异病同治法治疗月经病实寒证临床分析

目的:观察加减温经汤异病同治治疗月经病实寒证的临床疗效,并对其结果进行分析,以探讨异病同治的内涵。方法:用前瞻性研究方法,制定统一的纳入标准、诊断标准及疗效判定标准,对不同的病种给药方法、手段、时间一致,进行临床观察。结果:痛经临床治愈25例,有效32例;月经后期临床治愈7例,有效8例,无效2例;月经过少临床治愈3例,有效4例,无效4例;闭经临床治愈1例,有效1例,无效11例。总有效率为82·65%。各病种之间疗效比较,差异有显著性(P<0·05)。结论:痛经疗效最好,其次为月经后期、月经过少,闭经疗效最差。异病同治还需根据不同疾病的特点加减用药或延缩治疗时间。

益肾温经汤对肾阳虚型排卵障碍大鼠一般状况、血清生殖激素及卵巢形态学的影响

目的:观察益肾温经汤对氢化可的松致排卵障碍大鼠相关指标的影响,探讨其治疗肾阳虚型排卵障碍性疾病的作用机制。方法:建立氢化可的松致排卵障碍大鼠模型,分为模型组、低剂量治疗组、高剂量治疗组、金匮肾气丸对照组,并设空白对照组。观察大鼠一般情况,阴道脱落细胞涂片,采用HE染色观察卵巢组织形态学变化,采用放免法检测并用统计软件包SPSS13.0分析血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平。结果:益肾温经汤可改善肾阳虚型排卵障碍大鼠一般状况使其体质量增加,升高血清E2、P水平,改善病理状态下的卵巢的形态结构。结论:提示益肾温经汤可通过提高血清E2、P水平促进卵泡发育。

基于标准汤剂参比的温经汤颗粒提取、浓缩、干燥过程成分传递的考察

目的:考察温经汤颗粒提取、浓缩、干燥过程成分传递,探究经典名方向现代产品转化的制备工艺研究方法。方法:以温经汤标准汤剂为基准,以浸膏率、主要成分含量、特征图谱为指标,采用高效液相色谱法(HPLC)考察提取、浓缩、干燥过程中的成分变化。结果:与标准汤剂相比,提取液中所有成分含量均高于标准汤剂,指纹图谱相似度>0.90;与提取液相比,除了桂皮醛和丹皮酚外,其他指标成分浓缩时传递率为(92.16±7.85)%、干燥时传递率为(83.91±6.57)%。结论:以标准汤剂为参比的温经汤颗粒制备工艺研究方法合理可行,能保证现代产品与传统制剂质量与药效的一致性。

温经汤、艾附暖宫丸药理作用的比较研究

温经汤和艾附暖宫丸能减少醋酸所致小鼠扭体反应次数，延长扭体反应出现的时间，温经汤的作用略强于艾附暖宫丸；二者皆能提高小鼠在冷水中的游泳时间，作用相当；温经汤能显著降低血瘀动物模型的ＲＢＣ压积、全血粘度、纤维蛋白粘度、血浆粘度，作用显著强于艾附暖宫丸；二者对小鼠急性大出血引起的“血虚”模型有较强的补血作用，作用相当。

转换波长HPLC法同时测定温经汤颗粒多成分含量方法的建立

目的:采用转换波长高效液相色谱(HPLC)法建立同时测定温经汤颗粒中多种成分含量的方法。方法:Kromasil C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,转换波长法检测8种成分含量(0~25 min测定芍药内酯苷、芍药苷、β-蜕皮甾酮、甘草苷、阿魏酸的含量,波长为240 nm;25~65 min测定甘草素、肉桂酸、甘草酸铵的含量,波长为280 nm),柱温30℃。结果:8种成分在各自范围内具有良好线性关系(r≥0.9995),精密度、重复性相对标准偏差(RSD)<2%,在24 h内稳定性较好(RSD<2.5%),平均回收率均在98.53%~100.10%,RSD均在0.98%~2.16%。结论:转换波长HPLC法能够较准确地同时测定温经汤颗粒中8种成分的含量。

基于调控HIF-1α表达探讨温经汤改善大鼠子宫内膜异位症的机制

目的:观察温经汤对子宫内膜异位症(EMs)大鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达及线粒体超微结构的影响,探讨温经汤治疗EMs的作用机制。方法:采用自体内膜移植法复制大鼠EMs模型,小动物超声成像系统检测异位病灶体积,依据体积均衡原则随机分为模型组、温经汤低、中、高剂量组(4.85,9.7,19.4 g·kg-1)及孕三烯酮组(0.25 mg·kg-1),每组10只,另设假手术组10只。药物治疗6周后,超声成像系统及卡尺分别测量异位病灶体积,苏木素-伊红(HE)染色观察异位内膜组织形态,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测腹腔液白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测在位或异位内膜组织HIF-1αmRNA及蛋白表达,透射电镜观察异位内膜线粒体超微结构。结果:与假手术组比较,模型组可见异位病灶生成,呈囊泡样结构,病灶内可见典型的子宫内膜组织形态,IL-1β,TNF-α,TGF-β1含量显著升高(P<0.01),HIF-1αmRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),透射电镜可见异位内膜胞浆中线粒体数量增加,结构完整;与模型组比较,温经汤各剂量组异位病灶体积显著降低(P<0.01),且超声检测结果与卡尺测量结果大体一致,HE染色可见异位内膜柱状上皮细胞破损或脱落、间质细胞疏松;温经汤各剂量组TNF-α含量明显降低,温经汤中、高剂量组IL-1β,TGF-β1含量明显降低(P<0.05,P<0.01);温经汤各剂量组还可明显降低HIF-1αmRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01);且温经汤治疗后异位内膜线粒体明显肿胀,嵴断裂甚至消失,部分线粒体空泡变性,外膜破裂。结论:温经汤对大鼠实验性EMs具有较好的治疗作用,机制与降低HIF-1α表达,改善异位病灶乏氧,诱导异位内膜线粒体损伤有关。

经典名方温经汤的基准样品特征图谱分析

目的:建立温经汤基准样品特征图谱。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),建立温经汤基准样品的HPLC特征图谱分析方法,在此基础上,分别采用同一品牌多根色谱柱和4种不同品牌色谱柱,3个不同厂家仪器进行了系统适应性考察,计算相对保留时间,统计不同色谱柱、不同仪器的相对保留时间偏差,并对该方法进行方法学考察。采用超高效液相色谱-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MSn)对温经汤基准样品成分进行鉴别,色谱条件为ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~2.8 min,10%A;2.8~8.0 min,10%~18%A;8.0~12.2 min,18%~25%A;12.2~15.3 min,25%~40%A;15.3~17.4 min,40%A;17.4~20.5 min,40%~90%A),流速0.4 mL·min-1,柱温30℃。质谱条件为电喷雾离子源,正、负离子模式扫描,检测范围m/z 50~1600。结果:共选取了10个共有特征峰,通过对照品比对,指认了其中8个,分别为芍药苷(1号峰),芹糖甘草苷(2号峰),甘草苷(3号峰),阿魏酸(4号峰),甘草素(6号峰),桂皮醛(8号峰),丹皮酚(9号峰)和甘草酸(10号峰)。通过质谱分析,共鉴定了30个化合物,主要包括甘草三萜皂苷类和黄酮类、人参中人参皂苷类、白芍中单萜苷类和鞣质类、牛膝中甾酮类、当归中酚酸类成分。结论:所建立的温经汤特征图谱分析方法简便稳定、重复性好,通过质谱指认及来源归属,基本明确了温经汤基准样品的物质基础,可为后续温经汤的开发和质量控制提供参考依据。

温经汤对子宫内膜异位症患者异位内膜间质细胞HIF-1α表达及线粒体功能的调控作用

目的:从调控低氧应激及线粒体功能角度探讨温经汤防治子宫内膜异位症(EMT)的作用机制。方法:采用消化法原代培养EMT患者异位子宫内膜间质细胞(ESCs),实验设正常(Control)组、5%空白血清(5%KBXQ)组、10%空白血清(10%KBXQ)组、5%温经汤血清(5%WJTXQ)组、10%温经汤血清(10%WJTXQ)组。噻唑蓝(MTT)比色法检测不同组ESCs增殖情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA及蛋白表达,透射电镜观察ESCs线粒体超微结构,高内涵分析(HCS)法多参数同时检测细胞线粒体功能[线粒体膜电位,线粒体膜电位(MMP)和细胞色素C(Cyt C)表达]及细胞凋亡情况(细胞膜通透性、细胞核荧光强度、细胞核大小及细胞数量),流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2和剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果:与Control组比较,5%KBXQ和10%KBXQ组细胞活力显著增加(P<0.01);HIF-1αmRNA及蛋白表达水平无明显变化;透射电镜观察可见线粒体嵴明显,线粒体内外膜清晰;HCS多通道荧光染色显示,MMP及Cyt C表达、细胞膜通透性无显著变化,细胞核呈现均匀淡染;细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达及Bax/Bcl-2值均无明显变化。与Control组及相应体积分数KBXQ组比较,5%WJTXQ及10%WJTXQ组细胞活力显著下降(P<0.01);HIF-1αmRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);线粒体超微结构破坏,部分线粒体肿胀,嵴模糊;MMP显著降低,Cyt C释放量明显增加(P<0.05,P<0.01);细胞膜通透性显著增加(P<0.01),并可观察到核固缩、核内DNA凝集、细胞数量下降等凋亡特征(P<0.05,P<0.01);流式细胞术结果显示,细胞凋亡率显著升高(P<0.01),与HCS分析结果一致;且cleaved Caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2值明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:温经汤能够下调异位ESCs中HIF-1α表达而改善低氧应激,抑制细胞增殖,降低线粒体生物活性,诱导细胞凋亡,这可能是其防治EMT的作用机制。

经典名方温经汤的处方考证和临床应用研究概况

针对经典名方温经汤进行处方考证及临床应用研究总结,为该方的物质基准制定及复方制剂开发提供参考依据;通过系统整理相关医书古籍及现代文献报道,结合经典名方复方制剂开发的有关政策要求,对目前存在的疑义问题进行阐述并提出建议。宋·陈自明《妇人大全良方》所载温经汤由9味药组成,其组方药材基原及药用部位选用与2020年版《中国药典》收载品种基本保持一致,其中芍药选用白芍(芍药Paeonia lactiflora的干燥根),桂心选用肉桂Cinnamomum cassia的干燥树皮,莪术选用蓬莪术Curcuma phaeocaulis的干燥根茎;饮片建议选用生品,并参照2020年版《中国药典》收载方法炮制;剂量按照1两=40 g折算,当归、川芎、白芍、肉桂、牡丹皮、莪术用量各20 g,人参、甘草、牛膝各40 g,处方总量为240 g;所有处方药味分别粉碎成粒度<6 mm后混合,每服剂量20 g,加水525 mL,煎至280 mL,滤后温服,每日1服。古籍记载温经汤功效为活血调经、温经散寒,现代临床主要用于治疗痛经、月经不调等疾病,其对子宫内膜异位症、盆腔炎以及痤疮、湿疹等皮肤病也有一定的疗效。通过研究明确了温经汤出处历史沿革、处方药味基原、炮制方法、剂量折算、制法及用法、临床应用等内容,可为该经典名方的后期开发与应用提供参考依据。

温经汤对寒凝血瘀型原发性痛经患者血清PAF及β-内啡肽的影响

目的:观察温经汤对寒凝血瘀型原发性痛经患者血清血小板活化因子(PAF)以及β-内啡肽影响。方法:选取2016年3月至2017年12月黑龙江中医药大学附属第二医院收治的120例痛经患者为研究对象,患者按随机数字法被分成对照组和观察组,各60例。对照组患者服用布洛芬缓释胶囊,观察组在对照组基础上服用温经汤。对比两组患者治疗前及治疗后的痛经症状积分、临床疗效、血清PAF和β-内啡肽水平和复发情况。结果:治疗后,两组患者痛经症状评分均下降,且观察组患者评分均低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组患者总有效率95.00%,高于对照组的83.33%(P<0.05)。与本组治疗前比较,治疗后两组患者血清PAF水平下降,且观察组患者血清PAF低于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较,两组治疗后血清β-内啡肽水平上调,且治疗后观察组血清β-内啡肽高于对照组(P<0.05);半年后随访,观察组患者复发3例,复发率为5%;对照组复发18例,复发率为30%。观察组复发率与对照组相比显著降低(χ^2=12.987,P<0.01)。结论:温经汤治疗寒凝血瘀型原发性痛经能有效降低痛经症状积分,改善临床症状,降低血清PAF水平,上调β-内啡肽浓度,减少复发率,改善患者生活质量,值得推广。

麻桂温经汤加味联合关节松动术治疗肩周炎血虚寒凝证的临床观察

目的:探讨麻桂温经汤加味联合关节松动术治疗肩周炎血虚寒凝证的临床疗效以及对血流动力学和血清疼痛介质的影响。方法:筛选2016年7月至2018年7月在天津市宁河区医院诊治的肩周炎患者共有120例,按随机数字表法将患者分为对照组和观察组,每组60例。对照组患者接受关节松动术治疗,每日1次,口服塞来昔布胶囊。观察组在接受关节松动术治疗的基础采取麻桂温经汤加味内服,1剂/d,2次/d。两组患者连续治疗4周后,比较患者的主观疼痛程度McGill疼痛问卷(SF-MPQ)评分,肩关节活动度血流动力学变化,以及血清前列腺素E2(PGE2),P物质(SP),五羟色胺(5-HT)水平和临床疗效。结果:与本组治疗前比较,治疗4周后两组患者的视觉疼痛评分(VAS),现在疼痛状况(PPI),疼痛评级指数(PRI)评分明显降低,且观察组显著低于对照组(P<0.01),肩关节活动范围明显高于对照组(P<0.01);与本组治疗前比较,治疗4周后两组患者的红细胞沉降率(ESR),纤维蛋白原(Fb),全血黏度以及血清PGE2,SP,5-HT水平显著降低(P<0.01),且观察组显著优于对照组(P<0.01);观察组临床总有效率为96.61%(57/59),明显高于对照组的82.76%(48/58)(χ^2=4.685,P<0.05)。结论:麻桂温经汤加味联合关节松动术治疗肩周炎血虚寒凝证,能有效改善患者的疼痛、肩关节活动度,提高疗效,改善患者的血流动力学和下调疼痛介质PGE2,SP,5-HT水平可能与其疗效有关。

温经汤加味对EM肾虚血瘀型大鼠JAK2/STAT3信号通路及其下游因子的影响

目的:探讨温经汤加味对子宫内膜异位症(EM)肾虚血瘀型大鼠的治疗作用及其机制研究。方法:从105只SPF级雌性未孕健康SD大鼠中随机选取10只作为空白组,余采用复合因素法构建肾虚血瘀型大鼠模型,造模成功后随机抽取10只为假手术组,仅开腹,不缝内膜,余采用自体内膜移植法构建EM肾虚血瘀型大鼠模型。从造模成功的56只大鼠中随机选取50只大鼠随机分为模型组、达那唑组(63 mg·kg^(-1))及温经汤加味低、中、高剂量组(5,10,20 g·kg^(-1)),每组10只,每日灌胃1次,连续4周。取各组内膜组织进行苏木素-伊红(HE)染色,观察组织病理变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组血清上清液中白细胞介素-10(IL-10),白细胞介素-17(IL-17)含量;测量治疗前后各造模组异位灶长(D1),宽(D2),高(D3),并计算异位灶体积;免疫组化(IHC)检测各组大鼠内膜组织中Janus激酶2(JAK2),信号转导与转录活化因子3(STAT3),磷酸化STAT3(p-STAT3),血管内皮生长因子(VEGF),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),血小板反应素-1(TSP-1)蛋白表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测VEGF,TNF-α以及TSP-1蛋白表达情况。结果:镜下病理观察可见空白组大鼠子宫内膜腺体细胞排列整齐,腺体及间质细胞生长良好;与空白组比较,模型组子宫内膜结构完整,呈子宫腔状或环形封闭式结构,内有囊肿形成,上皮为立方状或柱状上皮,大部分上皮细胞有分泌现象,间质致密,基质呈少许纤维化,血管增生密集,并可见到少量腺体及炎细胞浸润。与空白组比较,模型组血清中IL-10含量显著降低(P<0.01),IL-17含量显著升高(P<0.01);模型组内膜组织中JAK2,STAT3,p-STAT3,VEGF,TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.05),TSP-1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,温经汤加味各剂量组大鼠血清中IL-10含量显著升高(P<0.01),IL-17含量显著降低(P<0.01),异位灶体积显著减小(P<0.01);温经汤加味高、中剂量组内膜组织中JAK2,STAT3,p-STAT3,TNF-α,VEGF蛋白水平均明显降低(P<0.05),TSP-1蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论:温经汤加味具有抑制EM肾虚血瘀型大鼠异位灶侵袭作用,其机制可能与干预JAK2/STAT3信号通路过度激活所介导的免疫屏障、阻断微血管新生功能有关。

温经汤加味对EM肾虚血瘀证大鼠局部微环境Caspase-8,MMP-9,E-cadherin,N-cadherin的影响

目的:探讨温经汤加味对子宫内膜异位症(EM)肾虚血瘀证大鼠的干预作用及其机制研究。方法:SPF级雌性未孕大鼠随机选出正常组,其余大鼠采用"冰水浸泡+皮下注射盐酸肾上腺素法"进行肾虚血瘀证造模,造模结束后,仅开腹不进行内膜移植大鼠,设为假手术组,其余大鼠以自体内膜移植法进行EM造模,EM肾虚血瘀证造模成功大鼠随机分为阳性药组及温经汤加味(中药)低、中、高剂量组。中药低、中、高剂量组分别以5,10,20 g·kg^(-1)灌胃,每日给药1次,连续4周;阳性药选取达那唑63 mg·kg^(-1)灌胃,每日给药1次,连续4周。4周后,取各组大鼠内膜组织(异位、在位)进行苏木素-伊红(HE)染色,观察其组织病理学变化;免疫组化(IHC)法、蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)及神经钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Caspase-8,MMP-9,E-cadherin,N-cadherin mRNA表达。结果:经IHC法和Western blot法,与假手术组比较,EM肾虚血瘀证模型组大鼠在位、异位内膜组织中MMP-9,N-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.01),Caspase-8,E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,达那唑组、中药低、中、高剂量组大鼠在位、异位内膜组织中MMP-9,N-cadherin蛋白明显降低(P<0.05,P<0.01),Caspase-8,E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。经Real-time PCR法检测,与假手术组大鼠比较,模型组大鼠在位、异位内膜组织中MMP-9,N-cadherin mRNA表达显著升高(P<0.01),Caspase-8,E-cadherin mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组大鼠在位内膜比较,达那唑组、中药高、中剂量组在位、异位内膜组织MMP-9,N-cadherin mRNA表达明显降低,Caspase-8,E-cadherin mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:温经汤加味能够通过调节Caspase-8,MMP-9,E-cadherin,N-cadherin等因子水平异常表达,改善EM肾虚血瘀证大鼠免疫抑制、阻断微血管新生,从而起到治疗EM的作用;以上微观指标的变化有望成为体现疾病(EM),证候(肾虚血瘀证)及病理机制(免疫抑制、微血管新生)的重要标志物。