采用可溶性噻唑盐WST-8检测细胞病变

目的 建立一种简便和客观的检测细胞病变的方法。方法 活细胞代谢过程中 ,可溶性噻唑盐WST 8在电子载体 1 MethoxyPMS存在时被还原形成的可溶性甲染料 ,通过读取A4 50 6 30 间接检测活细胞的个数 ,可用于细胞病变的检测。将WST 8法用于rhIFN α1b效价的检测 ,并与结晶紫法和常规镜检相比较。结果 相关性研究表明在一定细胞浓度范围内 (2 0 0～ 5 5 0 0 0细胞 孔 )Wish活细胞个数与A4 50 6 30 值呈线性相关 ,相关系数为 0 998。WST 8法检测rhIFN α1b的效价结果与结晶紫法和常规镜检结果基本一致 ,相关系数分别为 0 911(P <0 0 0 1)和0 94 5 (P <0 0 1)。结论 WST

WST-8检测培养小鼠脾NK细胞增殖及杀伤活性的研究

目的：采用WST-8检测培养小鼠脾NK细胞增殖活性，并探讨其杀伤活性。方法：采用WST-8检测体外培养的不同细胞数量的小鼠脾NK细胞增殖活性，并采用乳酸脱氢酶法检测其杀伤活性。结果：小鼠脾NK细胞在培养第3～5d增殖最旺盛，第5d进入平台期。1×10^6孔的细胞数检测较敏感。培养5d的NK细胞杀伤活性随着效靶细胞比例的增加而增加，在效靶比为20：1时，杀伤活性最大。结论：WST-8是一种理想的检测小鼠脾NK细胞增殖活性的方法，但其对NK细胞的敏感性较低，培养的NK细胞在效靶比为20：1时杀伤活性最大。

WST-8比色法检测梨形四膜虫细胞活性

微生物易于实验控制，已逐渐成为评价化学物质对水生态系统刺激效应的模式生物…。四膜虫（Tetrahymenapyriformis）是一种单细胞真核生物，广泛存在于自然环境中，是水生态健康的重要评价指标之一。由于四膜虫繁殖迅速，在最适条件下大约每2．5—3h可以分裂一次；只需进行无菌培养，就能得到数量较多的实验材料，被广泛应用于细胞生物学、遗传学、生物化学及分子生物学，在基础研究中一直处于前沿地位。

可溶性噻唑盐WST-8用于重组人白细胞介素-2的生物学活性测定

运用新型测定活细胞个数的化学物质,建立一种快速测定重组人白细胞介素-2生物学活性的方法.活细胞代谢过程中,胞内的可溶性噻唑盐WST-8在电子载体1-Methoxy PMS存在时被还原成可溶性甲臢染料,甲臢染料可在A45Onm处产生吸收值,根据其吸收值的大小间接检测活细胞个数从而测定待检测样品中IL-2的浓度水平.相关性实验结果证明,在细胞浓度1250～160000个/孔范围内,CTLL-2活细胞个数与A45O值之间呈线性相关;用此种新方法检测的白细胞介素-2(IL-2)生物学活性结果与MTT法及XTT法结果基本一致,相关系数分别为r=0.9602和r=0.9511.因此, WST-8法适用于悬浮依赖型细胞CTLL-2为基础的IL-2生物学活性检测,且具有经济、实用、简便、易行的特点,有较好的实际应用价值.

基于WST-8细胞活性实验的表面增强拉曼光谱研究

采用常规的用于测定活细胞个数的试剂2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐(WST-8四唑盐)建立了一种快速测定细胞活性的表面增强拉曼散射光谱(SERS)新方法.考察了p H值及还原剂烟酰胺腺嘌噙二核苷酸(NADH)用量对WST-8甲瓒信号的影响.结果表明,与传统的WST-8比色法相比,SERS法具有更高的检测灵敏度和选择性,对WST-8甲瓒的检测限可达到10μmol/L.

WST-8方法用于蓝藻细胞活力的检测

作为重要的模式生物,蓝藻活细胞数量的测定方法应用非常广泛。本研究尝试将用于哺乳动物细胞的快速活力检测方法 WST-8方法用于蓝藻的检测。首先考察WST-8法与传统的蓝藻细胞计数法的相关性从而判断WST-8法应用的可行性,然后优化检测条件,考察检测波长、是否光照、孵育温度、孵育时间以及底物加入量对测定结果的影响。结果表明,细胞密度与WST-8方法测定的吸光度呈线性(r^2=0.996 7),此方法可用于集胞藻6803的细胞活力测定。最佳检测波长为457 nm,在25℃、30℃、37℃3个温度下,随温度升高,底物还原量增多,随孵育时间增加,产物逐渐增加,在0~120 min内呈现良好的线性关系,当底物加入量在2~10μL范围内,产物量随底物量增加而增加,当底物量大于10μL后产物量不再增加。因此,建议的检测条件为在30℃时,取100μL蓝藻培养液(浓度为1×10~7~6.4×10~7 cell/mL)于96孔板孔中,加入10μL WST-8试剂,光照恒温摇床孵育120 min,测定457 nm吸光度。

异嗪皮啶对人乳腺癌干细胞凋亡相关基因Bcl-2与Caspase家族表达的影响

目的:研究草珊瑚中异嗪皮啶成分对乳腺癌干细胞中凋亡相关基因通路Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8基因表达影响,进而明确其抑制增殖、迁移和促凋亡的机制。方法:无血清培养法诱导MDA-MB-231细胞株富集乳腺癌干细胞,流式细胞仪分选CD44^+/CD24^(-/low)干细胞群。各组分别给予0、17、50、150、450μmol/L异嗪皮啶,CCK-8法观察给药后24、48、72 h的细胞活力;细胞划痕实验法检测给药后细胞痕道宽度变化值并判断其对细胞迁移能力的影响;Annexin V-FITC/PI染色法检测给药后细胞总凋亡率变化;实时荧光定量PCR测定各组Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8基因的mRNA水平;Western blot检测上述基因的蛋白水平。结果:与对照组比较,50、150和450μmol/L异嗪皮啶组24、48、72 h的细胞活力降低,细胞迁移能力下降。与对照组比较,50、150和450μmol/L异嗪皮啶组细胞总凋亡率高于对照组,Bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平降低,Caspase-3和Caspase-8基因mRNA和蛋白表达水平升高。以上结果均呈明显剂量效应关系。结论:异嗪皮啶能通过下调Bcl-2基因表达与激活Caspase基因家族诱导乳腺癌干细胞的凋亡,同时能抑制其增殖与迁移。

洋葱提取物对结肠癌细胞增殖的抑制作用

目的:研究洋葱水提取物和乙醇提取物中黄酮类化合物的含量及其各自对结肠癌细胞株增殖的抑制作用.方法:采用水提取和乙醇提取洋葱后,用紫外可见分光光度仪检测提取物中黄酮类化合物含量.体外培养结肠癌细胞株(LoVocells、SW480cells、HT-29cells、HCT-8cells),采用不同浓度的黄酮类化合物(0、2.5、5、10、20、40、60、80mg/L)对其进行干预,WST-8法检测洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株增殖的抑制作用.结果:洋葱水提取物中黄酮类化合物含量较乙醇提取物高.WST-8法检测洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株的抑制作用具有剂量和时间依赖性,且72h时水提取物较乙醇提取物对结肠癌细胞株(SW480)增殖抑制(%)更显著(10mg/L:37.77±5.84vs17.36±5.24;20mg/L:52.35±5.72vs24.15±5.54;40mg/L:68.17±7.76vs32.79±6.02;60mg/L:71.08±8.16vs47.55±2.45;80mg/L:76.00±5.87vs60.35±6.61,均P<0.05).结论:洋葱水提取物和乙醇提取物对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制有待进一步研究.

人颗粒溶素基因真核表达载体的构建及在肝癌细胞中表达的实验研究

目的:构建人颗粒溶素(GNLY)全长编码序列的真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察GNLY在细胞内的表达及其对细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR技术获取人GNLY全长编码序列cDNA,克隆至pGEM-T载体进行测序,再将克隆片段插入质粒pcDNA3.1(+)中,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY,用阳离子聚合物转染试剂转染肝癌细胞系SMMC-7721,检测目的基因mRNA的表达,W ST-8法检测细胞增殖活性。结果:获得人GNLY全长编码序列cDNA,并成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY;转染SMMC-7721细胞后,检测出目的基因mRNA的表达;重组质粒转染组与空质粒对照组细胞增殖活性有非常显著性差异(P<0.01和P<0.001),并且随着转染基因浓度的增加,细胞增殖活性逐渐降低,2.0μg/m l pcDNA3.1(+)/GNLY转染组细胞增殖活性下降至0.329。结论:pcDNA3.1(+)/GNLY真核表达载体构建成功,GNLY基因转染对SMMC-7721细胞能产生细胞毒性效应,对肝癌细胞具有一定的杀伤作用。

昆布多糖硫酸酯对非激素依赖型人前列腺癌细胞PC-3的作用研究

目的研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3的作用。方法利用WST-8法检测LAMS对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3细胞生长的抑制作用,利用流式细胞术(FCM)分析LAMS对细胞周期和凋亡的影响,利用荧光显微镜观察PC-3细胞形态。结果随着LAMS浓度的增加和作用时间的延长,对非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3细胞的生长抑制率逐渐增高,呈时间-剂量效应;流式细胞仪分析,PC-3细胞凋亡率逐渐增高;但PC-3细胞的凋亡率与作用时间的延长无明显关系;荧光显微镜观察,PC-3细胞凋亡小体逐渐增多,甚至出现细胞死亡;随着LAMS浓度增加PC-3细胞G1期细胞比例逐渐减少,S+G2期细胞比例呈剂量依赖性增加,表明存在S+G2期阻滞。结论LAMS能抑制体外PC-3细胞的生长,并促进其S+G2期阻滞和凋亡,可能是其抑制前列腺癌的机制之一。

植物活性成分对细胞存活率的影响及其测定方法的比较研究

选用植物活性物质单体白藜芦醇和绿原酸作用于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,采用MTS法、WST-1法、CCK-8法、XTT法和MTT法测定细胞存活率,并将MTS法、WST-1法、CCK-8法、XTT法这4种方法与传统的MTT法进行比较分析,从中选出最佳的检测方法;通过IC50值比较白藜芦醇和绿原酸毒性大小。结果显示:CCK-8法所得结果稳定,且与MTT法所测得的IC50值最接近,为最佳选择;WST-1法的实验可重复性较差,结果偏小;XTT法是4种方法中最不稳定的,作用时间、检测波长最难确定,且实验重复性差。CCK-8法、MTS法、WST-1法、XTT法和MTT法测定所得白藜芦醇的IC50值分别是116.86、124.68、64.90、162.86、86.30μmol/L;绿原酸的IC50值分别为2808.60、1119.96、1029.72、1325.43、2852.63μmol/L,同种方法下绿原酸的IC50值均高于白藜芦醇的IC50值。结论是测定植物活性成分对细胞存活率影响的方法以CCK-8为最好。白藜芦醇对CHO细胞的毒性比绿原酸大。

注射用核糖核酸Ⅱ的抗肿瘤活性测定

将不同浓度梯度核糖核酸Ⅱ作用于7种细胞系,采用WST-8比色法测定其对细胞增殖的抑制情况,选择较敏感的人红白血病细胞K562作为试验对象,考察了细胞接种密度、药物作用时间等条件的影响,初步建立了注射用核糖核酸Ⅱ体外抗肿瘤活性的测定方法。核糖核酸Ⅱ在0.02~100 mg/ml范围内线性关系良好。采用本法测定了10批样品的抗肿瘤活性,结果对K562细胞的抑制率均大于55%。

肝水解肽体外活性测定方法的探讨研究

目的:建立肝水解肽体外生物学活性测定方法。方法:将不同浓度肝水解肽作用于正常人肝L02细胞,WST-8比色法测定L02细胞增殖情况。同时对实验条件,包括稀释液、细胞接种密度、药物作用时间等进行探讨,建立肝水解肽体外活性测定方法,并用该方法对2个厂家生产的2批产品进行活性检测。结果:获得了比较稳定可靠的实验参数:稀释液为RPMI-1640培养液,细胞接种密度为4.0×104个.mL-1,药物作用时间为48～72 h,肝水解肽浓度为0.5,0.25,0.12,0.06,0.03,0.015 mg.mL-1。由这些实验参数建立了肝水解肽活性测定方法。用该方法检测的2批产品活性均合格,重复实验3次,每次实验结果均一致,RSD均低于10%。结论:该方法可用于肝水解肽体外生物学活性测定。

乙酸铅对脑脉络丛Z310细胞毒性作用

目的初步探讨乙酸铅诱导大鼠脑脉络丛Z310细胞的低剂量兴奋作用和高剂量抑制作用。方法以浓度为0、0.000 2、0.002、0.02、0.2、2、20、200、500μmol/L的乙酸铅分别染毒Z310细胞12和24h,用噻唑蓝(MTT)法和2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐(WST-8)法检测细胞生存情况,并观察各剂量组细胞形态变化。结果 0.02μmol/L乙酸铅染毒24 h,MTT法检测Z310细胞存活率为107.06%,0.2μmol/L染毒组24 h时细胞存活率升高为110.91%;>2μmol/L乙酸铅染毒时,细胞存活率随剂量增加而降低;染毒24 h时,200、500μmol/L乙酸铅组细胞存活率(MTT法)分别下降至79.37%和76.81%(P<0.01);染毒12、24 h时,200、500μmol/L乙酸铅组细胞存活率(WST-8法)分别下降至81.67%和72.36%及56.89%和44.05%(P<0.05)。结论低剂量乙酸铅可引起Z310细胞兴奋效应;高剂量乙酸铅引起Z310细胞抑制效应;WST-8法检测细胞存活率较MTT法更敏感。