一株致皮蛋“爆蛋”的嗜碱菌株分离鉴定及其De nove测序分析

该研究采用传统微生物培养法从皮蛋“爆蛋”样品中分离出一株“致爆”菌BD菌株,经形态学观察、生理生化分析及16S rDNA测序比对,对菌株进行鉴定,并构建系统发育树。通过细菌学试验探究了菌株的生长性能、耐盐耐碱特点和产气能力,并对该菌进行De nove测序,获得菌株基因组框架图。结果表明,该菌16S rDNA序列与麦氏弧菌(Vibrio metschnikovii)同源性高达99.92%。该菌株最适生长温度为25~40℃,可在高碱(pH 12)环境下生长,具有产气能力。该菌株基因组大小为3.70 Mb,共编码3381个基因,对蛋白编码基因功能注释结果显示,该菌株基因组中含有大量碳水化合物代谢通路、膜转运功能相关通路基因,推测其在皮蛋内通过调节相关基因表达耐受高碱环境。BD菌株的碱耐受能力为其在皮蛋中增殖提供了有利条件,而其生理特点为皮蛋“爆蛋”控制提供依据,也为微生物高碱、高脂质环境适应相关功能基因的挖掘提供参考。

与O139霍乱弧菌血清交叉凝集的麦氏弧菌

目的:对基层实验室上送的6株疑似O139霍乱弧菌进行检测及研究。方法:参照1999年《霍乱防治手册》第五版及相关资料进行检测。结果:该6株菌均系与O139霍乱弧菌血清有交叉凝集的麦氏弧菌。结论:该批菌株不是O139霍乱弧菌,而是麦氏弧菌。

腹泻患者呕吐物中麦氏弧菌的分离及其生物学性状观察

目的:观察致人腹泻的麦氏弧菌的生物学性状。方法:参照GB15984-1995对1例腹泻患者进行病原学检测。结果:检测出麦氏弧菌1株,显示其不耐低温、耐碱和耐胆盐的特性,对青霉素、头孢拉定、复方磺胺甲口恶唑则有较高的耐药性,对阿米卡星、庆大霉素、氯霉素、呋喃唑酮等敏感,并能产生强烈的肠道毒素。结论:研究麦氏弧菌的生物学特性有助于临床快速检测,从而及时作出诊断,为患者采取有效治疗。

牛源麦氏弧菌的分离鉴定及进化分析

从肉牛上呼吸道中分离出3株细菌,通过细菌培养、形态观察、生化试验、16S r RNA鉴定及对其系统发育进化分析,结果分离菌株为麦氏弧菌(Vibrio metschnikovii)。药敏试验结果显示,该分离菌株对头孢类药物、左氟沙星等药物敏感,对青霉素、氨苄西林、万古霉素等药物耐药。动物致病性试验显示,接种的小鼠于24 h全部死亡。

鸡蛋中梅氏弧菌药敏试验及氨基酸代谢研究

从一份鸡蛋样品内部分离出致病性弧菌：梅氏弧菌,并对其进行药敏实验和蛋白质、氨基酸代谢研究。结果表明,该菌有较强的溶血能力,且对环境适应能力极强,在25-43℃均能生长;药敏试验结果表明多种抗生素对此菌有一定的抑制作用,但罗红霉素对其无抑制;梅氏弧菌的代谢对水解氨基酸和蛋白质总量影响不大,但可明显降低发酵培养基中游离氨基酸的含量,其中GLU、IEU、HIS、ASP、SER 5种氨基酸降低较明显。本文从梅氏弧菌的溯源及致病性进行讨论,旨在为鸡蛋食用安全防控提供一定的理论依据。

纳升级反相液相色谱-串联质谱法分析麦氏弧菌蛋白质组

[目的]较系统地研究分析麦氏弧菌提取蛋白质。[方法]利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和纳升级反相液相色谱-串联质谱(nano-RPLC-MS/MS)法系统分析了来源于美国龙虾的一株麦氏弧菌F5-1提取总蛋白和总蛋白直接酶解产物,并进行数据库检索鉴定蛋白质。纳升级反相液相色谱分析条件为:上样量为5μl,经C18预柱(200μm×0.5 mm,3μm,120)脱盐10 min,再经过Chrom XP C_(18)-CL毛细管柱(75μm×15 cm,3μm,120)分析,2%乙腈(0.1%甲酸)-98%乙腈(0.1%甲酸)梯度洗脱90 min,采用ESI-Q-TOF MS,在IDA采集模式下分析鉴定麦氏弧菌提取总蛋白酶解产物。[结果]直接酶解鉴定到1 538种蛋白质,通过Gene Ontology分析了麦氏弧菌F5-1提取总蛋白的分子功能、生物进程和细胞组分。提取的麦氏弧菌蛋白具有催化、结合、结构分子、转录调节因子等功能活性,其中催化活性的蛋白比例较大,且多为参与代谢进程的相关酶类。[结论]研究可为麦氏弧菌蛋白质组学的深入研究奠定基础。

智舌快速检测水产品中的麦氏弧菌

探索仿生传感器——智舌在麦氏弧菌快速检测中的可行性,以期构建一种新型的水产品中致病性弧菌的快速检测技术。用智舌结合主成分分析法对11种致病性弧菌的液体培养物进行区分,以确定该法能否将11种致病性弧菌区分开及其所需的最短培养时间,并确定针对被测物的适宜电极和频率段组合;然后用智舌结合簇类独立软模式识别法构建麦氏弧菌的判别模型,并对判别模型进行回判及验证,根据判别准确率确定最佳判别模型,从而探索智舌结合簇类独立软模式识别法能否用来建立快速检测麦氏弧菌的数据库。结果显示:当弧菌在其特异性培养基中培养7h后,智舌能很好地将11种致病性弧菌区分开;6种电极与其频率段组合下的判别模型对所有样本的判别准确率均达到了100%。说明所建模型可用于麦氏弧菌的快速筛检。

一株分离自美国龙虾的麦氏弧菌的鉴定及其低温状态下细胞脂肪酸的变化

【目的】对从美国龙虾(Homarus americanus)中分离的菌株F5-1进行种属鉴定并分析其低温状态下脂肪酸组成变化。【方法】通过VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪分析菌株的生理生化特征和进行药敏试验;16S rRNA基因序列同源性分析确定该菌株的系统发育学地位;通过气相色谱和质谱联用法(GC-MS)分析菌株的全细胞脂肪酸。【结果】菌株F5-1为革兰氏阴性菌,对弧菌抑制剂O/129敏感,对青霉素有耐药性;生理生化特征与麦氏弧菌(Vibrio metschnikovii)的相似性为96%,16S rRNA序列与麦氏弧菌(GenBankNo.HQ658055)的相似性为99%;菌株的主要脂肪酸组成为C12∶0、C14∶0、C16∶0和C16∶1(n-7),不饱和脂肪酸(棕榈油酸)相对含量达34%,低温培养状态下,不饱和脂肪酸(棕榈油酸)相对含量增加至40%。【结论】将美国龙虾中分离的菌株F5-1鉴定为麦氏弧菌,该菌对多种药物敏感,菌细胞脂肪酸组成与来源于俄罗斯海参威某饮用水水库中分离的麦氏弧菌有较大差异。

3株与O139群霍乱弧菌血清交叉凝集的麦氏弧菌的分离鉴定

目的 2011-2012年对3株疑似O139群霍乱弧菌进行检测与分离鉴定。方法依据检验标准对样本进行分离培养、血清学试验、生化反应等鉴定。结果该3株菌为麦氏弧菌,与O139群霍乱弧菌诊断血清有交叉凝集。结论该3菌株不是O139群霍乱弧菌,而是麦氏弧菌。为避免实验结果出现假阳性,必须进行系统生化鉴定,以确保菌株鉴定的准确性。特别是在处理霍乱疫情时,病原菌的正确鉴定可为控制疫情提供科学依据。

2株与O139群霍乱弧菌血清交叉凝集的麦氏弧菌

目的对2株疑似O139群霍乱弧菌进行系统分离鉴定,以确诊是否为霍乱。方法对疑似菌株进行系统鉴定,包括血清学诊断、生化试验及CT、rfb基因等分子生物学检测。结果该2株菌均不是O139群霍乱弧菌,而是麦氏弧菌。结论霍乱弧菌的鉴定除了血清学诊断外还应该结合系统生化试验和分子生物学试验,排除假阳性,为疫情处置提供科学依据。

麦氏弧菌多位点序列分型方法的建立与应用

目的建立针对麦氏弧菌的多位点序列分型(MLST)方法,评价该方法的分型效果,并对收集的麦氏弧菌进行MLST分析。方法筛选出7个管家基因(ftsZ、gapA、mreB、gyrB、purM、recA、ropA),设计特异引物,在17株麦氏弧菌中PCR扩增管家基因序列。用DnaSP 6.12.03软件和Split tree 4.0软件评价基因多态性、中性进化和基因重组情况;根据7个管家基因的序列差异获得对应的序列分型(ST)型别,用BioNumerics 7.1软件对不同ST型别构建最小生成树和聚类图,并用eBURST 3.0软件计算克隆复合体(CCs)。结果所选的管家基因具有足够多的等位基因位点、序列差异和足够高的分辨率;7个管家基因的Split tree对所有麦氏弧菌的聚类一致;中性试验结果显示,7个管家基因在进化过程中受遗传漂变的影响较小。MLST将17株麦氏弧菌分成14个ST型别,大多数菌株(64.70%)均单独形成一个ST型别,其中ST007形成了可能的优势克隆群。这些菌株之间存在相对较远的遗传距离,在垂直传播上呈现出潜在的地域聚集性。结论本研究建立的麦氏弧菌的MLST方法能分析麦氏弧菌的种群结构和遗传进化关系。

牛源麦氏弧菌ASP基因的克隆与原核表达

为获得牛源麦氏弧菌重组碱性丝氨酸蛋白酶(ASP),笔者扩增并构建了以麦氏弧菌FD39-1的ASP基因为插入片段的重组表达质粒p ET32a-ASP,将该质粒转化至大肠杆菌Rosetta中诱导表达并纯化,采用SDS-PAGE与Western-blot技术检测目的蛋白是否表达成功。结果显示,扩增的ASP基因与GenBank中相应基因序列(Kp126900.1)的同源性达100%。ASP基因在大肠杆菌中成功表达,表达蛋白相对分子质量大小约为58 ku,与预期一致。Western-blot显示在预期位置出现阳性条带。本研究为麦氏弧菌ASP的生物学特性与亚单位疫苗的制备奠定了基础。