LINC00115靶向miR-874-3p调控肝癌细胞生物学行为以及紫杉醇敏感性

目的 探讨LINC00115靶向miR-874-3p对肝癌细胞生物学行为和紫杉醇敏感性的影响。方法 qRT-PCR检测LINC00115和miR-874-3p在肝癌组织、细胞系中的表达情况。将si-NC、si-LINC00115、miR-NC、miR-874-3p、pcDNA、pcDNA-LINC00115、anti-miR-NC+si-LINC00115、anti-miR-874-3p+si-LINC00115分别转染肝癌细胞MHCC97H。采用CCK-8法测定细胞活力和对紫杉醇的IC50值。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验确定LINC00115和miR-874-3p的关系。结果 肝癌组织、细胞系中LINC00115呈高表达(均P<0.05),miR-874-3p呈低表达(均P<0.05)。下调LINC00115表达后细胞吸光度(A)值、对紫杉醇IC50值、迁移和侵袭显著降低(均P<0.05),而miR-874-3p表达显著增加(均P<0.05)。上调miR-874-3p表达后细胞A值、对紫杉醇IC50值、迁移和侵袭显著减少(均P<0.05)。上调LINC00115表达后miR-874-3p表达显著减少(P<0.05)。LINC00115与miR-874-3p直接结合。下调miR-874-3p表达显著减弱LINC00115对肝癌细胞A值、对紫杉醇IC50值、迁移和侵袭的影响(均P<0.05)。结论 下调LINC00115通过促进miR-874-3p表达来抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭行为,增加其对紫杉醇的敏感性。

RP11-386G11.10在三阴性乳腺癌组织中的表达及其对细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨三阴性乳腺癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)RP11-386G11.10的表达及其通过调控miR-1299-3p/葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)分子轴对三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法:收集46例三阴性乳腺癌组织及癌旁组织,RT-qPCR检测RP11-386G11.10在其中的表达以及在正常乳腺上皮MCF-10A细胞和三阴性乳腺癌细胞系(MDA-MB-435、CAL-51、BT-549、MDA-MB-231)中的表达。si-NC慢病毒和si-RP11-386G11.10慢病毒感染BT-549细胞(即si-NC组和si-RP11-386G11.10组),克隆形成实验和细胞划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力;RT-qPCR检测感染后BT-549细胞中miR-1299-3p和GLUT-1 mRNA的表达;双荧光素酶报告基因实验验证RP11-386G11.10与miR-1299-3p的靶向关系。RT-qPCR检测GLUT-1 mRNA在三阴性乳腺癌组织中的表达;Pearson法检测RP11-386G11.10与GLUT-1 mRNA在三阴性乳腺癌组织中表达的关系。免疫印迹检测沉默RP11-386G11.10对BT-549细胞中GLUT-1蛋白以及JAK2/STAT3通路蛋白表达的影响。结果:与癌旁组织相比,三阴性乳腺癌组织中RP11-386G11.10的表达显著升高。与MCF-10A细胞相比,三阴性乳腺癌细胞系(MDA-MB-435、CAL-51、BT-549、MDA-MB-231)中RP11-386G11.10的表达均显著升高。与si-NC组BT-549细胞相比,si-RP11-386G11.10组细胞增殖能力和迁移能力均显著降低,miR-1299-3p表达显著升高,GLUT-1mRNA表达显著降低。RP11-386G11.10能够靶向互补结合miR-1299-3p。与癌旁组织相比,三阴性乳腺癌组织中GLUT-1 mRNA表达显著增加;Pearson法分析显示RP11-386G11.10与GLUT-1 mRNA在三阴性乳腺癌组织中的表达呈正相关。与si-NC组BT-549细胞比较,si-RP11-386G11.10组细胞中GLUT-1蛋白表达显著降低,JAK2/STAT3通路转导被抑制。结论:RP11-386G11.10在三阴性乳腺癌中表达显著上调,沉默RP11-386G11.10能够抑制三阴性乳腺癌BT-549细胞的增殖能力和迁移能力,其作用机制可能与靶向调控miR-1299-3p/GLUT-1分子轴有关。

miR-211-5p和miR-202-3p在抑郁症患者中的表达及其与患者病情程度和认知功能的关系

目的探究微小核糖核酸-211-5p(miR-211-5p)和微小核糖核酸-202-3p(miR-202-3p)在抑郁症患者中的表达及其与患者病情程度和认知功能的关系。方法选取2021年1月至2023年6月郑州大学第一附属医院精神科收治的92例确诊为抑郁症的患者为抑郁症组,同期选取本院体检健康(精神状态正常)的志愿者92例为对照组。根据抑郁自评量表(SDS)分为轻度抑郁组(SDS:53~62分)45例、中度抑郁组(SDS:63~72分)30例、重度抑郁组(SDS:73分及以上)17例。根据简易智力状态检查量表(MMSE)评分分为轻度认知功能障碍组(MMSE:21~26分)24例、中度认知功能障碍组(MMSE:10~20分)40例、重度认知功能障碍组(MMSE:1~9分)28例。实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-211-5p和miR-202-3p水平。血清miR-211-5p、miR-202-3p水平对抑郁症的诊断价值采用ROC曲线进行分析。血清miR-211-5p、miR-202-3p水平与病情程度及认知功能的关系采用Spearman相关性分析。结果抑郁症患者血清miR-211-5p水平低于对照组,miR-202-3p水平高于对照组(P<0.05)。miR-211-5p、miR-202-3p联合诊断抑郁症的AUC高于miR-211-5p(Z=4.701,P<0.001)、miR-202-3p(Z=2.275,P=0.023)单独诊断的AUC。与轻度抑郁组相比,中度抑郁组和重度抑郁组miR-211-5p水平依次降低,与轻度抑郁组相比,中度抑郁组和重度抑郁组miR-202-3p水平依次升高。不同认知功能抑郁症患者血清miR-211-5p水平比较:重度认知功能障碍组<中度认知功能障碍组<轻度认知功能障碍组;miR-202-3p水平比较:重度认知功能障碍组>中度认知功能障碍组>轻度认知功能障碍组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,抑郁症患者血清miR-211-5p水平与病情程度及认知功能损害呈负相关,miR-202-3p水平与病情程度及认知功能损害呈正相关(P<0.05)。结论抑郁症患者血清miR-211-5p低表达,miR-202-3p高表达,二者与病情程度及认知功能有关,有成为抑郁症辅助诊断生物学指标的潜力。

皮肤鳞状细胞癌组织微RNA-103a-2-5p、钙黏附蛋白11表达及其临床意义

目的分析皮肤鳞状细胞癌组织中微RNA-103a-2-5p(miR-103a-2-5p)和钙黏附蛋白11(CDH11)的表达水平,探讨二者在临床研究中的意义。方法选取2017年1月至2019年6月宝鸡市人民医院诊治的98例皮肤鳞状细胞癌病人为研究对象,收集病人术中切除的癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中miR-103a-2-5p的表达水平。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测CDH11表达水平。TargetScanHuman网站预测miR-103a-2-5p与CDH11的靶向关系;Pearson相关性分析癌组织中miR-103a-2-5p和CDH11水平的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-103a-2-5p、CDH11表达与皮肤鳞状细胞癌病人预后的关系;影响皮肤鳞状细胞癌病人预后的因素采用Cox回归分析;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析miR-103a-2-5p和CDH11的表达对皮肤鳞状细胞癌的诊断价值。结果与癌旁正常组织[1.03±0.12,(5.06±1.43)µg/L]相比,皮肤鳞状细胞癌组织miR-103a-2-5p表达水平(1.46±0.38)显著升高(P<0.05),CDH11表达水平[(2.96±0.62)µg/L]明显降低(P<0.05);TargetScanHu-man网址预测miR-103a-2-5p与CDH11间存在结合位点;经Pearson相关性分析,miR-103a-2-5p与CDH11水平呈负相关(P<0.05);两者均与病人病理分级、TNM分期、淋巴结转移、侵袭程度相关(P<0.05);miR-103a-2-5p高表达组和CDH11低表达组复发率显著高于miR-103a-2-5p低表达组和CDH11高表达组(P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、miR-103a-2-5p是影响病人预后的危险因素(P<0.05),CDH11是影响病人预后的保护因素(P<0.05);miR-103a-2-5p、CDH11二者联合诊断皮肤鳞状细胞癌的ROC曲线下面积(AUC)为0.836,显著优于其各自单独诊断(P=0.018、0.021)。结论皮肤鳞状细胞癌病人miR-103a-2-5p表达水平升高,CDH11表达水平降低,二者均与病人临床病理特征及预后有密切关系,且二者联合可较好的诊断皮肤鳞状细胞癌。

妊娠晚期生殖道B族链球菌感染孕妇血清IL-37、CCL11水平及其对母婴结局的预测效能

目的探讨妊娠晚期生殖道B族链球菌感染孕妇血清白细胞介素-37(IL-37)、CC型修饰趋化因子11(CCL11)水平及其对母婴结局的预测效能。方法选择2020年12月至2022年12月于该院治疗的86例生殖道B族链球菌感染妊娠晚期孕妇作为研究组,另外选取76例同期入院体检正常的健康孕妇作为对照组。所有孕妇入组后采用酶联免疫吸附试验检测血清IL-37、CCL11水平。根据生殖道B族链球菌感染妊娠晚期孕妇是否出现不良妊娠结局分为妊娠结局正常组(50例)和不良妊娠结局组(36例)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清IL-37、CCL11对妊娠晚期生殖道B族链球菌感染孕妇不良妊娠结局的诊断价值,采用多因素Logistic逐步回归分析影响妊娠晚期生殖道B族链球菌感染孕妇母婴结局的因素。结果研究组血清IL-37、CCL11水平高于对照组(P<0.05)。研究组不良妊娠结局发生率明显高于对照组(P<0.05)。不良妊娠结局组流产史比例、阴道微生态失调比例及血清IL-37、CCL11水平高于妊娠结局正常组(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清IL-37、CCL11单独预测妊娠晚期生殖道B族链球菌感染孕妇不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)分别为0.876(95%CI:0.824~0.920)、0.788(95%CI:0.748~0.830);二者联合预测妊娠晚期生殖道B族链球菌感染孕妇不良妊娠结局的AUC为0.927(95%CI:0.889~0.970)。多因素Logistic逐步回归分析结果显示,血清IL-37(OR=3.604,95%CI:2.106~6.166)、CCL11(OR=4.250,95%CI:2.074~8.709)、流产史(OR=2.707,95%CI:1.688~4.342)、阴道微生态失调(OR=3.504,95%CI:1.993~6.162)均为影响妊娠晚期生殖道B族链球菌感染孕妇发生不良妊娠结局的危险因素(P<0.05)。结论妊娠晚期生殖道B族链球菌感染孕妇血清IL-37、CCL11水平均升高,且均与不良妊娠结局有关,有望作为预测妊娠晚期生殖道B族链球菌感染孕妇不良妊娠结局的有效指标。

circ_0061140靶向miR-338-3p调控多发性骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的:研究环状RNA 0061140(circ_0061140)对多发性骨髓瘤Sko-007细胞增殖和凋亡的影响和调控机制。方法:采用生物信息学数据库预测circ_0061140的靶miRNA,双荧光素酶报告实验证实circ_0061140与miR-338-3p靶向关系。实时定量PCR分析健康对照者和多发性骨髓瘤病人外周血中circ_0061140和miR-338-3p表达。将circ_0061140小干扰RNA(si-circ_0061140)、miR-338-3p模拟物、si-circ_0061140联合miR-338-3p抑制剂分别转染Sko-007,采用CCK-8法、流式细胞术分析干扰circ_0061140或过表达miR-338-3p或同时抑制circ_0061140和miR-338-3p对Sko-007细胞增殖、凋亡的影响。蛋白质印迹法分析B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)和Bcl相关x蛋白(Bax)表达变化。结果:miR-338-3p是circ_0061140达靶基因。circ_0061140在多发性骨髓瘤病人血清中的表达显著高于健康对照者(P<0.01),miR-338-3p在多发性骨髓瘤病人血清中的表达显著低于健康对照者(P<0.01)。干扰circ_0061140表达后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著降低(P<0.01),miR-338-3p和Bax表达、细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。过表达miR-338-3p后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著降低(P<0.01),细胞凋亡率、Bax表达显著升高(P<0.01)。与干扰circ_0061140比较,同时抑制circ_0061140和miR-338-3p表达后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著升高(P<0.01),细胞凋亡率、Bax表达显著降低(P<0.01)。结论:circ_0061140通过靶向miR-338-3p促进多发性骨髓瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡,在多发性骨髓瘤中具有致癌作用。

lncRNA LUCAT1通过调控miR-141-3p/SOX11轴促进肾透明细胞癌细胞的生长和转移的机制研究

目的:探讨lncRNA LUCAT1通过调控miR-141-3p/SOX11轴对肾透明细胞癌细胞(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)的生长和转移的影响。方法:利用生信分析LUCAT1在KIRC中的表达,并预测下游的miRNA/mRNA调控轴;qRT-PCR用于检测LUCAT1、miR-141-3p和SOX11的表达,Western blot用于检测SOX11的表达;细胞生物学功能实验观察KIRC细胞的增殖、迁移和侵袭状况;双荧光素酶实验验证LUCAT1和miR-141-3p以及miR-141-3p和SOX11靶向结合关系;RIP实验验证LUCAT1和miR-141-3p的结合关系;裸鼠实验观察LUCAT1对肿瘤体内生长的影响。结果:通过生信分析和细胞实验发现LUCAT1和SOX11在KIRC中高表达,miR-141-3p在KIRC中低表达;MTT、伤口愈合和细胞侵袭实验结果显示LUCAT1促进KIRC细胞的增殖、迁移和侵袭。随后在双荧光素酶实验中显示LUCAT1可以作为miR-141-3p的分子海绵,同时我们还证实miR-141-3p能回复LUCAT1对KIRC细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。进一步研究发现SOX11是miR-141-3p的直接靶标,并且SOX11能回复miR-141-3p对KIRC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。最后我们还通过体内实验确定了LUCAT1能促进KIRC肿瘤的体内生长。结论:LUCAT1在KIRC中上调,并可以通过吸附miR-141-3p调控SOX11促进KIRC的生长和转移。这表明LUCAT1有望成为KIRC的生物标志物和潜在分子治疗靶点。

组织RP11-388M20.1水平对胃癌根治术患者预后的评估价值

目的 探讨胃癌组织中长链非编码RNA RP11-388M20.1水平及其评估胃癌根治术患者预后的价值。方法 选取2018年1月至2020年12月于本院行胃癌根治术的患者103例,采用实时荧光定量PCR检测RP11-388M20.1在胃癌组织及对应癌旁组织中的表达差异,分析RP11-388M20.1水平与胃癌患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线并基于Cox比例风险模型分析RP11-388M20.1在胃癌根治术患者预后预测中的价值。结果 103例胃癌组织的RP11-388M20.1水平为5.013±0.184,高于癌旁组织的1.471±0.056(t=18.399,P<0.001)。RP11-388M20.1在胃癌组织中的表达显著与TNM分期(P=0.005)、肿瘤大小(P=0.038)、分化程度(P=0.002)、T分期(P=0.029)和癌胚抗原状态(P=0.022)有关。单因素分析结果显示RP11-388M20.1表达与胃癌预后有关,其中RP11-388M20.1低表达者的中位无病生存期未达,优于高表达者的36个月(HR=2.936,95%CI:1.808~4.768,P<0.001);多因素分析显示RP11-388M20.1高表达是胃癌预后不良的危险因素(HR=2.076,95%CI:1.070~4.026,P=0.031)。结论 RP11-388M20.1在胃癌组织中是一种过表达的长链非编码RNA,且与胃癌进展和不良预后有关,有作为胃癌诊治靶点的潜能。

KIF11、β-catenin、GSK-3β在宫颈癌中的表达及临床意义

目的探讨驱动蛋白家族成员11(kinesin family member 11,KIF11)、β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在宫颈癌中的表达情况及临床意义。方法采用免疫组化法检测KIF11、β-catenin、GSK-3β在102例宫颈癌、52例高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)、46例低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)及40例慢性宫颈炎组织中的表达情况,分析三者的表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系,分析三者之间的相关性,COX比例风险模型分析影响宫颈癌患者预后的影响因素。结果随着宫颈病变进展,KIF11、β-catenin阳性率逐渐升高,GSK-3β阳性率逐渐减低(P<0.05)。KIF11、β-catenin、GSK-3β在宫颈癌组织中的阳性表达在国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期、分化程度、淋巴结转移方面比较,差异有统计学意义(P<0.05),但在不同年龄及病理类型间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。宫颈癌患者组织中KIF11与β-catenin的表达呈正相关(r=0.461,P<0.05),β-catenin与GSK-3β的表达呈负相关(r=-0.692,P<0.05),KIF11与GSK-3β的表达呈负相关(r=-0.336,P<0.05)。KIF11、β-catenin阳性表达患者的平均生存时间短于阴性表达患者,GSK-3β阳性表达患者的平均生存时间长于阴性表达患者。COX回归分析显示,FIGO分期、淋巴结转移、KIF11、β-catenin为宫颈癌患者预后的独立危险因素,GSK-3β为独立保护因素。结论KIF11、β-catenin、GSK-3β在宫颈癌患者组织中异常表达,KIF11可能参与宫颈癌发生、发展中Wnt/β-catenin通路的调节,三者联合检测可为宫颈癌的诊断及预后提供新的参考。

MicroRNA-27a-3p靶向调控SLC7A11抑制结直肠癌细胞铁死亡

目的:探究微小RNA-27a-3p(microRNA-27a-3p,miR-27a-3p)对结直肠癌细胞系HT-29和SW480铁死亡的调控及作用机制。方法:分别用0、2.5和5μmol/L Erastin处理结直肠癌细胞系HT-29和SW480,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)mRNA表达水平,筛选Erastin的合适浓度;将HT-29和SW480细胞各分为siControl组、siSLC7A11-1组和siSLC7A11-2组,分别转染对照siRNA、siSLC7A11-1和siSLC7A11-2,与5μmol/L Erastin共培养0、24、48、72 h,检测不同时间点细胞增殖活性,并检测细胞内丙二醛水平。另将HT-29和SW480细胞各分为miR-NC组、miR-27a-3p组和anti-miR-27a-3p组,分别转染miR-NC、miR-27a-3模拟物和miR-27a-3p抑制物,采用qRT-PCR法检测SLC7A11 mRNA表达水平,采用荧光素酶报告基因实验检测SLC7A113′UTR序列(SLC7A11-WT)及突变序列(SLC7A11-Mut)荧光素酶活力;与5μmol/L Erastin共培养0、24、48、72 h,检测不同时间点细胞增殖活性,并检测细胞内丙二醛含量。结果:随Erastin浓度升高,结直肠癌HT-29和SW480细胞SLC7A11 mRNA表达水平显著升高(P均<0.01);在结直肠癌HT-29和SW480细胞中,与siControl组相比,siSLC7A11-1组和siSLC7A11-2组48 h和72 h细胞增殖活性显著增强(P<0.05),丙二醛含量显著下降(P<0.05);与miR-NC组相比,miR-27a-3p组细胞增殖活性显著增强(P<0.05),丙二醛水平和SLC7A11-WT荧光素酶活性显著下降(P<0.05或P<0.01),SLC7A11-Mut荧光素酶活性没有显著变化(P>0.05),anti-miR-27a-3p组细胞活力显著下降(P<0.01),丙二醛含量和SLC7A11-WT荧光素酶活性显著升高(P均<0.01),SLC7A11-Mut荧光素酶活性没有显著变化(P>0.05)。结论:miR-27a-3p可能通过靶向SLC7A11 mRNA 3′UTR,调控Erastin诱导的结直肠癌细胞铁死亡。

hsa_circ_0011946靶向miR-767-3p调控宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨hsa_circ_0011946靶向miR-767-3p在宫颈癌进展中的作用。方法RT-qPCR分析hsa_circ_0011946、miR-767-3p在宫颈癌组织、癌旁正常组织、人宫颈上皮永生化细胞(H8)及宫颈癌细胞(SiHa、HeLa、Caski)中的表达水平。分别用si-NC、si-hsa_circ_0011946、miR-NC、miR-767-3p、pcDNA、pcDNA-hsa_circ_0011946、anti-miR-NC+si-hsa_circ_0011946、anti-miR-767-3p+si-hsa_circ_0011946转染SiHa细胞,并设为si-NC组、si-hsa_circ_0011946组、miR-NC组、miR-767-3p组、pcDNA组、pcDNAhsa_circ_0011946组、anti-miR-NC+si-hsa_circ_0011946组、anti-miR-767-3p+si-hsa_circ_0011946组,未转染的细胞作为NC组。采用RT-qPCR检测各组SiHa细胞中hsa_circ_0011946和miR-767-3p的表达;CCK-8法检测细胞活力;平板克隆形成实验检测细胞克隆数;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭数;Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达。circular RNA interactome预测miR-767-3p与hsa_circ_0011946的结合位点,双荧光素酶报告基因实验分析hsa_circ_0011946和miR-767-3p的靶向关系。结果与癌旁正常组织比较,宫颈癌组织中hsa_circ_0011946表达水平显著升高(P<0.05),miR-767-3p表达水平显著降低(P<0.05)。与H8细胞比较,SiHa、HeLa、Caski细胞中hsa_circ_0011946表达水平显著升高(P<0.05),miR-767-3p表达水平显著降低(P<0.05)。与NC组比较,si-hsa_circ_0011946组SiHa细胞hsa_circ_0011946表达水平、吸光度(A)值、克隆数、迁移数、侵袭数及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低/减少(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-767-3p组SiHa细胞miR-767-3p表达水平显著升高(P<0.05),A值、克隆数、迁移数、侵袭数及MMP-2、MMP-2蛋白表达水平显著降低/减少(P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-hsa_circ_0011946组SiHa细胞miR-767-3p表达水平显著降低(P<0.05),hsa_circ_0011946表达水平显著升高(P<0.05)。共转染miR-767-3pmimics和WT-hsa_circ_0011946的SiHa细胞相对荧光素酶活性低于共转染miR-NC和WT-hsa_circ_0011946(P<0.05)。hsa_circ_0011946与miR-767-3p直接特异性结合。与anti-miR-NC+si-hsa_circ_0011946组比较,anti-miR-767-3p+si-hsa_circ_0011946组SiHa细胞miR-767-3p表达水平显著降低(P<0.05),A值、克隆数、迁移数、侵袭数及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著升高/增加(P<0.05)。结论干扰hsa_circ_0011946通过靶向上调miR-767-3p抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

宫颈癌患者淋巴结转移的危险因素分析及血清TFF3、AIF-1、S100-A11、DKK1预测价值分析

目的 探讨宫颈癌患者淋巴结转移的危险因素分析及血清三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)、同种异体移植物炎性因子-1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)、S100钙结合蛋白-A11(S100 calcium-binding protein-A11,S100-A11)、Wnt通路抑制因子Dickkopf-1(Wnt pathway inhibitor Dickkopf-1,DKK1)的预测价值。方法 选择2021年1月—2023年1月本院收治的71例宫颈癌患者作为研究对象,根据患者有无盆腔淋巴结转移分为淋巴结转移阳性组(28例)和淋巴结转移阴性组(43例)两组。收集两组患者临床病理特征,并检测血清TFF3、AIF-1、S100-A11、DKK1水平。结果 单因素分析显示,FIGO分期、宫旁浸润、肌层浸润、血清TFF3、S100-A11、DKK1是患者发生宫颈癌淋巴结转移的影响因素(P<0.05)。与年龄、分化程度、肿瘤大小、组织学类型、脉管浸润及血清AIF-1无关(P>0.05);Logistic多元回归分析显示,FIGO分期、宫旁浸润、肌层浸润及血清TFF3是影响宫颈癌淋巴结转移的独立因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,TFF3对淋巴结转移有中等预测价值(AUC=0.649),明显大于机会参考线下面积(P<0.05)。而AIF-1、S100-A11、DKK1对淋巴结转移无预测价值(AUC分别为0.477、0.517、0.524),与机会参考线下面积比较无统计学意义(P>0.05)。结论 FIGO分期高、宫旁浸润、肌层浸润、血清TFF3异常升高是宫颈癌淋巴结转移的危险因素,血清TFF3有望成为预测宫颈癌淋巴结转移的新标志物;血清AIF-1、S100-A11、DKK1对宫颈癌淋巴结转移的预测效能不理想。

三阴性乳腺癌组织中微RNA-331-3p和跨膜蛋白119水平变化与临床预后的相关性

目的探究三阴性乳腺癌(TNBC)组织中微RNA-331-3p(miR-331-3p)和跨膜蛋白119(TMEM119)水平变化与临床预后的相关性。方法选取2017年1月至2019年1月在信阳市中心医院行手术治疗的98例TNBC病人的癌组织以及癌旁组织,分别作为TNBC组和癌旁组。在术后3年对所有病人进行随访,分为预后良好组为23例,预后不良组为75例。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-331-3p和TMEM119的表达水平;采用Pearson法分析TNBC组织中miR-331-3p和TMEM119表达水平的相关性;分析miR-331-3p和TMEM119水平与TNBC病人预后的关系;影响TNBC病人预后的影响因素采用Cox回归的方法进行分析。结果TNBC组TMEM119(1.53±0.24)的表达水平与癌旁组相比(1.01±0.13)显著上升,miR-331-3p(0.74±0.13)的表达水平与癌旁组(1.02±0.11)相比显著下降(t=41.53、41.53,P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,miR-331-3p和TMEM119表达水平呈负相关关系(r=−0.49,P<0.001)。miR-331-3p和TMEM119表达水平与肿瘤长径、TNM分期、腋窝淋巴结转移有关(P<0.05)。miR-331-3p高表达组病人3年内生存率16/49(32.65%)高于低表达组7/49(14.29%);TMEM119高表达组病人3年内生存率4/49(8.16%)低于低表达组19/49(38.78%)(Z=4.60,P=0.032;Z=12.78,P<0.001)。预后不良组miR-331-3p(0.65±0.13)表达水平与预后良好组(1.03±0.12)相比显著降低,TMEM119(1.69±0.27)表达水平与预后良好组(1.02±0.14)相比显著升高(t=38.74、33.30,P<0.05)。结果显示,TNM分期(HR=5.88)、miR-331-3p(HR=2.45)和TMEM119(HR=2.86)表达水平是影响TNBC病人预后的危险因素(P<0.05)。结论TNBC病人癌组织中miR-331-3p低表达,TMEM119高表达,二者水平与预后评估密切相关。

circLRP6靶向miR-2116-3p促进皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨环状RNA低密度脂蛋白受体相关蛋白(circLRP)6对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法收集39例皮肤鳞状细胞癌组织和癌旁组织,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测组织中circLRP6和miR-2116-3p表达。体外培养皮肤鳞状细胞癌细胞A431,分别转染si-circLRP6、miR-2116-3p mimics、共转染si-circLRP6与anti-miR-2116-3p后,采用CCK-8和克隆形成实验、划痕实验、Transwell、Western印迹法分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。验证circLRP6和miR-2116-3p的关系。结果皮肤鳞状细胞癌组织中circLRP6表达较癌旁组织明显增高,miR-2116-3p表达较癌旁组织明显下降(P<0.05)。下调circLRP6或上调miR-2116-3p可明显降低A431细胞增殖活性、划痕愈合率和侵袭细胞数及MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05)。结论circLRP6靶向负调控miR-2116-3p,下调miR-2116-3p可减弱敲低circLRP6对A431细胞的影响。circLRP6靶向下调miR-2116-3p促进皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、迁移和侵袭。

益智仁-乌药药对调控PI3K/Akt/mTOR通路介导细胞自噬保护肾小球足细胞的作用机制研究

目的研究益智仁-乌药药对通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路促进足细胞自噬治疗糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)的作用。方法60只造模成功的C57BL/KSJ-db/db(以下简称db/db)小鼠随机分为模型组、二甲双胍组、缬沙坦组、益智仁-乌药药对(低、中、高剂量)组,每组10只;另取10只C57BL/KSJ-db/m(以下简称db/m)小鼠为正常组,正常组和模型组给予生理盐水,治疗组小鼠分别给予相应药物,给药8周后检测小鼠肾脏病理学改变,足细胞自噬体数量、结构及相关蛋白表达。结果与模型组相比,益智仁-乌药药对组可显著减轻糖尿病肾病小鼠肾小球基底膜增厚情况,增加足细胞自噬体数量,显著升高自噬相关蛋白表达(P<0.05),降低PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达(P<0.05)。其中益智仁-乌药药对高剂量组各指标改善优于益智仁-乌药低、中剂量组。结论益智仁-乌药药对通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路激活,提高足细胞自噬水平,减轻足细胞损伤,发挥治疗糖尿病肾病的作用。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

自拟平衡针灸通过调控PI3K-AKT信号通路及血清GABA水平对老年失眠的治疗作用

目的探讨自拟平衡针灸通过调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)信号通路及血清氨基丁酸(GABA)水平对老年失眠的治疗作用。方法以老年失眠患者120例作为研究对象,按照随机分组原则分为研究组及对照组,各60例。两组均采取阿普唑仑进行治疗,研究组在此基础上联合采取自拟平衡针灸进行治疗,两组均治疗4 w。比较两组治疗效果、临床改善指标、PI3K-AKT信号通路及GABA、多导睡眠监测仪指标、睡眠质量之间的差异。结果研究组治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组睡眠潜伏期、睡眠总时间及觉醒次数均显著改善,且研究组睡眠潜伏期、觉醒次数显著低于对照组(P<0.05),睡眠总时间显著高于对照组(P<0.05)。两组PI3K、AKT及GABA均显著改善,且研究组PI3K、AKT显著低于对照组,GABA显著高于对照组(P<0.05)。两组总睡眠时间(TST)、睡眠效率(SE),第一(TS1)、二(TS2)、三(TS3)及四期(TS4)睡眠、快速眼动睡眠时间(REM)、觉醒期时间(WASO)、睡眠潜伏期时间(SL)均显著改善,且研究组以上指标改善均显著优于对照组(P<0.05)。两组日间功能障碍、睡眠质量、睡眠时间、睡眠障碍及入睡时间均显著改善,且研究组日间功能障碍、睡眠质量、睡眠时间、睡眠障碍及入睡时间显著优于对照组(P<0.05)。结论自拟平衡针灸通过调控PI3K-AKT信号通路及血清GABA水平,有效降低局部炎性反应,优化神经系统的递质传递,有效改善患者的治疗效果。

LncRNA GATA3-AS1通过调控miR-362-3p/FABP5轴抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探究长链非编码RNA GATA3反义RNA 1(lncRNA GATA3-AS1)调控微小RNA-362-3p(miR-362-3p)表达对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测宫颈癌细胞中lncRNA GATA3-AS1、miR-362-3p、FABP5表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA GATA3-AS1和miR-362-3p的靶向关系、miR-362-3p和FABP5的靶向关系;将细胞分为pcDNA-NC组、pcDNA-GATA3-AS1组、si-NC组、si-GATA3-AS1组、si-GATA3-AS1+inhibitor-NC组、si-GATA3-AS1+miR-362-3p inhibitor组、miR-NC组、miR-362-3p mimics组、miR-362-3p mimics+pcDNA-NC组、miR-362-3p mimics+pcDNA FABP5组;Western blot检测蛋白表达;EdU法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移侵袭。结果:在宫颈癌细胞系中,GATA3-AS1、FABP5均为高表达,miR-362-3p均为低表达,选择HeLa细胞进行后续实验;双荧光素酶报告基因实验表明,lncRNA GATA3-AS1和miR-802、miR-362-3p和FABP5具有靶向关系;与pcDNA-NC组比较,pcDNA-GATA3-AS1组Hela细胞EdU阳性率、迁移侵袭及MMP-2、MMP-9表达明显上升(P<0.05);与si-NC组比较,si-GATA3-AS1组HeLa细胞EdU阳性率、迁移侵袭及MMP-2、MMP-9表达明显下降(P<0.05);抑制miR-362-3p表达或过表达FABP5均可以明显逆转沉默GATA3-AS1或过表达miR-362-3p对于HeLa细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:沉默GATA3-AS1可以靶向上调miR-362-3p表达,抑制FABP5表达,抑制宫颈癌HeLa细胞增殖迁移及侵袭。

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠NLRP3信号通路IL-1β、IL-18表达的影响

目的探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠NLRP3信号通路白细胞介素(IL)-1β、IL-18表达的影响。方法从40只SD大鼠随机选取10只作为正常组,其余大鼠自由饮用5%硫酸葡聚糖溶液7 d制备UC大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、柳氮磺吡啶组和健脾益肠散组,每组10只。健脾益肠散组和柳氮磺吡啶组予相应药液灌胃,正常组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续14 d。观察大鼠一般状况,并进行疾病活动指数(DAI)评分,ELISA检测大鼠血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(Caspase-l)含量,免疫组化染色、Western blot和RT-PCR检测结肠组织IL-1β、IL-18蛋白及mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠一般状况较差,DAI评分显著升高(P<0.01),血清NLRP3、ASC、Caspase-l含量显著增加(P<0.01),结肠组织IL-1β、IL-18蛋白和mRNA表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,健脾益肠散组和柳氮磺嘧啶组大鼠一般状况明显好转,DAI评分显著降低(P<0.01),血清NLRP3、ASC、Caspase-l含量明显减少(P<0.05,P<0.01),结肠组织IL-1β、IL-18蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论健脾益肠散可抑制NLRP3信号通路IL-1β、IL-18表达,改善结肠免疫炎症损伤,发挥治疗UC作用。

黄芪阳和汤调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路促进糖尿病足溃疡大鼠创面愈合

目的基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核因子-κB(NF-κB)信号通路探究黄芪阳和汤对糖尿病足溃疡(DFU)大鼠创面愈合的影响。方法构建DFU大鼠模型,将建模成功的48只大鼠随机分为模型组,黄芪阳和汤低(8.5 g/kg)、高(17 g/kg)剂量组,黄芪阳和汤高剂量(17 g/kg)+LY294002(PI3K/AKT通路抑制剂,0.3 mg/kg)组;每组12只;另取12只大鼠为对照组。各组大鼠给予对应药物干预,连续4周。第14、28天给药后,观察大鼠一般状态及创面变化,计算创面愈合率,检测大鼠空腹血糖(FBG)水平和大鼠创面周围组织经皮氧分压(TcpO2);酶联免疫吸附试验检测大鼠血清血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-6水平;苏木素-伊红染色观察大鼠创面组织病理学变化;免疫组织化学染色测定大鼠创面组织微血管密度;蛋白免疫印迹法检测大鼠创面组织中PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达。结果对照组大鼠毛色光滑,饮食、饮水、排泄均正常,较活跃,创面愈合快,创面组织炎症反应较轻,新生血管较多,肉芽组织中成纤维细胞及胶原基质丰富;模型组大鼠毛色暗淡无光泽,活动减少,且出现多饮、多食、多尿症状,创面颜色较深,且周围组织出现水肿、溃疡,创面组织可见大量炎性细胞浸润,伴组织坏死、渗出,新生血管及成纤维细胞较少,创面愈合率、创面周围组织TcpO2、血清VEGF、HIF-1α、创面组织微血管密度、p-PI3K、p-AKT、IκB-α蛋白表达水平降低,FBG、血清CRP、IL-6、创面组织p-NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,黄芪阳和汤低、高剂量组大鼠状态逐渐改善,创面组织病变程度依次减轻,创面愈合率、创面周围组织TcpO2、血清VEGF、HIF-1α、创面组织微血管密度、p-PI3K、p-AKT、IκB-α蛋白表达水平依次升高,FBG、血清CRP、IL-6、创面组织p-NF-κB p65蛋白表达依次降低(P<0.05);LY294002能部分逆转高剂量黄芪阳和汤对DFU大鼠的治疗作用(P<0.05)。结论黄芪阳和汤能调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路,抑制DFU大鼠炎症反应,促进血管新生,从而促进创面愈合。