天山堇菜提取物基于NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路改善哮喘小鼠气道炎症的作用及机制

目的探究天山堇菜提取物(Viola tianshanica Maxim extract,VTME)改善哮喘小鼠气道炎症的作用及机制。方法BALB/c雌性小鼠,随机分为正常对照组、卵清白蛋白(OVA)模型组、VTME低、中、高剂量(80、160、320 mg·kg^(-1))组、阳性对照药地塞米松组(Dex,80 mg·kg^(-1))组。采用OVA致敏、激发的方法诱导哮喘模型。收集小鼠肺泡灌洗液(BALF)并对炎症细胞进行分类计数;采用ELISA法检测BALF中调节活化的正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、IFN-γ及TNF-α含量,肺组织中TNF-α、MCP-1、IFN-γ、IL-17含量以及血清中IgE、嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)水平;采用HE染色观察肺组织病理改变;采用qRT-PCR法和Western blot法分别检测肺组织NLRP3 mRNA表达水平及GSDMD、caspase-1、IL-1β、NLRP3蛋白表达水平。结果VTME能明显降低哮喘小鼠BALF中各类炎症细胞数量及TNF-α、IFN-γ、Rantes的含量,降低肺组织MCP-1、IFN-γ、IL-17的含量以及血清Eotaxin水平;改善哮喘小鼠肺组织病理状态;降低肺组织NLRP3 mRNA水平以及caspase-1、GSDMD、IL-1β和NLRP3蛋白表达水平。结论VTME可能通过抑制NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路对OVA诱导的哮喘小鼠模型发挥保护作用。

天山堇菜提取物的体外抗菌实验

目的 :探讨天山堇菜不同溶剂提取物的抑菌作用。方法 :采用纸片琼脂扩散法、比浊法和稀释法对天山堇菜不同溶剂提取物进行抑菌实验研究。结果 :天山堇菜不同溶剂提取物对供试菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和枯草芽孢杆菌均有一定程度的抑制作用。结论 :天山堇菜不同溶剂提取物对供试菌均有一定的抑菌作用 ,是有研究。

天山堇菜中总黄酮和多糖的微波提取与含量测定

目的从天山堇菜中提取总黄酮和多糖,并测定其含量。方法运用微波技术提取天山堇菜总黄酮和多糖,用比色法测定总黄酮和多糖含量。结果测得天山堇菜中总黄酮含量为1.465%,平均回收率为98.05%,RSD为1.74%(n=5);多糖含量为8.478%,平均回收率为99.86%,RSD为1.58%(n=5)。结论运用微波技术从天山堇菜中提取总黄酮和多糖,反应速度快,效率高。

天山堇菜中挥发油的气相色谱-质谱分析

为探索天山堇菜的药理活性与其挥发油化学成分的关系,用挥发油提取器提取天山堇菜中的挥发油,测得含量为0.067%。采用气相色谱-质谱联用技术对天山堇菜的挥发性成分进行分离鉴定,共分离出60种成分,确认了其中的47种成分,占挥发油总离子流的75.54%。采用峰面积归一化法确定各成分的相对百分含量,其中主要成分为脂肪烃和含氧有机化合物(醇、酮、醛和酯)。

天山堇菜中多糖超声波提取工艺的正交优化

目的探讨天山堇菜中多糖提取的最佳工艺条件。采用正交实验,对影响天山堇菜中多糖的提取因素进行考察。方法运用超声技术提取天山堇菜多糖,用比色法测定糖含量。结果影响天山堇菜中多糖的超声提取因素:提取次数>提取温度>提取时间>料液比,最佳工艺条件为:以蒸馏水为提取溶剂,提取时间50 min,料液比为1∶50,提取温度为60℃,提取3次。结论利用超声提取法提取天山堇菜中的多糖,提取效率高,方法简便可行。

天山堇菜提取物的抑菌活性研究

目的:研究天山堇菜提取物抗菌活性。方法:用85%乙醇采用回流浸煮提取天山堇菜生物碱,用超声法提取黄酮化合物,以此为供试液对4种细菌和5种真菌做抑菌实验。结果:供试液对供试细菌有不同程度的抑制作用,两种提取物对肺炎克雷伯菌的最小抑菌浓度是0.175g/ml;对臭鼻克雷伯菌的最小抑菌浓度分别是0.15g/ml和0.175g/ml;对类产碱假单胞菌和奇异变型杆菌的最小抑菌浓度是0.20g/ml,而对所选真菌抑制效果却不明显。结论:天山堇菜有一定的抗菌活性,是有研究开发价值的一种中草药。

天山堇菜提取物抗氧化性的研究

用Na_2S_2O_3-I_2滴定法测定了天山堇菜提取物对猪油的抗氧化作用。结果表明,不同溶剂天山堇菜提取物对油脂均有一定的抗氧化性,强弱顺序是:85%的乙醇提取物的抗氧化活性>丙酮提取物>氯仿提取物>乙酸乙酯提取物>无水甲醇提取物>正己烷提取物,且提取物用量与抗氧化性呈正相关系。同时与VE和VC进行比较,0.5%(W/V)的85%乙醇提取物的抗氧化性强于0.02%(W/V)VC,而0.02%(W/V)VE的抗氧化活性很小。

复方天山堇菜颗粒化学对照品的研究

目的:提供复方天山堇菜颗粒研究用的化学对照品。方法:分别对干燥的天山堇菜和睡莲化用70%乙醇提取,提取浓缩液得2个提取物Ⅰ a和Ⅱ b,然后分别用水混悬,先后用乙酸乙酯和正丁醇萃取,浓缩正丁醇液部分,得正丁醇提取物Ⅰ b和Ⅱ b,Ⅰb再经聚酰胺层析.乙醇-水(4:6)洗脱得七叶内酯,Ⅱb再经硅胶和C18柱层析,得到烟花苷。结果:2个化合物的UV、IR、1H—NMR和13C—NMR数据符合文献值。结论:提取得到的七叶内酯和烟花苷作为化学对照品是可行的。

天山堇菜挥发油提取时间及抗炎作用研究

目的探讨天山堇菜挥发油的提取和抗炎作用。方法考察蒸馏时间对挥发油提取率的影响,采用二甲苯引起小鼠的炎性水肿考察其挥发油的抗炎作用。结果水蒸气蒸馏6 h,挥发油提取量最大,可达0.76%;挥发油能显著抑制小鼠耳肿胀。结论天山堇菜挥发油具显著的抗炎作用。

天山堇菜凉茶制备工艺研究

以总黄酮提取率为指标,利用正交试验对天山堇菜提取工艺进行优化,同时以口感测试评分,优化凉茶产品配方。试验表明选取天山堇菜提取液20 mL、茶提取液30 mL、水50 m L、木糖醇3 g、麦芽糖醇3 g、结晶山梨醇1.5 g、柠檬酸0.08 g、果胶0.1 g为原料混合,可制得口感清爽酸甜适中的凉茶产品。

天山堇菜化学成分及生物活性研究

通过近年来相关文献查阅,综述天山堇菜的化学成分及生物活性的研究进展。天山堇菜含有多种对人体有益的化学成分。天山堇菜作为新疆特种植物,具有很好的药用价值,值得深入研究。

天山堇菜总黄酮抗甲型流感病毒的作用研究

目的考察天山堇菜总黄酮提取物(TSMF)体内外抗甲型流感病毒的作用。方法①体外实验:采用细胞病变效应(CPE)评分法,考察天山堇菜总黄酮对流感病毒株A/H1N1/京防/262/95、A/H3N2/济防/15/90、A/H3N2/粤防/243/72感染犬肾细胞(MDCK)引起细胞病变的影响。②体内实验:采用甲型流感病毒鼠肺适应株A/H1N1/PR/8/34感染的小鼠模型,观察天山堇菜总黄酮对流感病毒感染小鼠的生命延长率、死亡保护率、肺指数和肺匀浆中细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)的含量,以及对血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IFN-γ、IL-10含量的影响,以HE染色法观察天山堇菜总黄酮对流感病毒感染小鼠肺组织病理变化的影响。结果①体外实验中,与病毒对照组比较,天山堇菜总黄酮对流感病毒株A/H1N1/京防/262/95、A/H3N2/济防/15/90、A/H3N2/粤防/243/72引起的MDCK细胞病变均有一定的抑制作用,其选择指数(SI)值分别为:4.7、9.5、16.8。②体内实验中,与模型组比较,天山堇菜总黄酮中、高剂量组的小鼠死亡率显著降低(P <0.05),存活时间明显延长(P <0.01),其生命延长率分别为48.6%、51.2%;中、高剂量组小鼠的肺指数明显降低(P <0.05,P <0.01),抑制率分别为20.8%、27.6%;天山堇菜总黄酮各剂量组肺匀浆中的IL-1β及血清中的TNF-α水平明显降低(P <0.05,P <0.01),肺匀浆中IL-10水平明显升高(P <0.01);天山堇菜总黄酮中、高剂量组肺匀浆及血清中的IFN-γ水平均明显降低(P <0.05,P <0.01),高剂量组的血清IL-10水平明显升高(P <0.05)。此外,天山堇菜总黄酮对流感病毒感染小鼠的肺组织病理损伤具有明显改善作用。结论天山堇菜总黄酮具有较好的抗流感病毒作用,还能够调控炎性细胞因子的分泌,从而减轻流感病毒感染小鼠的肺部炎症。

基于NF-κB/MAPK信号通路探讨天山堇菜七叶内酯对脂多糖诱导RAW 264.7细胞的保护作用及机制

目的考察天山堇菜七叶内酯(aesculetin,AESN)对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW 264.7)炎症模型的保护作用及机制。方法实验设置空白对照组、LPS模型组、AESN不同浓度(0.16、0.8、4、20μmol·L^(-1))给药组以及对照药吲哚美辛(INDO,10μmol·L^(-1))组,建立LPS诱导RAW 264.7炎症模型。MTS法检测AESN对RAW 264.7细胞毒;Griess法检测一氧化氮(NO)分泌水平;ELISA法检测细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β的含量;qRT-PCR方法检测TNF-α、IL-6、IL-1β,一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平;细胞免疫荧光的方法检测iNOS、p-NF-κB p65、IκBα、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达;检测AESN对环氧酶1/2(COX 1/2)的抑制活性。结果AESN在0.16、0.8、4、20μmol·L^(-1)可明显抑制LPS诱导RAW 264.7分泌炎症介质NO,抑制iNOS mRNA及蛋白表达水平;降低细胞上清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的含量及mRNA表达水平。AESN还能明显抑制p-NF-κB p65蛋白表达,抑制IκBα降解,从而抑制p-NF-κB p65发生核转位;还能明显抑制pp38、p-ERK1/2核转位。AESN对COX-1、COX-2具有明显的抑制活性,IC分别为:28.1、2.3μmol·L^(-1)。结论AESN具有较好的抗炎作用,其作用机制与抑制NF-κB/MAPK信号通路有关。

天山堇菜秦皮乙素大孔树脂分离纯化工艺优化

通过静态吸附与解吸附试验,从8种大孔树脂中筛选出适合纯化天山堇菜秦皮乙素的树脂,并进行吸附性能的研究。结果表明,HPD500树脂对天山堇菜秦皮乙素具有良好的吸附效果,其吸附动力学可用拟二级动力学方程描述,不同温度下的等温吸附可用Freundlich方程很好地拟合,其吸附的自由能变△G、焓变△H和熵变△S均<0,吸附过程是一个自发、放热的物理行为。最佳纯化工艺条件为上样浓度2.5935mg/mL,最大上样量7.7805mg/g·树脂,上样流速2.0mL/min,除杂用水量7BV,50%乙醇洗脱,洗脱剂用量7BV,洗脱流速2.0mL/min。该条件下,秦皮乙素纯度达到37%,回收率达到93%。

天山堇菜中总黄酮的提取工艺研究

目的以天山堇菜总黄酮含量为考察指标,优化天山堇菜总黄酮提取工艺。方法以亚硝酸钠比色法检测天山堇菜中黄酮含量,采取正交试验对影响因素进行优化,考察总黄酮的提取影响因素。结果天山堇菜最佳提取工艺条件为料液比1∶15,提取时间60min,乙醇浓度70%,提取温度90℃。结论该方法准确,简便,可作为天山堇菜总黄酮提取工艺条件。

响应面法优化天山堇菜总黄酮的提取工艺

采用响应面法优化超声波提取新疆天山堇菜中总黄酮的工艺条件。采用Box-Behnken中心组合设计及响应面法分析提取时间、料液比、乙醇浓度、超声次数对天山堇菜中总黄酮的超声提取工艺的影响,筛选最佳条件。提取最优条件为超声70 min,液料比27∶1,乙醇浓度为55%,超声次数为3次,总黄酮提取率预测值为6.27%。在最优条件下进行三次验证试验,总黄酮的平均得率为6.29%。响应面回归方程与试验结果拟合性好,可用于天山堇菜中总黄酮的提取工艺优化。

基于系统药理学的天山堇菜抗2型糖尿病作用分析与验证

目的 根据系统药理学方法预测天山堇菜治疗2型糖尿病的作用机制,并通过动物实验验证降糖效果。方法 通过数据库检索和文献挖掘获得天山堇菜活性成分、作用靶点及2型糖尿病相关的疾病靶点,运用Cytoscape 3.7.2软件绘制活性成分-靶点网络图,构建靶点PPI网络图,进行GO分析及KEGG通路分析,同时建立糖尿病小鼠模型验证不同浓度的天山堇菜提取物降糖效果。结果 筛选出10个活性化合物,干预2型糖尿病的关键靶点35个,多个通路与2型糖尿病发病机制相关。动物实验表明,天山堇菜提取物对糖尿病小鼠具有降糖作用,对于正常小鼠血糖没有影响。结论 本文采用系统药理学方法预测了天山堇菜的作用机制,表明天山堇菜通过多靶点、多通路产生抗2型糖尿病的作用,该作用通过动物实验得到了验证,为天山堇菜的进一步开发提供了理论基础。

天山堇菜总黄酮抗菌、抗炎、解热、镇咳作用研究

目的考察天山堇菜总黄酮的抗菌、抗炎、解热、镇咳作用。方法采用体外倍比稀释法及体内建立小鼠金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌感染模型来考察天山堇菜总黄酮的体内外抗菌作用;采用小鼠耳廓肿胀模型和腹腔毛细血管通透性升高模型考察其抗炎作用;通过干酵母诱导的大鼠发热模型考察其解热作用;采用氨水引咳法观察其镇咳作用。结果天山堇菜总黄酮对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)值分别为1.95、3.90 mg/mL,对大肠埃希菌的MIC、MBC值分别为0.49、0.98 mg/mL。天山堇菜总黄酮在0.32 g/kg对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌小鼠感染模型具有显著的保护作用,其保护率分别为30%、40%。天山堇菜总黄酮在0.16、0.32 g/kg可显著抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,在0.08、0.16、0.32 g/kg可显著抑制冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管炎性渗出;天山堇菜总黄酮在0.14、0.28 g/kg对干酵母致大鼠发热具有较好的抑制作用。天山堇菜总黄酮对氨水引咳具有显著的抑制作用,在0.32 g/kg时抑制率为57.7%。结论天山堇菜总黄酮提取物具有较好的抗菌、抗炎、解热及镇咳药理活性,其作用机制有待于进一步研究。

大孔吸附树脂纯化天山堇菜中总黄酮的工艺研究

目的以天山堇菜总黄酮含量为考察指标,研究大孔吸附树脂分离纯化天山堇菜总黄酮工艺。方法以亚硝酸钠比色法检测天山堇菜中总黄酮含量,用大孔吸附树脂及柱层析法,考察总黄酮分离纯化的影响因素。结果AB-8型大孔吸附树脂是纯化天山堇菜总黄酮的最佳大孔吸附树脂。最佳工艺参数为上柱液浓度0.0667mg·mL^-1,洗脱剂为60%乙醇,最大上样体积为13BV,解吸液体积用量为10BV。结论该方法操作简单,有效,可作为天山堇菜总黄酮纯化的工艺条件。

基于毛细管电泳法测定天山堇菜中5种活性成分的含量

目的:应用毛细管电泳技术测定天山堇菜中5种活性成分(白杨素、七叶内酯、伞形花内酯、山柰酚和槲皮素)的含量。方法:对影响毛细管电泳分离的主要参数进行优化,包括缓冲溶液的种类及浓度、添加剂的种类及浓度、分离电压和检测波长,得到最优分离条件。结果:最优缓冲条件为缓冲溶液为30 mmol/L硼砂溶液-20%乙腈,分离电压为12 kV,电泳时间为30 min,0.5 psi(3.45 kPa)压力进样5.0 s,紫外检测波长为198 nm。结果:本方法线性良好(R^(2)=0.9920~0.9990),方法重现性高(RSD<5.7%),回收率为98.2%~110.2%;天山堇菜中七叶内酯含量为20~50μg/g,伞形花内酯含量为30~70μg/g,山柰酚含量为220~250μg/g。结论:毛细管电泳法可以快速、方便测定天山堇菜中活性成分的含量,并为毛细管电泳技术在中草药中活性成分的测定提供了应用依据。