猪表皮生长因子在大肠杆菌中的表达

采用RT-PCR方法从猪肾脏皮质组织中扩增出pEGF基因,将其连接到克隆载体pMD18-T上,经测序鉴定正确后,再克隆到原核表达载体pET-41 a(+)上,构建重组表达质粒pET-EGF.用重组质粒转化E.coliBL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE电泳和W estern-b lotting对GST-EGF融合蛋白进行分析,结果表明37℃诱导表达的融合蛋白含量较高,占菌体总蛋白的20.2%;30℃诱导表达的可溶性融合蛋白含量较高,占菌体总蛋白的7.7%.

从凋亡信号通路探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的机制

为探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的分子机制 ,采用热休克对原代培养的新生大鼠心肌细胞进行预处理 ,以诱导热休克蛋白的表达 ,观察热休克蛋白对过氧化氢所致心肌细胞凋亡的保护作用。结果发现 ,热休克预处理导致心肌细胞热休克蛋白 70及αB 晶状体蛋白表达明显增加 ,同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放 ,抑制Caspase 8、Caspase 9和Caspase 3活化及随后的心肌细胞凋亡。以上结果提示 ,热休克蛋白通过抑制线粒体信号通路与死亡受体通路的活化保护过氧化氢导致的心肌细胞凋亡 。

鸡p15^INK4B蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

用制备并纯化的鸡p15INK4B蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了p15INK4B蛋白的单克隆抗体,并进行了鉴定。结果表明:2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1C6和3F5分别属于IgG1和IgM抗体亚类;培养上清的效价分别为1∶820和1∶680,腹水的效价分别为1∶4×106和1∶7×105;2株单克隆抗体亲和力常数分别为3.13×109L/mol(1C6)和1.24×108L/mol(3F5),相对亲和力1C6>3F5,且具有不同的抗原识别位点;Western-blot鉴定表明,1C6和3F5这2株单克隆抗体均能与原核表达纯化的和杆状病毒表达的p15INK4B蛋白结合,而不与其他蛋白结合,说明本研究成功制备了鸡p15INK4B的单克隆抗体,可作为深入研究鸡p15INK4B蛋白的功能提供特异的抗体材料。

脓毒症大鼠肺组织c-FLIP的变化及乌司他丁对c-FLIP的影响

目的观察脓毒症大鼠的肺组织中c-FuP的变化情况，并探讨乌司他丁对c-FLIP水平的影响。方法将30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机（随机数字法）分为假手术组（Sham组）、脓毒症模型组（CLP组）及乌司他丁治疗组（UTI组），每组10只。Sham组不结扎穿刺盲肠，余同CLP组；CLP组采用盲肠结扎并穿刺法造模；UTI组造模后立即经阴茎静脉注射乌司他丁注射液（50000U／kg）。12h后处死大鼠并采取肺组织，光镜下观察形态学变化；Western-Blot法检测c-FLIP蛋白表达，RT-PCR法检测c-FLIP基因表达。应用SPSS11．5进行统计学分析，多组比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。结果脓毒症组光镜下肺泡腔内中性粒细胞和大量红细胞渗出，c-FLIP蛋白和基因表达较假手术组显著降低（P〈0．05）；用乌司他丁治疗后，光镜下病理改变减轻，c-FLIP蛋白和基因表达较脓毒症组显著升高（P〈0．05）。结论脓毒症中c-FLIP在肺组织中的表达下降，提示肺组织的细胞凋亡增加。乌司他丁能上调脓毒症大鼠肺组织中c-FLIP的表达。