是水产养殖产业健康发展的重要技术需求之一。本研究选取哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的vhhA基因、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的toxR基因、大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi)的luxR基因、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)的empA基因和美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(Photobacterium damselae subsp.damselae)的Mcp基因作为靶基因,设计特异性引物,通过优化反应体系和条件,并在微流控芯片进行集成,建立了可同步检测这5种病原菌的多重微流控荧光定量PCR检测技术。结果显示,本研究所建立的检测技术最佳反应体系:2×Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix 5μL,Primer F/R各1μL,DNA模板2μL,ddH_(2)O 1μL。反应条件为95℃30 s,95℃5 s,61℃30 s,扩增30个循环。通过绘制标准曲线发现,在10^(9)~10^(4)copies/μL浓度范围内均有良好的线性相关性。该方法对哈维氏弧菌、副溶血弧菌、大菱鲆弧菌、鳗弧菌和美人鱼发光杆菌美人鱼亚种特异性强,对5种病原菌的最低检测限分别为40、20、200、500和20 CFU/mL,显示出较高的灵敏度,且样品平均检测时间缩短至26 min左右。本研究结果为开发水产养殖多病原快速、精准的现场检测技术奠定了重要基础。

用美人鱼弧菌与创伤弧菌人工感染卵形鲳鲹的组织病理学研究

用美人鱼弧菌Vibrio damsela与创伤弧菌V.vulnificus人工感染卵形鲳鲹Trachinotus ovatus后,对病鱼的组织病理变化进行了观察和分析。结果显示:美人鱼弧菌与创伤弧菌均能引起鱼的鳃、肝、脾、肠、胃、肾等多种组织器官发生较为严重的病理变化,且这两种弧菌导致的病鱼组织病理变化存在较多的相似性。病鱼鳃严重病变,鳃小片上皮细胞增生,相互融合在一起呈棍棒状,鳃小片基部的泌氯细胞肥大,有的泌氯细胞与鳃小片上皮细胞层连在一起;肝严重出血或发生脂肪变性,肝组织结构疏松,肝细胞变性坏死;胃、肠黏膜变性坏死,脾、肾出血;肾小球、肾小管与肾间质变性坏死等。

中国某海域海鱼弧菌致病性研究

目的 :研究从中国某海域海水中分离出的海鱼弧菌的致病性。方法 :分为①毒力实验组 :35只二级昆白小鼠随机分为 4组 ,②伤口感染实验组 :35只SPF小鼠 ,腿部致伤后随机分为 4组 ;观察小鼠一般状况、血常规、血培养、脏器细菌培养、伤口分泌物培养、脏器和伤肢病理光镜检查 ,并将鼠体内分离的菌株和实验前菌株进行核酸指纹图比较分析 ,确认细菌来源。结果 :①毒力实验 :海鱼弧菌组 (海组 )腹腔注射细菌悬液后一般情况差 ,持续 2 4h ,病理学检查见多脏器水肿、变性。②伤口感染实验 :伤口感染阳性率为 10 0 % ,病理学检查伤肢皮下及横纹肌可见大量嗜中性粒细胞浸润 ,有蜂窝织炎形成。结论 :自中国某海域分离出的海鱼弧菌在 10 6CFU /ml时 ,具有感染能力 ,可致实验鼠的伤口感染 .

海洋烃细菌的分离及其特性

采自湄洲湾海域的水样 ,经富集培养 ,分离得到 2 5 6株能在以原油为唯一碳源的平板上生长的细菌。通过培养液的比浊法筛选 ,获得海鱼弧菌 (Vibriodamsela)VD 3菌株。VD 3菌株生长的最佳条件是温度 2 0～30℃和溶液中NaCl的质量分数为 3 5 %。该菌具有较强的降解原油的能力。采用气相色谱分析法 ,考察VD 3菌对不同烃类的利用。结果表明 ,该菌既能降解烷烃 ,也能降解芳烃 ,对长链烷烃正廿四烷的降解率大于正十六烷。

首次从长毛对虾中检出海鱼弧菌

本文首次报告从患病的长毛对虾中,分离到人鱼共患的致病性弧菌——海鱼弧菌。

海鱼弧菌鉴别显色培养基的研制

旨在设计开发一种更适用于海产品重要致病菌——海鱼弧菌快速筛选与检测的鉴别显色培养基（VdCM）。基于海鱼弧菌特有的综合酶系统及其代谢特点和对某些抑菌剂的抵抗力,进行VdCM的设计与研发,进而对VdCM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。通过实验得出：VdCM对海鱼弧菌具有较好的选择性和特异性;培养16~24 h,海鱼弧菌菌落为绿色,其他致病菌菌落呈黄色或不生长;VdCM对海鱼弧菌的出菌率为（83.46±3.42）%;VdCM的检出限为101 cfu/mL。与常规方法相比,VdCM快速筛选海鱼弧菌的结果易于观察,减少了溶藻弧菌等常伴弧菌的干扰,省去了TCBS分离培养后的生化实验,降低检测成本,减少工作量,具有更高的检测效率和鉴别能力。