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根癌土壤农杆菌Ti质粒VirE2基因的克隆及原核表达 被引量:2
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作者 刘红玲 李小红 +2 位作者 王彦芹 王爱英 祝建波 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期13-16,共4页
目的:获得根癌土壤农杆菌Ti质粒VirE2基因原核表达蛋白,为研究其功能打下基础。方法:利用PCR方法,根据发表的根癌土壤农杆菌(Agribacterium tumefaciens)C58Ti质粒基因序列,设计1对引物扩增了C58根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区蛋白VirE2基... 目的:获得根癌土壤农杆菌Ti质粒VirE2基因原核表达蛋白,为研究其功能打下基础。方法:利用PCR方法,根据发表的根癌土壤农杆菌(Agribacterium tumefaciens)C58Ti质粒基因序列,设计1对引物扩增了C58根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区蛋白VirE2基因,连接T载体经测序,结果与发表的序列同源性达100%。将目的片段从T载体上切下,连接至原核表达载体PET-30a上,转化E.coli DH5α,筛选出阳性克隆,提质粒转化E.coliBL21,用IPTG诱导表达。结果:经SDS-PAGE电泳,发现与对照比较在略小于66kDa处有特异条带,与理论大小(63.5kDa)相符。结论:克隆的VirE2基因获得了原核表达。 展开更多
关键词 vire2基因 克隆 表达
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根瘤农杆菌T-DNA结合蛋白VirD2和VirE2在水稻中的亚细胞定位研究 被引量:1
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作者 颜廷祥 罗美中 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期22-27,共6页
根瘤农杆菌侵染植物过程中,至少有5种毒性蛋白(Vir)进入宿主细胞发挥作用,而其中VirD2与VirE2的作用最为关键,研究二者在水稻中的亚细胞定位,对农杆菌介导的水稻遗传转化机制的阐明具有重要意义。利用水稻叶鞘原生质体瞬时表达系统,发现... 根瘤农杆菌侵染植物过程中,至少有5种毒性蛋白(Vir)进入宿主细胞发挥作用,而其中VirD2与VirE2的作用最为关键,研究二者在水稻中的亚细胞定位,对农杆菌介导的水稻遗传转化机制的阐明具有重要意义。利用水稻叶鞘原生质体瞬时表达系统,发现3种冠瘿碱型的VirD2均只定位于细胞核中,与在拟南芥中相同;而3种冠瘿碱型的VirE2均主要定位于细胞核中,但在细胞质中仍有较多分布,与在拟南芥中的定位不同。因此,推测不同冠瘿碱型的农杆菌对水稻侵染能力的差异与VirD2和VirE2亚细胞定位的关系不大;同时表明根瘤农杆菌介导的拟南芥及水稻遗传转化机制存在相似性,但也有不同之处。 展开更多
关键词 水稻 根瘤农杆菌 VirD2 vire2 原生质体 亚细胞定位 冠瘿碱型
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Cloning and characterization of the PtVIP1 gene in Populus 被引量:1
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作者 Haoran Wang Weitao Zhang +1 位作者 Mingxiu Wang Qiang Cheng 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 2019年第6期2259-2266,共8页
The VirE2-interaction protein 1(VIP1)serves as a regulator of mitogen-activated protein kinase 3(MPK3)-mediated stress gene modulation under biotic stress,which in turn activates the MPK3 pathway in Arabidopsis.The mo... The VirE2-interaction protein 1(VIP1)serves as a regulator of mitogen-activated protein kinase 3(MPK3)-mediated stress gene modulation under biotic stress,which in turn activates the MPK3 pathway in Arabidopsis.The mode of action of the VIP1 protein in Populus in response to biotic stress remains unknown.In this study,we cloned the full-length cDNA of the PtVIP1 gene from Populus trichocarpa(accession number of GenBank:KY793105).The VIP1 protein harboured a conserved bZIP(basic leucine zipper)domain located in the C-terminus.The VIP1 subcellular localization assay indicated that the VIP1 protein was present in the cytoplasm and nucleus under normal conditions,and that an increase in the amount of the protein in the nucleus occurred after treatment with flg22,the elicitor-active epitope of flagellin which triggers the innate immune response in plants.Transgenic Populus plants overexpressing VIP1 genes(PtVIP1 of Populus;or AtVIP1 of Arabidopsis,as positive control)were generated to investigate the role of VIP1 in vivo.The expression of poplar pathogenesis-related protein 1(PR1)genes was upregulated in transgenic-PtVIP1 or AtVIP1 poplar plants.The transgenic poplar plants overexpressing PtVIP1 or AtVIP1 also showed enhanced resistance to Brenneria salicis infection.These results suggest that the VIP1 protein accumulates in the nucleus in response to biotic stress,and that the pathogen resistance of transgenic VIP1 poplar may be associated with the induced expression of PR1 genes in response to pathogen challenge. 展开更多
关键词 vire2-interaction protein 1 SUBCELLULAR localization TRANSGENIC POPLAR PATHOGEN resistance
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