SB203580和WP631对照射后肺成纤维细胞内Smad通路信号转导的影响

背景与目的:放射性肺纤维化以成纤维细胞增殖和细胞外基质过度沉积为特征。转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGFβ1)是放射性肺纤维化发生发展的"开关"性分子并被作为治疗的靶分子,因此阻断TGFβ1的信号转导可能减轻肺纤维化。本研究检测Smad通路抑制剂SB203580和WP631对照射后人肺成纤维细胞(human lung fibroblast,HLF)中信号转导的影响并探讨其效应。方法:将HLF用25"mol/LSB203580和5nmol/LWP631预处理后,再应用3Gy60Coγ射线照射和10"g/LTGFβ1刺激,通过凝胶阻滞电泳(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)、免疫印迹、免疫组织化学及细胞周期流式细胞仪检测等方法检测转录因子SP1和AP1活性的变化、Smad3,4,7和p-Smad3及Ⅰ型胶原和Ⅰ型组织纤溶酶原激活物抑制剂(type Ⅰ plasminogen activator inhibitor,PAI-1)的表达变化及细胞周期的变化。结果:经3Gyγ射线照射及TGFβ1刺激后,与未经预处理的HLF相比,应用SB203580或WP631预处理的HLF出现G2-M期阻滞,S期细胞显著减少。SB203580预处理可减少HLF中P21WAF1/CIP1和p-Smad3的表达,而WP631预处理可减少HLF表达PAI-1,抑制转录因子SP1和AP1的活化。结论:SB203580和WP631通过阻断TGFβ-Smad通路的信号转导,抑制#射线和TGF!1作用所导致的HLF过度增殖和P21WAF1/CIP1及PAI-1表达增多。