WIN55212-2通过调控mTOR/HIF-1α/PFKFB3信号通路抑制糖酵解并减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的:探究大麻素受体激动剂WIN55212-2(WIN)对脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)的影响,并探讨其通过糖酵解发挥作用的可能机制。方法:采用腹腔注射脂多糖(LPS)创建小鼠脓毒症ALI模型。将雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照(control)组、LPS组(腹腔注射10 mg/kg LPS)、LPS+WIN组(注射LPS前30 min腹腔注射1 mg/kg WIN)和LPS+WIN+MHY1485[哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化剂]组(LPS造模前1 d腹腔注射10 mg/kg MHY1485,并在造模前30 min腹腔注射1 mg/kg WIN和10 mg/kg MHY1485),每组6只。造模24 h后取材,计算肺指数;HE染色观察肺组织病理变化;ELISA检测肺组织炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-10表达水平,以及血清乳酸和乳酸脱氢酶A(LDHA)水平;Western blot检测mTOR/缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-双磷酸酶3(PFKFB3)信号通路相关蛋白水平。结果:相比于control组,LPS组小鼠肺指数增加,HE染色显示肺组织受损,肺组织中IL-10水平降低(P<0.05),IL-1β水平升高(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平升高(P<0.05),磷酸化mTOR(p-mTOR)、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平升高(P<0.05)。相较于LPS组,LPS+WIN组肺指数降低(P<0.05),HE染色显示肺组织受损减轻,肺组织IL-1β水平降低(P<0.05),IL-10水平升高(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平降低(P<0.05),p-mTOR、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平降低(P<0.05)。相较于LPS+WIN组,LPS+WIN+MHY1485组肺指数增加,HE染色显示肺组织受损,肺组织IL-1β水平升高(P<0.05),IL-10水平降低(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平升高(P<0.05),p-mTOR、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平升高(P<0.05)。结论:WIN55212-2可以减轻脓毒症小鼠ALI,其机制可能是通过调控mTOR/HIF-1α/PFKFB3信号通路,抑制糖酵解,减轻炎症反应。

大麻素WIN55,212-2抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖和侵袭迁移

目的研究大麻素WIN55,212-2(WIN)对SMMC-7721肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子机制。方法应用CCK-8法分析(0、1、5、10、20)μmol/L WIN对SMMC-7721细胞活力的影响;Hoechst33258染色荧光显微镜下观察各组细胞形态改变;异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白P53、P21、Bcl-2、Bax和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达;采用TranswellTM侵袭实验及划痕实验检测细胞侵袭、迁移的能力,Western blot法检测基质金属蛋白酶14(MMP-14)蛋白水平。结果 WIN抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,两者都具有剂量依赖性;WIN处理后的细胞,经Hoechst33258染色,可发现细胞核浓缩、破碎,引起明显细胞凋亡;凋亡相关蛋白P53、P21、Bax激活,抗凋亡蛋白Bcl-2水平下降;AKT、p-AKT、p-ERK水平下降,而ERK总蛋白无明显变化;与对照组比较,WIN处理后的SMMC-7721细胞侵袭和迁移的能力均显著降低,MMP-14蛋白水平也下降。结论 WIN能抑制SMMC-7721细胞增殖和诱导其凋亡,与WIN激活P53,抑制AKT、p-AKT、p-ERK表达有关。WIN通过下调MMP-14蛋白水平,抑制SMMC-7721细胞侵袭和迁移。

CB1受体激动剂WIN55212-2改善帕金森病运动并发症的实验研究

目的探讨CB1受体激动剂WIN55212-2对左旋多巴诱发的运动并发症的行为学及细胞学作用。方法通过6-OHDA立体定向注射至大鼠右侧前脑内侧束建立PD动物模型,成功的PD大鼠模型分别接受左旋多巴/苄丝肼(50mg/kg加12.5mg/kg苄丝肼,每天2次)+溶剂、左旋多巴/苄丝肼+WIN55212-2(1mg/kg)腹腔注射,共持续21d。评估用药后大鼠的旋转反应时间、剂峰旋转圈数变化和关期发生率;采用Western blot方法检测纹状体信号转导蛋白DARPP-32(Thr75)和ERK1/2(Thr202/Tyr204)的磷酸化表达。结果长期联合应用WIN55212-2和左旋多巴,缓解了左旋多巴单独用药所致的PD大鼠旋转反应时间缩短、剂峰旋转圈数增加的趋势,并明显降低关期发生频率。WIN55212-2与左旋多巴合用显著降低了纹状体内DARPP-32(Thr75)的磷酸化;但未使ERK1/2磷酸化表达降低至对照组水平。结论激动CB1受体可能有益于预防帕金森病运动并发症。

大麻素受体激动剂WIN55,212-2联合金诺芬对人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响

目的探讨大麻素受体激动剂WIN55,212-2(WIN)联合金诺芬(AF)对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步研究。方法分别用5μmol/L WIN、0.25μmol/L AF、5μmol/L WIN联合0.25μmol/L AF处理Hep G2细胞24 h和48 h后,MTS法检测细胞活力;采用Annexin V-FITC和PI双染色法并通过流式细胞仪分析细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bip、ATF4、PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)表达的变化。分别用5μmol/L WIN联合0.25μmol/L AF、Z-VAD-FMK以及Z-VAD-FMK预处理1 h后再用5μmol/L WIN联合0.25μmol/L AF处理Hep G2细胞24 h,Western blot检测蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的变化。结果与两药单独使用相比,WIN联合AF明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,可以引起Bcl-2蛋白表达水平下调,内质网应激反应相关蛋白Bip、ATF4蛋白表达水平上调,以及活化Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9,引起PARP蛋白的切割。加入Caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK处理细胞后,能部分逆转联合用药的细胞凋亡比例。结论大麻素受体激动剂WIN联合AF能有效诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与Bcl-2表达下调、内质网应激反应和Caspase系统活化相关。

大麻素受体激动剂WIN55,212-2抑制脑缺血再灌后胶质瘢痕的形成

脑缺血再灌注后出现的胶质瘢痕,主要是由增殖的激活星形胶质细胞构成。研究证实胶质瘢痕不利于神经再生,由其构成的物理化学性屏障一方面会阻碍轴突再生,另一方面由激活星形胶质细胞产生的神经发育抑制因子也会阻碍中枢神经系统功能的恢复。研究表明内源性大麻素对星形胶质细胞增殖具有调控作用。为研究脑缺血再灌注损伤后外源性大麻素受体激动剂WIN55,212-2对胶质瘢痕的影响,本文使用大鼠中动脉闭塞模型,通过免疫组织化学法对样本中的激活星形胶质细胞标记物Vimentin、星形胶质细胞标记物GFAP、硫酸软骨素蛋白聚糖标记物Neurocan、以及Notch-1信号通路配体Jagged-1分子的表达进行检测。为研究药物的作用靶点,本文联合使用了大麻素Ⅰ型受体拮抗剂rimonabant。结果表明:WIN55,212-2在大麻素Ⅰ型受体的介导下,通过减少星形胶质细胞的增殖,显著降低激活星形胶质细胞上Jagged-1的表达水平,抑制了胶质瘢痕的形成。

大麻素(WIN55,212-2)对高眼压家兔模型降眼压作用的研究

目的评价大麻素(WIN55,212-2)滴眼液在卡波姆诱导的兔慢性高眼压模型中的降压作用。方法人工诱导兔慢性高眼压模型。取右眼高眼压兔24只,随机分为A、B、C3个组,每组8只。右眼结膜囊内分别滴入0.125%大麻素滴眼液、0.5%噻吗心胺滴眼液及生理盐水,用药后每日测眼压1次。任选8只左眼为D组作空白对照。结果用药1周后眼压大麻素组为用药前的69%,噻吗心胺组为78%;用药3周后眼压大麻素组为用药前的45%,噻吗心胺组为60%。各组间最大降眼压幅度差异有统计学意义(P<0.01)。结论0.125%大麻素滴眼液点眼降眼压作用确定,与0.5%噻吗心胺比较,持续时间长,下降幅度大。

非选择性大麻素受体激动剂WIN55,212-2对慢性青光眼兔模型玻璃体谷氨酸浓度的影响

目的:探讨大麻素(WIN55,212-2)点眼治疗是否可以抑制慢性青光眼兔模型玻璃体谷氨酸浓度的增高。方法:家兔15只随机分为正常对照组,高眼压组和大麻素治疗组每组均5只10眼。除正常对照组以外均予前房注射复方卡波姆制成慢性青光眼模型。成功造模4d后,高眼压组用生理盐水点眼,大麻素治疗组用1.25g/L的大麻素滴眼液点眼。治疗4wk后取材,检测玻璃体谷氨酸浓度。结果:高眼压组的玻璃体谷氨酸浓度明显高于正常对照组,差异有统计学意义(高眼压组vs正常对照组,P<0.05),大麻素治疗组与正常对照组比较差异无统计学意义(大麻素治疗组vs正常对照组,P>0.05)。结论:局部应用WIN55,212-2可以使慢性青光眼兔模型玻璃体谷氨酸浓度降低。

大麻素WIN55,212-2对裸小鼠肝癌移植瘤及PPARγ表达的影响

目的:探讨大麻素WIN55,212-2(WIN)对裸小鼠肝癌移植瘤及过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、c-myc表达的影响。方法:采用5 mg/kg的WIN对荷瘤裸小鼠进行瘤周皮下注射干预15 d,每3天测量1次瘤体体重和体积,计算肿瘤体积和抑瘤率。荧光定量PCR和Western blotting测定Hep G2移植瘤中PPARγ和c-myc的表达情况。结果:WIN对Hep G2细胞移植瘤具有抑制作用,抑瘤率为66.00%,荧光定量PCR结果显示WIN抑制Hep G2细胞移植瘤c-myc在mRNA水平的表达,促进Hep G2细胞移植瘤PPARγ在mRNA水平表达。Western blotting结果显示WIN抑制Hep G2细胞移植瘤c-myc在蛋白水平的表达,促进Hep G2细胞移植瘤PPARγ在蛋白水平表达。结论:WIN能够抑制Hep G2细胞移植瘤的生长和c-myc的表达,并上调PPARγ的表达。

WIN55,212-2对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨大麻素（CB）受体激动剂WIN55，212-2对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法：采用大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）致局灶性脑缺血模型。将50只雄性SD大鼠随机分为5组：对照组（Con组）于MCAO前30min腹腔注射生理盐水0．3ml；WIN55，212-2组（WIN1～3组）于MCAO前30min腹腔注射WIN55，212-20．3，1和3mg／kg；DMSO组于MCAO前30min腹腔注射二甲基亚砜（DMSO）0．3ml。观察MCAO120 min再灌注24h后神经功能评分（NFS）和脑梗死容积百分比。结果：与DMSO组和Con组比较，WIN55，212-2组大鼠NFS明显升高（P〈0．05），脑梗死容积百分比明显减小（P〈0．05）。结论：CB受体激动剂WIN55，212-2对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用，并具有一定的剂量相关性。

大麻碱受体激动剂WIN55212-2与依西美坦协同抗肿瘤作用的发现

目的发现与大麻碱受体激动剂甲磺酸西地那非(WIN55212-2)具有协同抗肿瘤活性的药物,为提高肿瘤患者生活质量提供潜在的药物联合策略。方法采用肿瘤细胞增殖和活力检测的高通量测试方法,在3个大麻碱受体1(CB1R)高表达组织的肿瘤细胞系HepG2、DU145和HCT-8,筛查CB1R受体激动剂WIN55212-2分别与25种抗肿瘤药物联合使用时的抗肿瘤活性,对于初步显示有协同的药物联合再通过集落形成实验、3D肿瘤球增殖抑制试验进行确证。在此基础上,采用流式细胞仪检测协同有效的药物联合对细胞凋亡和周期分布的影响。结果发现3种药物在与WIN55212-2组合使用时显示有一定的协同抗肿瘤活性,其中依美西坦(exemestane)与WIN55212-2联合协同效果最佳,并在集落形成和3D肿瘤球增殖抑制试验中表现出浓度依赖性的协同抗肿瘤活性(联合指数CI<1)。与exemestane单用相比,exemestane与WIN55212-2联用显著增加HepG2细胞凋亡率(P<0.01),并引起HepG2细胞发生G2/M期阻滞。结论本研究首次发现将exemestane与WIN55212-2联用在HepG2细胞上具有协同抗肿瘤活性,这可能与其促进细胞凋亡和诱导细胞周期阻滞有关。

大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞前列腺素E_2表达的影响

目的研究大麻素WIN55,212-2对体外培养的牛眼小梁细胞前列腺素E2(PGE2)表达的影响,从而探讨其降眼压机制。方法采用组织块培养法对牛眼小梁细胞进行原代培养,取传3代的细胞运用酶联免疫吸附(ELISA)法测定不同浓度大麻素WIN55,212-2作用后细胞上清液中PGE2水平的变化;运用RT-PCR方法检测不同浓度大麻素WIN55,212-2作用后PGE2mRNA在小梁细胞内的表达水平。结果细胞上清液中的PGE2水平与细胞内PGE2mRNA水平随大麻素浓度变化呈剂量依赖性升高。结论一定剂量的大麻素可以促进小梁细胞分泌PGE2,从而达到降低眼压的目的 。

大麻素WIN55-212-2对脑出血大鼠皮质内PKAC-β、c-Fos及BDNF表达量的影响(英文)

目的:探讨WIN55-212-2对大鼠局灶性脑出血后大脑皮质内PKAC-β、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和c-Fos mRNA和蛋白质表达的影响。方法:利用VII型胶原酶制作脑出血模型,半小时后腹腔注射WIN55-212-2。实验动物均在术后24h取出脑组织,采用半定量RT-PCR检测大鼠脑皮质内蛋白激酶A(PKAC-β)、c-Fos和BDNF mNRA表达量;采用Western blotting检测PKAC-β和BDNF的蛋白表达量;采用免疫组化方法定位PKAC-β、c-Fos和BDNF蛋白在神经细胞的表达。结果:WIN55-212-2能明显改善脑出血的神经缺失症状,并上调脑出血侧皮质内BDNF和c-Fos的表达,但是抑制PKAC-β的表达。免疫组化结果显示PKAC-β、c-Fos和BDNF蛋白分别在神经元胞膜上、神经元的细胞核上或胶质细胞的胞质中表达。结论:WIN55-212-2不仅可以通过上调转录因子c-Fos mRNA从而增加BDNF的表达量,还可能通过抑制PKA诱导BDNF的表达,发挥神经保护作用。

WIN55,212-2重复预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨大麻素受体激动剂WIN55,212-2重复预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法将50只雄性SD大鼠随机分为5组(n=10):对照组和二甲基亚砜(DMSO)组分别腹腔注射生理盐水和DMSO0.3ml,1次/d,连续5d;WIN55,212-2预处理组(包括WIN1、WIN3、WIN5组)分别腹腔注射WIN55,212-21mg/kg,1次/d,重复给予1、3、5d。各组动物均在最后1次预处理后24h采用大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)法建立短暂局灶性脑缺血模型,分别在MCAO后24、48、72h进行神经功能评分(NFS),并取脑组织切片行2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色,计算脑梗死容积百分比。结果WIN55,212-2预处理组(WIN1、WIN3、WIN5组)大鼠MCAO后24、48、72h的NFS明显高于DMSO组和对照组(P<0.05),脑梗死容积百分比明显低于DMSO组和对照组(P<0.05)。WIN5组大鼠NFS明显高于脑梗死容积百分比明显低于WIN1组和WIN3组(P<0.05),而WIN1组与WIN3组的NFS和脑梗死容积百分比均无显著性差异(P>0.05)。结论随着WIN55,212-2预处理次数的增加,其脑保护作用有所增强。

非选择性大麻素受体激动剂WIN55，212—2对心肺复苏后大鼠体内炎症因子水平改善及预后的影响

目的明确非选择性大麻素受体激动剂WIN55，212—2对心肺复苏后大鼠体内炎症因子水平及预后的影响，探讨可能的机制。方法30只SD大鼠分别诱导室颤，持续6min后开始机械胸外心脏按压，8min后进行电除颤。成功复苏后30min，动物被随机分为3组：①药物处理＋正常温度组（WIN＋Normo）；②药物处理组（WIN）；③对照组。药物组与对照组分别给予WIN55，212—2和生理盐水，按照1．0mg／（kg·h）速率静脉滴注给药。所有动物的环境温度均保持相同，药物处理＋正常温度组采用一个额外的加热灯泡使得该组和对照组体温维持在（37±0．2）℃。监测复苏后4h各组大鼠白细胞介素-6（IL-6）以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平，并记录复苏后72h各组动物的存活情况。结果药物处理组大鼠IL-6（98．40±8．80）pg／mL以及TNF-α（40．36±9．21）pg／mL的水平较对照组[（120．30±15．20）pg／mL和（68．29±9．58）pg／mL]及药物处理＋正常温度组[（118．50±16．60）pg／mL和（64．33±10．19）pg／mL]明显下降，大鼠神经系统缺陷评分（NDS）及存活率较另外两组明显升高（P〈0．05）。结论在大鼠心肺复苏模型中，静脉注射WIN55，212—2能够降低IL-6与TNF-α的水平，并改善复苏后NDS和72h存活率。但当该药物产生的低温作用消失时，其对于大鼠体内炎症因子及预后的影响也随之明显减弱。故WIN55，212—2所致的心肺复苏后保护作用可能与其产生的降温作用有关。

WIN55,212 - 2 对肝癌细胞 BEL - 7402 增殖和凋亡的影响

目的探讨大麻素WIN55,212-2(WIN)对肝癌细胞BEL-7402增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步研究。方法将细胞分成对照组和WIN处理组,处理细胞后,利用MTT法分析WIN对BEL-7402细胞增殖的影响;DAPI染色分析各组细胞中细胞核的形态学改变;流式细胞术检测各实验组的细胞凋亡率;利用荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位的变化;Western blot检测WIN处理细胞后Bcl-2蛋白的表达;分光光度法检测Caspase-3、-8和-9的活性。结果WIN抑制了BEL-7402细胞增殖并诱导其凋亡,两者都具有剂量依赖性;WIN处理细胞后,Caspase-3、-8和-9活性总体上呈时间依赖性升高,而且Bcl-2蛋白表达下降。结论 WIN能抑制BEL-7402细胞增殖和诱导其凋亡,WIN诱导的BEL-7402细胞凋亡可能与线粒体途径和死亡受体途径都有关。这些结果为应用WIN来治疗肝癌奠定了一个基础。

WIN55，212-2在心肺复苏后对神经细胞凋亡的作用

目的：探讨WIN55，212-2药物性低温在心肺复苏后对神经细胞凋亡的作用。方法健康SD大鼠经食道直流电刺激建立心脏骤停模型。成功诱导后5 min行心肺复苏，恢复自主循环的大鼠存活30 min后，随机（随机数字法）分为3组（n＝10／组）： WIN55，212-2组（W组， WIN55，212-2，1 mg／（kg· h）、常温对照组：等体积的5％DMSO＋37℃（NT组）、 WIN55，212-2＋37℃组（W＋NT组， WIN55，212-2，1 mg／（kg· h）；用药时间维持4 h后， WIN55，212-2组复温2 h达37℃，观察ROSC后3组大鼠72h内的存活情况及神经功能评分。相同方法再次建立上述3组动物模型，分别于24 h、48 h、72 h在各组中随机选取5只大鼠，通过 HE 染色法观察脑组织形态学变化以及通过TUMEL法观察脑组织海马CA1区神经元细胞凋亡情况。结果 W组大鼠的体温在4 h内逐渐由37℃降到34℃。 W组大鼠的累积生存率明显高于W＋NT组及NT组（ P＝0.02）。 W组大鼠的神经功能评分较W＋NT组和NT组明显改善（ P＜0.05）。 W组大鼠神经细胞病理损伤以及神经细胞凋亡情况较其余两组少。 W＋NT组大鼠的病理损伤及凋亡情况介于两者之间。结论 WIN55，212-2在心肺复苏后诱导大鼠低温，延长存活时间，改善神经系统功能。其作用可能与WIN55，212-2减轻脑组织病理损伤、减少神经细胞凋亡有关。

大麻受体激动剂WIN-55,212-2对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖和凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨。方法:将细胞分成对照组、不同剂量大麻受体激动剂WIN-55,212-2(WIN)处理组。MTT法测定WIN对HepG2细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法检测HepG2细胞凋亡DNA片段,流式细胞术检测分析各组细胞凋亡率变化,Western blot分析各组细胞caspase-3和c-myc的蛋白表达,分光光度法检测caspase-3、8、9的活性。结果:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长和c-myc的蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡,上述效应具有剂量依赖性。而且WIN可能通过诱导细胞caspase-3的蛋白表达和激活caspase-3、8、9活性进而诱导肝癌细胞凋亡。结论:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,并与caspases和c-myc的蛋白表达相关。

WIN55212—2对百草枯中毒小鼠肺损伤的保护作用

目的 探讨大麻素受体激动剂WIN55212-2 对百草枯（paraquat, PQ）中毒模型小鼠肺损伤的保护作用。方法 健康成年雄性C57BL/6 小鼠35 只，随机（ 随机数字法） 分为4 组：百草枯中毒组（PQ 组，n=10），PQ＋WIN55212-2 1 mg 干预组（WIN 1 mg 组，n=10），PQ＋WIN55212-2 2 mg 干预组（WIN 2 mg 组，n=10），对照组（control 组，n=5）。PQ 组、WIN 1mg 组、WIN 2 mg 组建立百草枯中毒模型，于实验第1 天和第3 天腹腔注射PQ 20 mg/kg。WIN 1mg 组和WIN 2 mg 组分别于PQ 染毒前1 h 按1 mg/kg 和2 mg/kg 的浓度经腹腔注射WIN55212-2（含Tween 80 助溶剂），PQ 组和control 组注射等容量的生理盐水和Tween 80 液。从第2 周开始，干预药物每周注射两次。急性期（14 d）随机处死PQ 组、WIN 1 mg 组、WIN 2 mg 组各5 只小鼠，对照组处死3 只，取血标本，离心得血浆，取肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）和肺组织。剩余存活小鼠均在28 d 时处死，再次留取上述组织标本。肺组织行HE 染色、Masson 染色，观察PQ 中毒后小鼠的肺组织变化。酶联免疫吸附法（ELISA）测定急性期小鼠血浆和BALF中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）及慢性期血浆和BALF 中TNF-α 和转化生长因子β（TGF-β）的含量变化。结果 急性期：PQ 组、WIN 1 mg 组、WIN 2 mg 组小鼠肺组织病理切片均呈现弥漫性炎症，予WIN55212-2 干预后炎症有所改善，尤以WIN 1 mg 组更为明显。PQ 组、WIN 1 mg 组、WIN 2 mg 组，对照组BALF 中IL-6 水平（U/L）分别为1 024.77±124.74、620.48±99.76、823.29±157.88、180.42±20.22 ；WIN 1 mg 组和WIN 2 mg 组均较PQ 组下降，且差异有统计学意义（P=0.021，P=0.016），但两干预组间差异无统计学意义（P=0.114）。急性期BALF和血浆中TNF-α 水平与上述情况相似。慢性期：PQ 组、WIN 1 mg 组、WIN 2 mg 组小鼠肺组织HE 及Masson 染色可见明显纤维化，予WIN55212-2 干预后可见炎症情况有所改善，以WIN 1 mg组更为明显。慢性期PQ 组、WIN 1 mg 组、WIN 2 mg 组小鼠BALF 中TNF-α 水平（U/L）分别为321.64±50.54、260.23±48.19、278.89±29.40、89.76±10.87，WIN 1 mg 组与对照组及WIN 2mg 组间差异有统计学意义。相似的情况可见于慢性期血浆TNF-α，但TGF-β 未见这种差异。结论 小剂量WIN55212-2 可以改善PQ 中毒小鼠的一般状况，降低PQ 中毒小鼠炎症和纤维化相关细胞因子水平，WIN55212-2 可能对百草枯中毒模型小鼠肺损伤具有保护作用。

Effects of WIN 55,212-2 on I_K Current in Cultured Trigeminal Ganglion Neurons of Rat

Summary: To investigate the effects of WIN 55,212-2 on I K in cultured rat trigeminal ganglion (TG) neurons, whole-cell patch clamp techniques were used to record the I K before and after WIN 55,212-2 perfusion at different concentrations. 30 μmol/L WIN 55,212-2 markedly (35 7 %± 7 3 %, P<0.01, n=8) inhibited I K currents, and the currents were partially recovered after washing. 30 μmol/L WIN 55,212-2 also induced a significant depolarizing shift in conductance-voltage parameters (control: V 0 5=10 43 ± 4.25 mV, k=16 27±3 86; WIN 55,212-2: V 0.5=24.71±3.91 mV, k =16.69±2.75; n = 8, P<0.01 for V 0.5). 0.01 μmol/L WIN 55,212-2 slightly (27.0 %± 7.9 %, P<0.05, n=7) increased I K currents, but had no significant change in conductance–voltage parameters (control: V 0.5=10.74±5.27 mV, k=17.33±2.96; WIN 55,212-2: V 0.5=11.06±2.05 mV, k=19.69±6.60; n=7, P>0.05 for V 0.5 and k). These results suggested that WIN 55,212-2 has dual action, which might be through different receptors.

大麻受体激动剂WIN对白血病K562细胞增殖和诱导凋亡作用的研究

目的探讨大麻受体激动剂WIN-55,212-2(WIN)对白血病K562细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法将细胞分成对照组和不同剂量大麻受体激动剂WIN用药组。CCK-8测定WIN对K562细胞增殖的影响;DAPI染色观察细胞核形态变化;JC-1分析线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化;Western印迹法分析Bax、Bcl-2及C-myc蛋白的表达。结果与对照组相比较,5、10、20μmol/L的WIN处理K562细胞24、48 h后,增殖抑制作用明显且具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。DAPI染色和线粒体膜电位检测结果显示,K562细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率升高。WIN处理24 h后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性均增加(P<0.05)。Western印迹法显示,Bax蛋白表达增加,C-myc、Bcl-2蛋白表达下降。结论大麻受体激动剂WIN能抑制白血病K562细胞增殖,并诱导凋亡,其机制可能通过上调Bax蛋白表达,下调C-myc、Bcl-2蛋白表达,以及促使线粒体跨膜电位下降,激活Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白而实现。