全外显子家系测序在WDR35基因复合杂合变异导致SRPS-5胎儿产前诊断中的价值

目的探讨全外显子家系测序(Trio-WES)在诊断WDR35基因复合杂合变异导致短肋-多指综合征5型(SRPS-5)中的应用价值。方法收集1例引产儿产前诊断的临床资料,采用Trio-WES对引产儿皮肤组织及其父母外周血进行基因测序,采用SIFT、PolyPhen-2及Mutation Taster软件对筛选出的可疑变异进行生物危害性分析,并建立模型预测变异可能导致的蛋白结构变化。结果引产儿母亲孕22^(+3)周时的超声检查结果提示胎儿四肢长骨发育水平明显滞后,伴双侧肱骨、股骨弯曲,胸围小且胸腔狭窄,肋骨短且双肺受压变小。基因测序提示胎儿WDR35基因存在复合杂合变异,分别为父亲携带的c.799G>A/p.Val267Met杂合变异与母亲携带的chr2:20151176-20151245杂合缺失变异。检索Pubmed和HGMD数据库均未发现该变异相关报道,属WDR35基因的新变异,其中变异位点c.799G>A/p.Val267Met在多物种间高度保守,蛋白结构预测提示可能改变局部空间稳定性。结论WDR35基因缺陷可能是患儿长骨明显短且弯曲,短肋伴肺发育不良等症状的致病因素。Trio-WES可精确诊断胎儿期SRPS-5。

冠心病易感基因WDR35通过NF-κB通路调控内皮细胞的黏附

目的全基因组关联研究(GWAS)提示位于染色体2p24.1区域中的WDR35基因是冠心病的易感基因,但是目前WDR35参与冠心病调控的具体机制还不清楚,本研究从单核细胞与内皮细胞黏附的角度揭示WDR35对内皮细胞功能紊乱的调控。方法利用冠心病患者和健康对照人群外周血单个核细胞(PBMCs)样本以及低氧刺激的内皮细胞损伤模型分析WDR35表达水平的差异;在人血管内皮细胞中分别敲低和过表达WDR35,利用qPCR和蛋白印迹技术在mRNA和蛋白水平分别检测黏附相关基因的表达,利用荧光显微镜对荧光标记的与内皮细胞黏附的单核细胞拍照,并通过Image J软件计数以分析黏附能力的变化。结果冠心病患者PBMCs和低氧刺激的内皮细胞中WDR35表达相比对照组均显著下降。内皮细胞中敲低WDR35显著上调NF-κB p65磷酸化水平和黏附相关基因表达,同时促进单核细胞和内皮细胞的黏附,而过表达WDR35则显著下调NF-κB p65磷酸化水平并抑制黏附。结论WDR35通过影响NF-κB p65磷酸化水平和黏附相关基因表达而调控内皮细胞黏附,可能参与冠心病的发生发展。

慢性髓系白血病疾病进展相关基因的生物信息学分析与初步实验验证

本研究探讨慢性髓系白血病(CML)的疾病进展机制,为该疾病临床转归的评估及治疗选择提供新的分子标志物。从NCBI数据库GEO下载一组与CML疾病进展相关的基因芯片数据,利用生物信息学工具分析并得到与加速期(AP)和急变期(BC)相关的基因集,将这两组基因集进行信号通路分析和网络图谱分析得到与进展相关的关键基因和信号通路,并应用荧光定量PCR方法对其中的关键基因进行初步实验验证。结果表明,将AP相关基因和BC相关基因交叉比较,得到在AP和BC都有异常表达的9个基因;信号通路分析发现,整合素介导的细胞黏附,黏着斑细胞粘附以及细胞骨架调节在AP和BC始终发生异常;网络构建分析发现,关键节点的基因分别是MLLT4,WDR35和EPHB4。应用荧光定量PCR方法对疾病进展期和慢性期的患者进行比较发现,EPHB4在进展期的表达水平显著高于慢性期。结论:发现了与CML进展相关的9个基因,其中MLLT4,WDR35,EPHB4基因可能是导致CML进展的关键基因。