金鲳鱼肠炎病的病原菌分离鉴定及其中草药防治

从具有肠道糜烂、肛门突出体外病症的金鲳鱼(Trachinotus ovatus)体内筛选致病菌株,分离纯化获得菌株05A。通过活菌注射金鲳鱼腹腔回归感染试验,确定菌株05A为致病菌株。经单菌落形态特征、生理生化指标以及16S rRNA分子鉴定,确定其为哈维氏弧菌(Vibro harveyi)。中草药的体外抑菌实验表明,大蒜、儿茶、五倍子和石榴皮等4种中草药对病原菌05A有较好的抑菌效果,其次是仙鹤草、黄连、黄芩、甘草、大黄、五味子和诃子。

环境因子对发光细菌的生长及日本对虾仔虾感染死亡率的影响

以水温、盐度、pH、COD、NH3-N为环境因子 ,以哈维氏弧菌 (Vibroharveyi)感染日本对虾 (Penaeusjaponicus)仔虾 ,试验进行 3d。结果表明 ,水温、盐度、pH和COD对发光细菌的生长和日本对虾仔虾的感染死亡率具有明显的促进作用。在水温 30℃ ,盐度 32 .8,pH 7.6 4和COD 10 .2mg/L时 ,发光细菌在试验结束时的数量比初始时分别增加了 11.2倍 ,6 .5倍 ,6 .2倍和 7.9倍 ;日本对虾仔虾的死亡率比对照组分别增加了 6 0 % ,4 5% ,4 3%和 50 %。NH3-N对发光细菌的促生长作用不明显 ,但其质量浓度 1.2～ 1.6mg/L时 ,能增加日本对虾仔虾对发光病的感染率和死亡率。

成虾发光病病原体的分离鉴定及防治技术研究

成虾养殖中也经常发生发光病 ,危害同样十分严重 .研究证明 ,哈维氏弧菌 (Vibroharveyi)也是成虾发光病的主要致病菌 .注射、投喂、创伤、浸泡等几种感染方式都会造成对虾大量死亡 ,但感染速度和发光程度有明显的差别 .侵入虾体内的发光菌的数量对对虾的成活率有明显的影响 .致病菌与幼苗发光病的药物敏感性相似 ,仅对少数药物敏感 ,2种药饵可减少损失率 ,但防治工作应以预防为主 ,综合处理 .

基于vhhP2基因的SYBR Green I实时定量PCR检测哈维氏弧菌方法的建立

根据哈维氏弧菌(Vibro harveyi)溶血素基因vhhP2的保守序列设计特异性引物,建立了SYBR Green I实时定量PCR检测哈维氏弧菌的方法。构建含vhhP2基因的重组质粒作为标准品,进行SYBR Green I实时定量PCR,在Tm为60℃时,扩增产物的熔解曲线仅有一个特异峰,扩增所得标准曲线为y=–3.331x+37.48,相关系数为0.998,扩增效率为1,最低可检测到7个拷贝。实验结果表明该检测技术具有较高的特异性、敏感性和重复性,对哈维氏弧菌病的快速诊断和流行病学调查有重要意义。

2种弧菌鞭毛蛋白的分离纯化与鉴定

尝试分离提取2种弧菌的鞭毛蛋白，采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳对所提蛋白进行分离纯化，Western免疫印迹检测，电镜鉴定。结果显示：实验已经成功分离提纯了哈维氏弧菌的鞭毛蛋白，获得了溶藻弧菌鞭毛蛋白的初提液。提纯的哈维氏弧菌鞭毛蛋白经SDS-PAGE显示3条清晰蛋白带（相对分子量分别为39.7，41.9和42.7KDa），透射电镜观察表明该蛋白呈经典的丝状，可以认为哈维氏弧菌的鞭毛丝是由相对分子量分别为39.7，41.9和42.7KDa的3种鞭毛蛋白亚基构成。溶藻弧菌鞭毛蛋白的初提液经SDS-PAGE后显示5-9条蛋白带，其中36.8KDa的蛋白带有强的免疫原性。