紫薯花青素通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路对辐射致造血干/祖细胞衰老的保护作用

目的:探讨紫薯花青素(Solanum tuberosum anthocyanin,STA)对辐射致造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)/造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)衰老起保护作用的分子机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、STA治疗组和STA预防组,利用X射线照射构建衰老细胞模型。给药后用血细胞分析仪检测各组小鼠血液指标;免疫磁性分选法分离纯化各组小鼠Sca-1^(+)HSC/HPC,并用衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-Gal)染色试剂盒对其进行染色实验并计算各组阳性率;利用HSC/HPC混合集落(colony forming unit-mixture,CFU-Mix)数评价各组细胞形成HSC/HPC集落能力与分化潜能;流式细胞术分析细胞周期;实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR)检测p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA的表达;Western blot检测p53和p21^(Waf1/Cip1)蛋白的表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠外周血指标红细胞、白细胞、血小板数均极显著降低(P<0.01),衰老细胞阳性率极显著增加(P<0.01),Sca-1^(+)HSC/HPC形成CFU-Mix的数量极显著减少(P<0.01),G0/G1期比例极显著升高(P<0.01),G2/M和S期比例极显著降低(P<0.01),p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA和蛋白的相对表达量极显著增加(P<0.01),STA治疗和STA预防均可分别显著和极显著恢复模型组小鼠以上指标,其中STA预防效果更好。结论:STA可以通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路保护受到辐射的HSC/HPC。

基于高校的WAF精细化策略应用探讨

高校越来越多的信息系统(网站)向互联网开放访问,这需要WAF的防护。WAF若仅设置单一的通用策略,往往会出现防护不足或防护过严的情况。文章以WAF对Web应用的安全防护为研究,探讨结合WAF部署的模式和防护策略的类型,来分析各类Web应用的具体防护要求,并将其匹配到WAF的精细化策略中,实现更有针对性的防护。经过对WAF的精细化策略应用实践,来加强对高校信息系统(网站)的有效防护。

WAF设备测试技术

本文对作为网络应用层防护设备的WAF设备的测试方法进行研究。在分析Web应用服务器面临的网络攻击威胁及其可能存在的安全漏洞基础上,本文重点从WAF设备源码安全性、功能有效性、性能能力三方面提出测试方法。应用该方法可知悉WAF设备防护能力现状,有助于其防护策略的优化。

WAF精细化策略在校园信息系统中的应用研究

为加强校园信息系统的安全防护,文章首先对WAF的基本原理及应用场景进行分析,并归纳了WAF的5种部署模式,即监听部署、串联部署、单臂部署、反向代理部署、牵引部署模式。在此基础上,结合策略类型和策略适用情况,提出了适用于校园信息系统的精细化策略,以保证学校信息系统的安全运行。

WAF在公司网站安全防护中的部署与应用

随着信息技术的广泛应用,Web应用攻击的形式与方法更加多样,WAF作为专门为Web应用提供保护的工具,已成为网络安全防护中的第一道防线。文中介绍了WAF的特点和工作原理,同时对WAF的选型和部署应用进行了阐述。

乳腺癌细胞中p53、C-erbB-2、p21^(WAF1)和CDK4的表达及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测120例乳腺癌组织石腊切片上p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4的表达。结果:p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4阳性表达率分别为53.3%、63.3%、58.3%、41.6%;阳性产物主要位于细胞核中,p53、C-erbB-2的表达与肿瘤组织分级(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)显著相关,p21WAF1的表达与淋巴结转移(P<0.01)显著相关,无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移组;与组织分级及PR、ER表达无显著相关。CDK4阳性表达与肿瘤组织分级(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)显著相关,与PR、ER无相关。结论:p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4与乳腺癌的发生发展密切相关,可作为判断肿瘤浸润转移、指导治疗和估计预后的参考指标。特别是p53的表达水平及淋巴结转移可能是判断乳腺癌的术后生存的独立有效指标,而综合应用上述指标可能更有助于预后的判断。

前列腺癌p21^(CIP1/WAF1)、Rb及PCNA的表达及意义

目的研究p21^(CIP1/WAF1)、Rb及PCNA在人前列腺癌标本中的表达及三者相关性,阐述它们与前列腺癌病理分级及临床分期的关系。方法收集36例确诊前列腺癌石蜡包埋存档标本作为研究对象,采用免疫组化SABC法对其p21^(CIP1/WAF1)、Rb及PCNA进行检测,并应用图象分析仪判定,统计学处理,对前列腺癌的病理分级及临床分期进行了对比分析及相关性研究。结果p21^(CIP1/WAF1)、Rb及PCNA的免疫组化阳性染色为棕黄色和/或棕褐色,定位于细胞浆或细胞核。所得数据均经统计学处理。在不同病理分级、临床分期之间差异均有显著性,同时还发现PCNA与p21^(CIP1/WAF1)及Rb之间存在显著负相关性。但未发现p21CIP1/WAF1与Rb有显著相关性。结论p21^(CIP1/WAF1)、Rb表达与前列腺癌组织的病理分级、临床分期呈负相关性,在发病机制中可能涉及到p21^(CIP1/WAF1)、Rb和PCNA调节通路的异常。同时,作为一种检测方法,可用于判定前列腺癌恶性程度及进程的有价值的指标,对诊治康复也可提供有意义的帮助。

桂枝茯苓丸对荷瘤鼠P21^(waf/cip)基因表达的影响

目的探讨桂枝茯苓丸诱导肿瘤细胞凋亡的机制,为桂枝茯苓丸(GFW)开发应用提供实验依据。方法计算抑瘤率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫组化法测定P21waf/cip蛋白表达,原位杂交法检测Survivin mRNA表达,电镜观察肿瘤细胞超微结构。结果GFW抑瘤率为38.93%,流式细胞仪检测GFW组凋亡率17.79%,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。GFW上调肿瘤细胞P21waf/cip蛋白表达,下调Survivin mRNA表达。GFW组镜下可见瘤细胞以凋亡变化为主。内膜结构完好,核膜清晰,细胞核固缩,染色质团块状散布核内或边集核膜下,并可见凋亡小体。结论GFW诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与上调P21waf/cip及下调Survivin mRNA表达密切相关。

卵巢上皮性癌组织中WAF1基因的表达

【目的】探讨卵巢上皮性癌组织中WAF1表达情况及其与肿瘤临床病理参数的关系。【方法】用RT-PCR和免疫组化分别检测30例正常卵巢、32例良性卵巢上皮性肿瘤和55例卵巢上皮性癌组织中WAF1mRNA和WAF1蛋白表达情况,并结合临床病理进行探讨。【结果】正常卵巢、良性卵巢上皮性肿瘤、卵巢上皮性癌组织中WAF1mRNA阳性表达率分别为73%、56%、40%(P=0.012),WAF1蛋白阳性表达率分别为80%、56%、36%(P=0.001),卵巢上皮性癌WAF1mRNA及其蛋白表达均低于其它两组。卵巢上皮性癌中WAF1mRNA表达与其蛋白表达呈正相关。WAF1蛋白低表达与卵巢癌FIGO分期晚有关(P=0.032),与年龄、组织学类型、病理分级、残余肿瘤大小无关(P>0.05),而WAF1mRNA与上述各项临床病理参数均无关(P>0.05)。【结论】与正常卵巢和良性卵巢肿瘤相比较,卵巢上皮性癌存在WAF1基因转录抑制及蛋白表达低下,WAF1下调可能与上皮性卵巢癌发生有关;晚期卵巢上皮性癌较早期者WAF1蛋白表达低,提示WAF1蛋白低表达与卵巢上皮性癌的恶性生物学行为有关。

HeLa细胞中Skp2的表达调控p21WAFCIP1稳定性

泛素 蛋白酶体抑制剂MG 132处理的HeLa和SaoS 2细胞中 ,低表达的p2 1WAF CIP1受泛素 蛋白酶体通路调控 .为探讨肿瘤细胞中高表达的E3连接酶底物结合亚基 Skp2和低表达的p2 1WAF CIP1之间的关系 ,在HeLa细胞中转染Skp2的反义寡核苷酸后 ,p2 1表达水平明显升高 .同时 ,相对于转染空载体和Skp2ΔF(Skp2的F box缺失突变体 )的真核表达载体 ,转染全长Skp2的HeLa细胞中 ,p2 1表达水平显著下降 ,说明肿瘤细胞中Skp2调节p2 1的稳定性 ,并且这种调控作用依赖于Skp2蛋白中的F box结构 .免疫荧光结果表明 ,Skp2和p2 1共定位于细胞核 ,这为两者间的相互作用提供了前提 ;体内相互免疫共沉淀结果表明 ,p2 1和其它SCFSkp2 的底物一样与Skp2直接结合 ,并且它们之间的结合区不在F box结构域 ,这一结果在体外的GST

p21^(WAF1)基因对人食管鳞癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨p21WAF1(p21)基因转染对食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖的影响.方法:根据转染质粒的不同和是否进行质粒转染分为3组.p21转染组:用脂质体Lipofectamine2000介导将pCDNA3.1(+)-p21质粒转染入EC109细胞;空载体转染组:同样方法将pCDNA3.1(+)-neo质粒转染入EC109细胞;未转染组:未转染的EC109细胞.应用RTPCR、Western blot分别检测p21基因mRNA、P21蛋白变化;流式细胞仪分析细胞周期变化,应用MTT、流式细胞仪和透射电镜检测转染外源p21基因对EC109细胞增殖和凋亡的影响.结果:p21转染细胞中p21 mRNA和P21蛋白高表达;p21转染组EC109细胞生长速度低于空载体组和未转染组;流式细胞仪观察到P21蛋白高表达使EC109细胞发生G1/S阻滞,G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组(63.120%±2.893%vs41.380%±6.536%,42.173%±5.301%,均P<0.01),S期比例显著低于空载体组和未转染组(18.923%±3.084%vs22.573%±5.463%,26.867%±2.922%,均P<0.01),并出现亚G1峰(凋亡峰).透射电镜亦发现p21转染组发生细胞凋亡.结论:p21基因转染可以抑制人食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖并能诱导其发生细胞凋亡.

白藜芦醇体外对肝癌HepG2细胞分化及P21^(WAF1/CIP1)表达的影响

目的探讨白藜芦醇在体外对肝癌细胞分化及相关周期蛋白依赖激酶抑制因子P21WAF1/CIP1的影响。方法体外培养肝癌HepG2细胞,用MTT法检测白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,用倒置显微镜观察肝癌细胞的形态改变,用放射免疫法检测其AFP分泌,以RT-PCR方法检测HepG2细胞中P21WAF1/CIP1mRNA的表达,用免疫细胞化学检测其P21WAF1/CIP1蛋白的表达。结果白藜芦醇呈时间剂量性抑制HepG2细胞株的增殖,使其亚细胞结构趋于正常,AFP分泌量下降,并显著上调HepG2细胞中P21WAF1/CIP1 mRNA和蛋白的表达。结论白藜芦醇能诱导HepG2细胞在体外向正常肝细胞分化,并上调其P21WAF1/CIP1的表达。

丙戊酸钠诱导K562细胞周期阻滞和凋亡并上调p^21WAF1基因mRNA的表达

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对慢性粒细胞白血病急变期细胞株(K562细胞)细胞周期和凋亡的影响及其可能机制。方法:利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞周期和细胞凋亡情况;利用RT-PCR方法检测p21WAF1基因的mRNA的表达。结果:VPA引起K562细胞凋亡增加[(11.47±0.25)%vs(4.77±0.40)%,(P<0.05)]和细胞周期阻滞在G0/G1期[(82.30±9.41)%vs(40.13±2.12)%,(P<0.05)]。同时处理后的细胞中p21WAF1基因mRNA的表达增加[(1.65±0.91)vs(0.25±0.04),P<0.05]。结论:VPA可能通过上调p21WAF1基因,导致K562细胞周期阻滞并引起细胞凋亡。

p53和p21^(WAF1)在鼻咽癌rAd-p53瘤内注射前后的表达及其与近期预后的关系

目的探讨重组人p53腺病毒(rAd-p53)瘤内注射前后鼻咽癌(NPC)组织中p53蛋白和p21WAF1蛋白的表达情况,及其与鼻咽癌近期疗效的关系。方法应用免疫组织化学法检测12例鼻咽慢性炎组织和63例确诊中晚期鼻咽癌组织的p53和p21WAF1蛋白表达情况。63例中晚期鼻咽癌随机分为2组:p53治疗组(32例):rAd-p53瘤内注射+同步放化疗;常规治疗组(31例):同步放化疗。分析两组治疗前及放疗至20 Gy时p53和p21WAF1蛋白表达情况及其与预后的关系。结果 NPC组织中p53和p21WAF1蛋白阳性表达率分别为49.21%和46.03%,和鼻咽黏膜慢性炎相比差异有统计学意义(P<0.05)。NPC组织中p53和p21WAF1蛋白表达有相关性(rs=0.556,P=0.000)。放疗前及放疗至20 Gy时,鼻咽癌p53治疗组和p21WAF1蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05);两组p53蛋白和p21WAF1蛋白阳性表达与1年无瘤生存率有关(P<0.05)。结论 rAd-p53瘤内注射后p53和p21WAF1蛋白的阳性表达可能在抑制鼻咽癌复发或转移进程中起着重要作用,并预示较好的预后。

胃癌组织中CyclinD1和p21^(WAF1)蛋白的表达及临床意义

目的探讨CyclinD1和p21WAF1蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测88例胃癌组织中CyclinD1和p21WAF1蛋白的表达,并与癌旁组织对照。结果胃癌组织中CyclinD1蛋白的阳性表达率为56.8%(50/88)。CyclinD1蛋白的阳性表达与胃癌的组织学类型和分化程度有关(P均<0.05),而与浸润深度和淋巴结转移均无明显相关性(P均>0.05)。p21WAF1蛋白的阳性表达率为26.1%(23/88)。p21WAF1蛋白的阳性表达与胃癌的组织学类型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移均有关(P均<0.05),且p21WAF1与Cy-clinD1蛋白表达呈负相关(r=-0.488,P<0.05)。结论胃癌组织中CyclinD1阳性蛋白高表达、p21WAF1阳性蛋白低表达,且其表达与胃癌的发生、发展有关。

桂枝茯苓丸对荷瘤鼠Survivin、PCNA、P21^(waf/cip)的影响

目的探讨桂枝茯苓丸抑瘤作用的分子机制,为桂枝茯苓丸(GFW)开发应用提供实验依据。方法计算抑瘤率,免疫组化法测定PCNA、P21waf/cip蛋白表达,原位杂交法检测Survivin mRNA表达。结果GFW抑瘤率为38.93%,GFW上调肿瘤细胞P21waf/cip表达,下调PCNA及Survivin表达。结论GFW可抑制肿瘤细胞生长,其机制可能与上调P21waf/cip及下调PCNA及Survivin mRNA表达密切相关。

P21 WAF_1/CIP_1在卵巢上皮性肿瘤中的表达与临床意义的研究

目的 :探讨P2 1WAF1/CIP1在恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达与临床意义。方法 :应用免疫组化S P检测P2 1WAF1/CIP1在 2 0例良性、10例交界性、5 5例恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达 ,并分析P2 1WAF1/CIP1与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理指标的关系。结果 :P2 1WAF1/CIP1在良性、交界性与恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达总阳性率及强阳性率均有显著性差异 (P =0 0 0 7,P强 =0 0 0 1) ,并随良性、交界性、恶性而降低表达 (P <0 0 1,P强 <0 0 0 1) ;与恶性卵巢上皮性肿瘤的临床分期、组织分化、淋巴转移、腹水及预后均有关 (P =0 0 11,0 0 0 0 ,0 0 14 ,0 0 11;P强 =0 0 37,0 0 0 3,0 0 16 ,0 0 0 2 ,P <0 0 5 )。结论 :P2 1WAF1/CIP1在恶性卵巢上皮性肿瘤的形成和发展中发挥重要作用 ,检测P2 1WAF1/CIP1蛋白表达情况对卵巢肿瘤的良恶性鉴别 ,判断预后 ,探索卵巢癌的发生过程 ,从而指导卵巢癌的基因治疗均有积极的意义。

食管癌组织中p21^(cip1/WAF)、p53表达及HPV-16感染的意义

目的 探讨食管癌发生原因及其机制。方法 采用免疫组化方法 ,检测食管癌组织中p2 1cip1/WAF、p5 3蛋白表达水平 ,同时检测HPV 16。并与正常食管上皮和癌旁非典型增生上皮进行对比观察。结果 9例正常食管鳞状上皮中有 8例p2 1cip1/WAF阳性 (88.89% ) ,明显高于食管癌组织 (4 8.72 % ,19/3 9) ;非典型增生中其阳性率 (74.19% ,2 3 /3 1)介于两者之间 ,非典型增生者其阳性率与食管癌比较无显著性差异 (χ2 =3 .669,P >0 .0 5 ) ,但表达强度明显强于食管癌 (χ2 =7.40 3 ,P <0 .0 1) ;正常上皮中 p5 3表达均阴性 ,食管癌组织中p5 3阳性率 (64 .10 % )明显高于非典型增生上皮 (3 5 .48% ) ,P <0 .0 1;正常食管上皮中HPV 16均阴性 ,3 9例食管癌有 13例表达阳性 (3 3 .3 3 % ) ,与非典型增生 (9.68% )比较无显著性差异 (χ2 =3 .3 73 ,P >0 .0 5 )。结论 食管癌患者可发生HPV 16感染 ,食管癌发生与 p5 3基因突变以及 p2 1cip1/WAF表达减弱有关。

胃癌及癌前病变组织中幽门螺杆菌感染与p53、p21WAF1、PCNA、cyclinA蛋白表达的相关性研究

目的探讨胃癌及癌前病变中p53、p21WAF1、PCNA、CyclinA蛋白的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系。方法应用免疫组化SP法染色及Warthin-Starry银染色、PCR、尿素酶法检测胃癌及有关病变中p53、p21WAF1、PCNA、CyclinA蛋白的表达和幽门螺杆菌感染情况。结果在慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎、(CAG)、肠上皮化生(IM)、不典型增生(Dys)及胃癌(GC)中,p53阳性表达率随病变发展而逐渐升高,p53阳性表达率分别为0、3.3%、6.7%、25.0%、70.6%。p21WAF1阳性表达率随病变发展而降低,p21WAF1阳性表达率分别为100.0%、96.7%、86.7%、75.0%、42.6%。PCNA和cyclinA阳性表达率随病变发展而升高,PCNA阳性表达率分别为45.0%、60.0%、70.0%、87.5%、85.3%;CyclinA阳性表达率分别为0、6.7%、20.0%、47.5%、58.8%。在同一病变中HP阳性组p53、p21WAF1、PCNA、cyclinA阳性表达率高于HP阴性组,GC组有显著差异(P<0.05)。就1种基因的表达而言,HP阳性组各类病变之和与阴性组比较均有显著性差异(P<0.05)。胃癌中p21WAF1与p53蛋白表达呈负相关关系(P<0.01,γ=-0.598),PCNA与cyclinA蛋白表达呈正相关关系(P<0.01,γ=0.956)。结论p53突变及p21WAF1失活和PC-NA、cyclinA蛋白的高表达及HP感染共同参与胃癌的发生、发展。