RP-HPLC法同时测定狭基线纹香茶菜中4个碳苷黄酮

目的建立同时定量测定狭基线纹香茶菜中viceninⅡ、isoschaftoside、schaftoside、vitexin的RH-HPLC。方法狭基线纹香茶菜70%乙醇提取液分析采用Phenomenex luna C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,体积流量0.8 m L/min,检测波长344 nm;柱温为室温（25℃）。结果 ViceninⅡ、isoschaftoside、schaftoside、vitexin线性范围分别为0.38~4.18μg、0.66~7.26μg、0.43~4.73μg、0.48~5.28μg;平均回收率（n=6）分别为97.7%、98.8%、96.9%、100.1%,RSD分别为1.6%、2.1%、1.8%、1.9%。结论本法的检测波长,流动相和提取溶剂的选择在狭基线纹香茶菜中黄酮碳苷类成分的定量分析上是最适合的。

紫外分光光度法测定战骨中总黄酮的含量

目的:建立一种战骨中总黄酮的含量测定方法。方法:选用测定波长282nm,以6,8-二葡萄糖基芹菜素(vicenin Ⅱ)为对照品,采用紫外分光光度法进行了战骨总黄酮的含量测定。结果:vicenin Ⅱ在2.4～16.8μg/ml具有良好的线性关系,平均回收率为100.60%,RSD为1.40%。结论:该方法操作简便,结果准确,重复性好,可用于战骨药材的质量控制。

白背叶化学成分和含量测定研究

目的：研究白背叶的化学成分并建立含量测定方法。方法：聚酰胺柱色谱,Sephadex LH-20柱色谱,制备液相色谱分离纯化,理化性质和光谱数据进行结构鉴定;高效液相色谱条件,Inertsil ODS-3 C18（4.6 mm×150mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-水（24∶76）,检测波长335 nm。结果：从白背叶正丁醇萃取部位分离得到一化合物,鉴定为葫芦巴苷Ⅱ;葫芦巴苷Ⅱ的线性范围为0.053-10.60μg,r=0.9999;平均回收率为99.32%,RSD1.82%（n=6）。结论：该化合物系首次从该植物中分离得到,并首次利用高效液相色谱法建立了测定白背叶中葫芦巴苷Ⅱ含量的方法,方法简便、准确可靠。

纤花线纹香茶菜中3种水溶性黄酮类成分含量动态变化研究

目的：建立同时测定纤花线纹香茶菜中新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷、夏佛塔苷含量的方法,并分析其含量动态变化。方法：采用Phenomenex luna C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.5%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.8ml·min^-1,检测波长为330 nm,柱温为室温（25℃）,进样量：10μl。结果：新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷、夏佛塔苷线性范围分别为0.130-3.110μg（r=0.999 8）、0.180-4.540μg（r=0.999 9）、0.08-1.97μg（r=0.999 9）;平均回收率分别为96.8%、99.2%、97.1%,RSD分别为1.9%、1.6%、1.6%（n=6）。上述3种水溶性黄酮成分从幼苗期开始显著累积,异夏佛塔苷和夏佛塔苷在3月和8月达到最高值;新西兰牡荆苷2的含量在1~4月趋于稳定,5月后开始逐渐累积,8月达最高值,之后开始呈逐渐下降的趋势。结论：以水溶性黄酮成分含量为指标,纤花线纹香茶菜的最佳采收期为3月和8月,且以8月份采收的药材质量最佳。

反相高效液相色谱法同时测定净石灵胶囊中5种成分的含量

目的建立同时测定净石灵胶囊中新西兰牡荆苷Ⅱ、异夏佛塔苷、淫羊藿苷、淫羊藿苷次苷Ⅱ和迷迭香酸含量的反相高效液相色谱法。方法采用Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相系统为甲醇(A)-0.2%甲酸水溶液(B),梯度洗脱;流速为1.0 m L·min^(-1);柱温25℃;检测波长为切变波长(0~40 min,270 nm;40~50 min,329 nm)。结果净石灵胶囊中新西兰牡荆苷Ⅱ、异夏佛塔苷、淫羊藿苷和淫羊藿苷次苷Ⅱ的进样量分别在0.099~1.238、0.132~1.650、0.081~1.012、0.038~0.475、0.062~0.775μg内与色谱峰面积呈良好的线性关系,加样回收率(n=6)分别为98.6%、99.1%、97.1%、101.0%、98.6%,RSD分别为1.2%、0.97%、1.4%、1.6%、1.9%。结论该方法符合方法学验证要求,简便、快捷,可用于净石灵胶囊的质量控制。

铁皮石斛共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ的体外抗氧化与诱导HepG2细胞凋亡的作用

目的:对不同道地种源铁皮石斛的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ(芹菜素-6,8-二-C-葡萄糖苷,vicenin Ⅱ)进行体外抗氧化及诱导肝癌HepG2细胞凋亡的活性研究。方法:采用2,2-联苯基^(-1)-苦基肼法(DPPH),2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸法(ABTS)和铜离子还原法对vicenin Ⅱ(0.005~1g·L^-1)进行体外的抗氧化活性研究;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测viceninⅡ(12.5~100μmol·L^-1)对人6种不同的肿瘤细胞体外的增殖抑制作用;后续凋亡实验viceninⅡ浓度为75μmol·L^-1,采用Hoechst33258染色,荧光显微镜进行HepG2细胞形态学观察;应用流式细胞术,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)检测HepG2细胞凋亡率;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路及相关凋亡基因的mRNA表达。结果:Vicenin Ⅱ质量浓度为1g·L^-1时,对DPPH的清除率和Cu2+还原率为48.82%和22.01%(P<0.01);当viceninⅡ质量浓度为0.5g·L^-1时,对ABTS清除率为86.88%(P<0.01);viceninⅡ显著抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,75μmol·L^-1的vicenin Ⅱ作用48h后,细胞存活率为45.69%(P<0.01),细胞凋亡率为14.57%(P<0.01),升高B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2,半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8,p38,细胞外信号调节激(ERK),c-Jun氨基末端酶(JNK),核转录因子-κB(NF-κB)mRNA表达(P<0.01)。结论:铁皮石斛不同道地种源的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ在体外具有一定的抗氧化作用,能有效抑制HepG2细胞增殖,并可能通过调控MAPK通路及Bax/Bcl-2途径诱导HepG2细胞凋亡。

丹霞种、云南广南种铁皮石斛中主要黄酮苷的分离鉴定

目的:对2个道地种源(丹霞种、云南广南种)铁皮石斛中的黄酮苷成分进行提取分离、纯化及结构鉴定,为确认铁皮石斛的共性黄酮苷成分提供实验依据。方法:(1)采用70%乙醇提取两个产地铁皮石斛叶的总黄酮成分,依次采用有机溶剂石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取粗提物,运用大孔吸附树脂AB-8,LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)以及ODS柱色谱对水饱和正丁醇萃取部位进行分离纯化,通过化合物的理化性质结合HPLC,ESI-MSn,1H-NMR,13C-NMR等现代波谱学方法鉴定黄酮苷结构。(2)利用HPLC分析比较不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛的黄酮苷共有成分。结果:从2个产地铁皮石斛叶中共分离得到了5个黄酮苷化合物,经鉴定为芦丁,新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,佛莱心苷,异佛莱心苷。4个不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛茎中均能检出新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ丰度相对较大,而佛莱心苷、异佛莱心苷在云南广南种、广西铁皮兰种中出峰明显,芦丁则在丹霞种中尤为突出。结论:新西兰牡荆苷Ⅱ为铁皮石斛不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)的共性黄酮苷成分,可作为铁皮石斛特征图谱的参照物。

酸枣仁黄酮部位不同配伍的解郁安神作用及谱-效相关性分析

目的建立酸枣仁黄酮部位不同配伍的HPLC指纹图谱,研究其与解郁安神功效的谱效关系。方法采用Spearman分析、灰色关联度分析、多元回归分析方法将HPLC指纹图谱中各组分特征峰的峰面积与小鼠行为学指标数据相关联。结果酸枣仁黄酮部位HPLC指纹图谱中与药效有较强相关性的成分有5个,分别为维采宁-Ⅱ、牡荆素葡萄糖苷、斯皮诺素、6′″-阿魏酰斯皮诺素、6′″-对羟基苯甲酰斯皮诺素。结论通过谱-效相关性分析,推测出酸枣仁黄酮部位发挥抗抑郁、镇静催眠作用的有效成分,为酸枣仁有效成分筛选及质量控制方法的建立提供了依据。