牛BLG/hEPO和大鼠WAP/hEPO基因在家兔乳腺中的表达

将人红细胞生成素 (h EPO)基因组 DNA(g DNA)与 1.1kb牛 β-乳球蛋白 (BL G)基因的 5′端上游调控序列融合 ,构建了 p CMV- BL G- EPO- b GH poly A(p CBEA)乳腺定位表达载体。该载体与已构建的大鼠乳清酸蛋白 (WAP)基因 5′端上游调控序列和 h EPO融合基因 p WAP- EPO- WAP3′U TR(p WE3′)和 p CMV- WAP- EPO- b GH poly A (p CWEA )经脂质体包裹后 ,通过显微外科方法 ,经乳腺导管注入妊娠中后期家兔乳腺内 ,进行短暂表达。于家兔分娩后 1～ 2 5 d采奶 ,EL ISA检测乳汁中 EPO含量 ,3个载体均获得表达。表达水平从高到低依次为 p CWEA、p CBEA、p WE3′;表达量为 0 .116～ 0 .75 3μg/ L 。

凡纳滨对虾WAP基因重组表达及抗病功能分析

【目的】针对凡纳滨对虾白便病的危害现状,克隆其WAP基因并分析其组织表达特性及抗病功能,为凡纳滨对虾抗病药物开发提供参考依据。【方法】设计WAP基因特异性引物,用RT-PCR检测WAP基因在凡纳滨对虾血细胞、眼柄、鳃、肝胰腺、心脏、胃、肌肉、神经、肠、后盲囊和表皮等11种组织的表达分布情况;采用实时荧光定量PCR检测患白便病凡纳滨对虾鳃和肠道组织的WAP基因表达量;重组表达WAP蛋白,使用ELISA分析其与细菌多糖LPS(脂多糖)、PGN(肽聚糖)和LTA(脂磷壁酸)的结合能力。【结果】WAP基因在11个凡纳滨对虾组织均有表达,其中,以在血细胞中的表达量最高,在表皮、眼柄和肝胰腺的表达量表达较低;WAP基因在感染白便病凡纳滨对虾鳃和肠道组织的表达量显著高于健康凡纳滨对虾(P<0.05),分别为健康凡纳滨对虾的5.9258和1.5147倍;WAP融合蛋白与细菌多糖LPS、PGN和LTA具有直接结合作用,细菌多糖的结合能力表现为PGN>LPS>LTA。【结论】WAP基因与凡纳滨对虾抗病免疫功能密切相关,WAP融合蛋白在开发凡纳滨对虾抗白便病药物方面具有潜在应用价值。

融合启动子调控下的t-PA cDNA乳腺定位表达

由牛 β- Casein启动子与大鼠 WAP启动子融合构建了 t- PA c DNA乳腺定位表达载体 p SVL-β△ WAP- PA,以研究 t- PA乳腺定位表达的调控。结果表明 ,将表达载体 p SVL- βb- PA,p SVL- WAP- PA及 p SVL-β△ WAP- PA分别直接注入怀孕的家兔乳腺管中 ,溶圈试验显示 3种表达载体均能在家兔乳腺中表达 ,且以分娩后第 4天的乳汁中表达水平最高 ,分别为 390 ,430和 6 70 ng/ m L。证明 0 .6 kb的牛 β- Casein上游调控序列具有一定的定位表达调控能力。融合启动子较单纯的 β- Casein或 WAP启动子调控下的 t- PA c

多个顺式作用元件调控t-PAcDNA乳腺定位表达

由牛 β-酪蛋白 ( β-Casein)启动子与大鼠乳清酸蛋白 ( WAP)启动子融合及串联构建成 2个组织纤溶酶原激活剂 ( t-PA) c DNA乳腺定位表达载体 p SVL-βΔWAP-PA和 p SVL-WAPβ-PA。将这 2种表达质粒分别注入怀孕家兔乳腺导管中 ,溶圈试验结果显示 ,2种质粒均能在家兔乳腺中表达 ,且以分娩后第 5天的乳汁中表达水平最高 ,分别为 70 0 μg/ L和 50 0 μg/ L。本试验为进一步研究 t-PA基因乳腺定位表达调控和建立

串联启动子调控下的t-PAcDNA乳腺定位表达

由牛 β Casein启动子与大鼠WAP启动子串联构建了t PAcDNA乳腺定位表达载体pSVL WAPβ PA ,将 3种表达载体pSVL βb PA ,pSVL WAP PA及pSVL WAPβ PA分别注入怀孕家兔乳腺导管中 ,溶圈试验结果显示 ,3种表达载体均能在家兔乳腺中表达 ,且以分娩后第 4d的乳汁中表达水平最高 ,分别为 390 ,44 0 ,45 0 μg·L-1.本试验为进一步研究t PA基因乳腺定位表达调控和建立t

不同启动子调控下的t-PAcDNA乳腺定位表达

乳清酸蛋白 (WAP)和 β -酪蛋白 (β -Casein)是哺乳动物乳汁中的主要蛋白质 ,其基因 5′侧翼区常作为乳腺定位表达的调控序列。表达载体pSVL -WAP -tPA和pSVL - βb -tPA分别含 1.1kb的大鼠WAP启动子和 0 .6kb的牛β Casein启动子序列及t-PAcDNA。采用基因直接注射方法将 2种表达载体分别注入家兔乳腺中。溶圈试验结果显示 ,两种表达载体均能在兔乳腺细胞中得到表达 ,且以分娩后第 4天的乳汁中表达水平最高 ,分别为 45 0ng·mL-1和390ng·mL-1。为进一步研究t-PA基因乳腺定位表达调控和建立t-PA乳腺生物反应器奠定了基础。

大鼠WAP启动子指导人TPO在真核细胞中瞬时表达

目的构建以大鼠WAP启动子调控的人血小板生成素(TPO)真核表达质粒并进行瞬时表达,探讨TPO基因组中不同内含子对TPO表达影响。方法通过基因工程方法构建以大鼠WAP启动子调控的6种TPO真核表达质粒,并通过酶切和测序进行鉴定,将上述重组质粒分别在HC-11和COS-1细胞上转染48 h后,通过双抗体夹心ELISA定量分析转染上清中TPO表达。结果酶切及测序分析表明构建与设计相符,6种重组质粒在COS-1细胞和HC-11细胞中均获得表达,其表达水平从高到低依次为pTPOWE>pTPOWA>pTPOWD>pTPOWB>pTPOWC>pTPOWF,其中含有TPO IntronⅤ的重组质粒pTPOWE表达量最高,而含有TPO全基因组的重组质粒pTPOWF表达量最低。结论 IntronⅤ可能含有特殊增强TPO表达序列,而TPO基因组中可能存在抑制TPO高水平表达结构元件。

小鼠乳清酸蛋白上游调控序列的克隆及其指导下CAT基因在家兔乳腺中的表达

应用 PCR技术 ,从小鼠基因组中克隆了 1 .6 kb乳清酸蛋白 (WAP)基因 5′上游调控序列 ,经酶切和测序证实与已知序列基本一致。为了证实此调控序列能否指导外源基因在乳腺中的表达 ,将此序列与报告基因 CAT融合 ,构建了 p WAP- CAT- poly A乳腺定位表达载体 ,脂质体包裹后 ,经乳导管将其注入到妊娠中后期家兔乳腺中进行暂时表达。分别于家兔分娩后 1～ 1 0 d采奶 ,用 EL ISA检测乳汁中 CAT含量。结果表明 ,所构建的载体在家兔乳腺中能够表达 ,表达水平在家兔分娩后 1～ 5