WST-1细胞增殖试剂在抗肿瘤药物筛选中的应用

目的采用W ST-1试剂评价姜黄素(curcum in,CU)和吲哚-3-甲醇(indole-3-carbinol,I3C)两种植物天然生物活性物质在体外抑制人鼻咽癌细胞株(CNE1)增殖的效果。方法体外培养人鼻咽癌细胞至对数生长期,分别加入CU和I3C,CU的终浓度分别为1.7×10-3、8.5×10-3、42.5×10-3g/m l,I3C的终浓度分别为3.0×10-3、15.0×10-3、45.0×10-3g/m l。继续培养48h后每组各取6孔加入一定量的W ST-1试剂,然后测定OD570值,计算细胞相对增殖度RGR1,每组再各取6孔,加入5g/L结晶紫罗兰染色3m in后,加入10g/L十二烷基磺酸钠,测定OD588值。结果W ST-1法能以OD值变化反映天然活性成份对肿瘤细胞的抑制程度,与国家标准所规定的仲裁法结果相关性较好。结论W ST-1法是一种可以应用于细胞毒性试验和药物抗肿瘤作用筛选和评价的方法。

MTT法和水溶性四氮唑(WST-1)法检测中波紫外线照射HaCaT细胞后活力的比较

目的:观察中波紫外线照射后HaCaT细胞活力的变化并探讨水溶性四氮唑(WST-1)法检测的适用性。方法:将HaCaT细胞分为对照组(假照射组)、300J/m2、600J/m2、900J/m2紫外线照射后24h组(每组6个样本)。600J/m2紫外线照射后4h组、8h组、12h组、24h组、48h组、72h组(每组6个样本)。血球计数板计算HaCaT细胞数量。四甲基偶氮唑盐(MTT)法和水溶性四氮唑(WST-1)法活性测定HaCaT细胞活性。结果:MTT法显示300J/m2、600J/m2、900J/m2紫外线照射HaCaT细胞24h后光密度(OD)值明显较0J/m2组低;WST-1法各组OD值明显比0J/m2组低。MTT法显示600J/m2紫外线照射HaCaT细胞8h、12h、24h、48h、72h后OD值明显比0J/m2组低。WST-1法显示600J/m2紫外线照射HaCaT细胞4h后OD值较0J/m2组低;600J/m2紫外线照射HaCaT细胞8h、12h、24h、48h、72h后OD值明显比0J/m2组低。WST-1法的OD值与细胞计数、MTT法OD值呈正相关。结论:随着紫外线剂量的加大和照射后时间延长,HaCaT细胞数量减少,细胞的活力下降,WST-1代谢活性亦降低,呈时间和剂量依赖性。HaCaT细胞可对WST-1进行代谢,适用于该细胞增殖研究。

MTT、MTS、WST-1在细胞增殖检测中最佳实验条件的研究

目的:探讨MTT、MTS、WST-1三种四唑盐在细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法:取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞,用10%胎牛血清DMEM培养液制成不同浓度的细胞悬液加入96孔培养板中培养24h,分别加入三种试剂后在450nm、492nm和630nm波长处测定OD值,根据不同波长所测OD值的大小确定三种试剂的最佳实验波长。根据细胞浓度与OD值关系曲线确定三种试剂各自的最适细胞浓度。取最适浓度的B16细胞分别加入三种试剂在0.5h、1h、2h和4h四个不同时间点测定吸收值,根据OD值确定最佳的检测时间。结果:MTT、MTS法的最佳波长为492nm,WST-1法为450nm。MTT的最适细胞接种浓度为1.6×103—2.56×104/mL,MTS的最适细胞接种浓度为5×10—6.4×103/mL,WST-1的最适细胞接种浓度为2.5×10—1.6×103/mL。三种方法的最佳测定时间均为4h。结论:MTT、MTS、WST-1分别适用于不同条件下检测细胞的存活与增殖,可为抗病毒及抗癌药物的筛选提供实验依据。

WST-1法用于抗恶性肿瘤药物筛选的实验研究

ＷＳＴ－１是一种新型的四唑盐。它生成水溶性的有色物质。比色时不需额外的溶解步骤。在本研究中我们将ＷＳＴ，１用于胃癌细胞株ＳＧＣ－７９０１的抗癌药物筛选试验。我们的研究表明：①最适细胞接种数０．５×１０４－１×１０４／孔。②．ＷＳＴ－１显色法的最佳波长４５０ｎｍ。③．ＷＳＴ－１显色法重复性良好，组内变异系数为３．５％～８．７％。④ＷＳＴ－１法比ＭＴＴ法敏感。⑤．ＷＳＴ－１法比ＭＴＴ法简便。⑥．ＷＳＴ－１法用于抗癌药物筛选结果与ＭＴＴ法具有良好的符合性。结果表明，ＷＳＴ－１法具有快速、简便的特点。是体外瘤株筛选抗癌新药和临床肿瘤药敏试验的可靠方法。

红毛五加多糖对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖和核转录因子p53、c-myc蛋白表达的影响

目的探讨红毛五加多糖(AGP)对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖以及对细胞核转录因子p53、c-myc表达的影响。方法在DMEM培养基内加入不同浓度AGP(0.15625、0.3125、0.625、1.25、2.5 g/L)体外培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231 1d、3d、5d、7d后,用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒WST-1测定人乳腺癌细胞的增殖,倒置显微镜观察其形态变化;用免疫荧光法、免疫印迹法检测人乳腺癌细胞凋亡相关蛋白p53、c-myc的表达。结果 WST-1法显示,不同浓度AGP作用3d、5d、7d后对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的增殖具有抑制作用,与阴性对照组相比差异有显著性(P<0.05);抑制率与AGP剂量、作用时间呈依赖性。免疫荧光法及免疫印迹法显示,AGP作用于人乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,其细胞的c-myc表达明显减弱,并向细胞质内聚集;而免疫印迹法显示p53表达显著增强。结论 AGP具有抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖的作用,这可能与AGP下调c-myc表达、上调p53表达有关。

植物活性成分对细胞存活率的影响及其测定方法的比较研究

选用植物活性物质单体白藜芦醇和绿原酸作用于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,采用MTS法、WST-1法、CCK-8法、XTT法和MTT法测定细胞存活率,并将MTS法、WST-1法、CCK-8法、XTT法这4种方法与传统的MTT法进行比较分析,从中选出最佳的检测方法;通过IC50值比较白藜芦醇和绿原酸毒性大小。结果显示:CCK-8法所得结果稳定,且与MTT法所测得的IC50值最接近,为最佳选择;WST-1法的实验可重复性较差,结果偏小;XTT法是4种方法中最不稳定的,作用时间、检测波长最难确定,且实验重复性差。CCK-8法、MTS法、WST-1法、XTT法和MTT法测定所得白藜芦醇的IC50值分别是116.86、124.68、64.90、162.86、86.30μmol/L;绿原酸的IC50值分别为2808.60、1119.96、1029.72、1325.43、2852.63μmol/L,同种方法下绿原酸的IC50值均高于白藜芦醇的IC50值。结论是测定植物活性成分对细胞存活率影响的方法以CCK-8为最好。白藜芦醇对CHO细胞的毒性比绿原酸大。

血管组织工程生物支架材料细胞生物相容性实验研究

目的采用新方法研究天然生物支架材料胶原/透明质酸膜,明胶海绵的细胞相容性。方法应用WST-1法测定平滑肌细胞与材料的粘附率,增殖力,3H-TDR掺入法测定DNA合成率,BrdU细胞标记免疫组化鉴定,分析组织工程生物支架材料的细胞相容性。结果WST-1法测定,3H-TDR掺入法测定DNA合成率,BrdU细胞标记结果表明:胶原/透明质酸膜与平滑肌细胞的粘附率最高,细胞的增殖和代谢状况较好,明胶海绵较低。结论应用WST-1法测定,3H-TDR掺入法测定DNA合成率,BrdU细胞标记方法研究细胞相容性方法简便可行;天然复合生物材料胶原/透明质酸膜具有较理想的细胞相容性。

细胞增殖的检测方法

近年来,细胞增殖一直是生物医学领域各专业的研究热点,细胞增殖检测技术种类繁多却并不完善,本文就细胞增殖的特征以及常用的细胞增殖的各种检测方法的优缺点作一综述。

聚砜膜空心纤维透析器细胞毒性研究

目的应用聚砜膜空心纤维透析器浸提液配制的细胞培养液培养小鼠成纤维细胞L929(4×104/ml),观察其对L929细胞生长的影响。方法细胞计数法和WST-1法。结果和对照组相比,两种试验方法实验组的细胞均生长良好,细胞增殖度均大于75%,为1级反应。结论根据国家标准进行评价,该聚砜膜空心纤维透析器对L929细胞形态、生长和增殖没有影响,无细胞毒性作用,具有良好的生物相容性,符合生物材料应用要求。

限制性siRNA干涉文库的构建以及影响HeLa细胞增殖新功能基因的扫描

利用RNA干涉文库进行大规模高通量的功能基因扫描,已成为发现新功能基因的重要方式和手段.为了寻找在细胞增殖和分化过程中的新功能基因,根据斯坦福大学公布的与人类胚胎干细胞和造血干细胞增殖和分化过程中有关基因的基因芯片的分析结果,组建了与细胞增殖和分化有关的RNA限制性干涉文库.该文库包括靶向各类基因的载体,如包括转录因子、各类蛋白激酶、细胞周期调控蛋白以及一些未知功能基因在内的225个基因.利用这个限制性RNA干涉文库对控制HeLa细胞增殖的基因进行筛选.并通过WST-1高通量检测,发现了2个同HeLa细胞增殖相关的基因:CNKSR3(Homo sapiens CNKSR family member 3)和Fosl2(Homo sapiens FOS-like antigen 2),并初步证实:沉默CNKSR3会促进HeLa细胞的增殖,而沉默Fosl2则抑制HeLa细胞的增殖功能.

辐射干预下细胞增殖能力检测方法探讨

目的旨在探讨MTT法、WST-1法、克隆形成法和3H掺入法检测细胞辐射敏感性的差异,为辐射敏感性检测方法选择提供实验依据。方法选择人正常肝细胞L02、人肝癌细胞HepG2、人肺腺癌细胞SPC-A-1三种细胞系,6MVX线以0,1,2,3,4,6,8Gy辐射细胞,分别用4种方法来检测细胞增殖情况,检测其不同剂量点细胞存活分数,统计分析4种方法所得存活分数的相关性。结果以3Gy为界点,超出该剂量范围,相关性差。经直线回归分析,克隆形成法与3H掺入法之间有很好的相关性,MTT法、WST-1法与克隆形成法、3H掺入法之间无相关性。WST-1法和MTT法无相关性。结论平板克隆形成法和3H掺入法能准确测定细胞的辐射敏感性,MTT法和WST-1法可提供参考,无法替代克隆形成法和3H掺入法。

血管组织工程支架材料的细胞相容性

背景:胶原与透明质酸均有利于组织培养中细胞的黏附、增殖和分化。目的:观察血管内皮细胞、平滑肌细胞与胶原/透明质酸膜、明胶海绵的细胞相容性,并筛选最佳种植方法。方法:将第3-5代兔血管平滑肌细胞种植在胶原/透明质酸膜(或明胶海绵)材料上,连续培养2周后将兔内皮细胞接种在平滑肌细胞-胶原/透明质酸膜(或明胶海绵)复合体上,并设置单纯平滑肌细胞与内皮细胞共同接种组。结果与结论:①光镜和扫描电镜观察:细胞在两种材料上均随着培养时间,接种次数增加而生长加快,其中在胶原/透明质酸膜上的细胞生长更好,细胞连接更致密。②WST-1法检测:胶原/透明质酸膜组平滑肌细胞的黏附率及增殖率均高于明胶海绵组(P<0.05),且细胞在材料上的生长随着接种次数的增加有不同程度提高。③3H-TDR掺入法检测DNA合成率:在胶原/透明质酸膜上的细胞DNA合成最高,明胶海绵上的较差。表明胶原/透明质酸膜具有较理想的细胞相容性,采用适当间隔、反复接种的方法可提高细胞的黏附和增殖。

血管平滑肌细胞增殖及其代谢活性的测定

本文首先报道培养的新西兰大白兔的血管平滑肌细胞(SMC)能对WST-1进行还原代谢,并联合应用WST-1和BrdU ELISA测定同一标本的SMC的增殖及其代谢活性。结果表明:随着胎牛血清浓度的增加,SMC活细胞数目、WST-1和BrdU的OD值逐渐增多。说明WST-1和同一标本的WST-1和BrdU ELISA联合测定方法是检测SMC增殖的指标,能客观地反映SMC的DNA合成和代谢活性。

左旋多巴联合丹参注射液对鱼藤酮致分化PC12细胞凋亡的影响

目的:研究左旋多巴联合丹参注射液对鱼藤酮致分化PC12细胞凋亡的影响。方法:实验分为正常对照(正常细胞,等容培养液)组、联合用药对照(正常细胞,左旋多巴2μmol/L+丹参注射液3.125μg/ml)组、模型(模型细胞,等容培养液)组、神经生长因子(模型细胞,NGF,300μg/L)组、左旋多巴(模型细胞,2μmol/L)组、丹参注射液(模型细胞,3.125μg/ml)组、联合用药(模型细胞,左旋多巴2μmol/L+丹参注射液3.125μg/ml)组。以鱼藤酮诱导分化PC12细胞凋亡作为帕金森病体外模型,通过水溶性四氮唑(WST-1)法测细胞相对增殖率,Hoechst 33342标记染色法观察细胞荧光强度改变,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)蛋白含量与20S蛋白酶体(PSM)活性。结果:与模型组比较,联合用药组细胞增殖率升高,细胞凋亡减小,GAPDH蛋白含量减少,20S PSM活性增强,且效果均优于左旋多巴组。结论:左旋多巴联合丹参注射液可拮抗鱼藤酮致分化PC12细胞凋亡,其机制与降低细胞内GAPDH含量及增强20S PSM活性有关,其效果优于左旋多巴单用。

大鼠脑胶质瘤细胞温热治疗的观察分析

目的温热疗法对大鼠脑胶质瘤细胞的杀伤效果。方法用Rat glioma cellC6,9L肿瘤细胞,37℃(对照组),42℃,43℃,44 ℃(治疗组)加温1 h,用WST-1 assay方法测定细胞生存率,分析杀肿瘤细胞效果。结果43℃,44℃加温1h,均取得了显著的杀肿瘤细胞效果。结论温热疗法对大鼠脑胶质瘤细胞杀伤效果是可靠的。

BEZ235抑制肿瘤细胞的增殖及其机制

P13UAkt／mTOR途径过度激活时可加速细胞增殖。BEZ235可抑制P13UAkt／mToR通路，其首要表现是抑制肿瘤细胞的增殖活性。BEZ235（0～100nmol／L）处理多发性骨髓瘤（multiplemyeloma，MM）浆细胞5TGMl4h后，应用WST-1法检测发现BEZ235能有效抑制细胞增殖[4]。

3种齐墩果酸纳米粒对小鼠HCa-F细胞体外抑制作用比较

目的:比较齐墩果酸(OA)/乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒(OPN)、OA/乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒(OPTN)和OA/聚己内酯-聚乳酸-水溶性维生素E纳米粒(OPPTN)对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞(HCa-F)的体外抑制作用。方法:采用水溶性四氮唑(WST-1)法比较低、中、高浓度(2.5、10、20μg·mL-1)的OPN、OPTN、OPPTN、OA溶液剂(OS)组和阳性对照(氟尿嘧啶注射液)组对HCa-F细胞培养24、48、72h后的细胞生长抑制率(IR)和3种纳米粒的半数抑制浓度(IC50),另设立空白纳米粒(NPs)组、空白组(不加任何物质)、阴性对照组(加入培养液)。结果:浓度分别为2.5、10、20μg·mL-1的OPN组在72h时的IR分别为(42.9±0.9)%、(63.6±1.1)%、(75.4±1.3)%,OPTN组分别为(54.3±1.2)%、(79.2±1.4)%、(92.6±1.5)%,OPPTN组分别为(50.8±0.8)%、(71.7±1.3)%、(83.9±1.2)%,阳性对照组分别为(31.5±0.9)%、(50.3±0.8)%、(60.6±0.9)%。与阳性对照组相同浓度比较,72h时OPN、OPTN、OPPTN组的中、高浓度的IR均明显升高(P均<0.01)。3种纳米粒对HCa-F细胞的IC50均随时间延长逐渐减小,其中OPTN组(8.64、1.39、0.38μg·mL-1)明显小于OPPTN组(11.86、5.52、3.46μg·mL-1)和OPN组(30.27、8.21、5.00μg·mL-1)(P<0.05或P<0.01)。结论:OPTN对HCa-F细胞的IR最高,表明OPTN体外具有良好的细胞相容性和显著的抗肿瘤活性。