水通道蛋白8在人羊膜上皮细胞WISH株的表达和定位

目的:研究水通道蛋白8(AQP8)在人羊膜上皮细胞WISH株的表达和定位,羊水膜内吸收的分子机制。方法:培养人羊膜上皮细胞WISH株,采用Western blot技术检测WISH细胞AQP8蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测WISH细胞AQP8 mRNA的表达,免疫荧光组织化学方法检测WISH细胞上AQP8的分布。结果:WISH细胞能表达较低水平的AQP-8 mRNA,WISH细胞AQP8蛋白在34ku处有一明显的糖基化条带。在细胞内微粒体膜和细胞膜上均检测到标记AQP8的荧光。结论:人羊膜上皮细胞WISH有AQP8的蛋白和mRNA表达,AQP8可能介导了羊水膜内吸收。

DNA合成抑制实验检测烹调油烟对人羊膜成纤维细胞WISH的致突变性研究

目的与方法 :本文应用DNA合成抑制 (DSI)实验对居民家庭烹调油烟进行了致突变性研究。结果 :实验结果表明 ,不同浓度的烹调油烟凝聚物均可见到DNA合成抑制 ,具有明显的剂量—效应关系。结论 :实验证实 。

H5亚型禽流感病毒HA基因在WISH细胞中的瞬时表达

在WISH细胞中,对H5亚型禽流感病毒HA基因进行了瞬时表达的研究。首先构建了真核表达质粒pVAX-H5HA,通过酶切和PCR筛选阳性克隆后测序。然后将重组表达质粒以脂质体介导法转染WISH细胞,通过RT-PCR在转录水平检测目的基因的表达,间接免疫荧光检测目的蛋白。结果表明,HA基因在WISH细胞中进行了表达。

两种细胞株检测重组犬α-干扰素效价的比较

本研究采用人羊膜细胞WISH株和人喉癌上皮细胞Hep-2株,以微量细胞病变抑制法(CPE抑制法)对同批次的8组重组犬α干扰素样品进行了效价检测,以中国药品生物制品检定所使用的标化重组人α干扰素为标准,将在两株细胞上所测结果进行比较。其检测的结果具有很好的相关性(r=0.9976,p>0.05),并且重复性较好。用结晶紫染色法评价干扰素效价能够准确地反应细胞的状态,所得结果准确、客观。表明Hep-2与WISH细胞测定结果没有差异,该方法可用于重组犬干扰素制品的效价测定。此外本研究还测定了最适试验条件如细胞浓度、接种用病毒滴度、加样方法等。

天花粉蛋白引起敏感细胞膜上G蛋白激活的初步研究

天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)是一种单链核糖体失活蛋白,具引产、抗肿瘤、抗HIV等多种生物学功能。天花粉蛋白专一性杀伤敏感细胞的机制一直未被研究清楚。本文首次以生物分子相互作用分析(BIA)证明在天花粉蛋白敏感的细胞膜上存在着能与天花粉蛋白专一结合的组分。我们进一步利用[^(35)S]GTPγS结合实验发现天花粉蛋白能够激活敏感细胞膜上的G蛋白,而对不敏感细胞没有相应的G蛋白激活。这些结果表明了在敏感细胞膜上天花粉蛋白特异受体的存在。

三株不同细胞用于人干扰素效价测定的研究

本文采用细胞病变抑制法(微量法),用人羊膜细胞WISH株、FL株及人上皮细胞HEP2对3批精制人白细胞干扰素及12批粗制人白细胞干扰素进行了效价的检测,以中国药品生物制品检定所使用的测定细胞人羊膜细胞WISH株为标准,将HEP-2及FL细胞所测结果与其进行比较.经统计学处理,P>0.5,表明HEP-2及FL与WISH细胞测定结果没有差异,可用于人干扰素的效价测定.实验选用了EDTA作为细胞的消化剂,可高压灭菌、配制方便,适用于生产检测.

干扰素生物活性两种测定方法的比较研究

目的:摸索改进的结晶紫染色法与噻唑蓝(MTT)比色法中哪一种方法能够提高干扰素的生物学活性测定(细胞病变抑制法)结果的准确性。方法:比较在干扰素的生物学活性测定后期,采用先结晶紫染色乙醇脱色然后比色的方法(方法一)和采用加入MTT后裂解比色的方法(方法二),经过多次比较证明哪一种方法测定结果的准确性更高。结果:采用方法二测得的多次结果之间产生的偏差较小,单次结果的可信度较高,单次测定结果的相关系数r值较大。结论:采用MTT比色法比改进的结晶紫染色法更适合应用于干扰素的生物学活性测定,可提高结果的准确性。

地塞米松对人羊膜上皮细胞Wish细胞株水通道蛋白8表达的影响

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)对人羊膜上皮细胞Wish细胞株水通道蛋白8 (aquaporin 8,AQP8)表达的影响。方法培养人羊膜上皮细胞Wish株,应用1μg/mL,10μg/mL,20μg/ mL,40μg/mL,100μg/mL地塞米松培养液[实验组(1μg/mL组、10μg/mL组、20μg/mL组、40μg/mL组、100μg/mL组)]孵育48 h;对照组为未加地塞米松处理的人羊膜上皮细胞Wish株,采用免疫荧光细胞化学法(immunofluoresecnce chemistry)、RT-PCR法、Western blot法,检测在不同浓度地塞米松作用下,Wish细胞AQP8 mRNA及蛋白表达水平。结果人羊膜上皮细胞Wish株可见。AQP8 mRNA及蛋白表达。10μg/mL,20μg/mL,40μg/mL,100μg/mL地塞米松对人羊膜上皮细胞Wish株AQP8 mRNA及蛋白表达,具有增强性调节作用。其中,40μg/mL组的AQP8 mRNA及蛋白表达水平达峰值,与对照组比较,差异有显著意义(P<0.05)。结论地塞米松可增加羊膜上皮细胞AQP8的表达,从而为治疗羊水异常提供新的思路。

黄芪诱导人羊膜上皮细胞WISH细胞株向神经细胞分化并抑制Notch1表达及促进细胞存活

本研究旨在探讨黄芪(astragalus)对人羊膜上皮细胞WISH细胞株向神经细胞分化、Notch1基因表达和细胞活力的影响。将人羊膜上皮细胞WISH细胞株分为3组,即黄芪诱导组(设立4个浓度亚组)、全反式维甲酸(alltransretinoic acid,RA)组和对照组。分别采用化学诱导剂RA和黄芪注射液诱导WISH细胞株分化为神经细胞,在诱导前后,应用免疫细胞化学方法染色鉴定神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、微管相关蛋白2(microtubule associated protein2,MAP-2)、神经干细胞巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进一步鉴定细胞多能性基因Oct4、Notch1、Hes1、神经干细胞标记物Nestin基因和神经元标记物NSE,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞活力。倒置显微镜观察显示,WISH细胞株分别经RA诱导12h后、黄芪诱导24h后,由胞体伸出较长的轴突样和树突样突起,且有分支。诱导48h时,100μL/mL黄芪诱导组NSE和MAP-2阳性率低于RA诱导组(P<0.05),细胞活力较RA组高(P<0.05),两诱导组NSE、MAP-2和GFAP阳性率均高于对照组;而黄芪诱导组Nestin和GFAP阳性率高于RA组(P<0.05),两诱导组Nestin阳性率均低于对照组。同时RT-PCR检测到黄芪(100mL/mL)和RA诱导后多能基因Oct4、Notch1、Hes1表达低于对照组,而NSE表达增多。以上结果提示,黄芪和RA都可诱导WISH细胞株在体外分化为神经元样细胞,且黄芪于100μL/mL浓度时效果较好,黄芪诱导对细胞毒性较小,诱导过程中能抑制Notch1信号分子的表达。

流行性出血热病毒在人革膜传代细胞内的生长繁殖

本文应用人羊膜传代细胞(Wish细胞)对流行性出血热病毒(EHFV)的敏感性进行了试验,用EHFV武株及76118、A9、R22、R4、陈株等5个代表株接种Wish细胞。结果Wish细胞感染EHFV后第1代第8～10天即可查见明显的特异性荧光,荧光光强度随代数和时间而增加,TCID50为10~4～/10~5ml。并用荧光阻断试验和双份血清证实在Wish细胞内繁殖的病毒为EHFV。此结果为EHF病原学研究提供了新的敏感细胞株。