猪传染性胸膜肺炎放线杆菌APX Ⅱ基因特异片段的克隆和表达

将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌APXⅡ的一段毒素基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET-APXⅡ,并将其转化到受体菌BL21中,诱导剂IPTG进行诱导表达,4 h后达到高峰。经12%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的融合蛋白大小约为31 kD。经Western blotting分析,表达蛋白能与APP阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应,说明该表达蛋白具有免疫原性,这为下一步用此表达蛋白作为抗原,对APP进行诊断试剂的研制和基因工程疫苗的研究提供科学依据。

洛伐他汀对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶3表达的影响

观察洛伐他汀对兔血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶 3表达的影响及其作用机制。用Westernblot检测基质金属蛋白酶 3蛋白水平 ,采用电泳迁移率变动分析法测定AP 1结合活性 ,用逆转录聚合酶链反应检测基质金属蛋白酶 3mRNA水平。结果发现 ,白细胞介素 1α和血小板源生长因子BB联合作用于兔血管平滑肌细胞 ,可明显增加基质金属蛋白酶 3的表达 ,洛伐他汀抑制这种刺激作用 ,使基质金属蛋白酶 3的表达减低 ,且呈浓度依赖性 ;该抑制作用可被甲羟戊酸和双香叶酯基焦磷酸盐所逆转 ,而不被角鲨烯所逆转。白细胞介素 1α和血小板源生长因子BB联合作用后使兔血管平滑肌细胞AP 1结合活性和基质金属蛋白酶 3mRNA水平明显增高 ,洛伐他汀抑制白细胞介素 1α和血小板源生长因子BB上调AP 1结合活性的作用 ,但对基质金属蛋白酶 3mRNA水平无明显影响。结果提示 ,洛伐他汀不依赖其调脂作用抑制血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶 3的生成 。

小鼠HepA癌细胞PTEN蛋白表达及树舌多糖GF的影响

目的:探明小鼠HepA癌细胞PTEN蛋白表达及树舌多糖GF的影响。方法:昆明种小鼠随机分为三组:肿瘤组、树舌多糖组和阴性对照组。肿瘤组、树舌多糖组接种后各组肌肉注射给药,正常组和肿瘤组给与生理盐水,树舌多糖组给与树舌多糖GF;采用超速离心技术制备、SDS-PAGE分离细胞可溶性蛋白;Western blot和Dot blot技术检测各组样品PTEN蛋白的表达量。结果:树舌多糖组检测PTEN结果为阳性,肿瘤组检测PTEN结果为阴性。结论:树舌多糖GF抗肿瘤的作用靶点之一可能为抑癌基因PTEN。

MDM2基因扩增和蛋白表达与胃癌相关性的研究

目的:研究癌基因 mdm2在胃癌中的基因扩增和蛋白表达状况,揭示 mdm2与胃癌发生发展的相关性.方法:用 RT-PCR 和 Westernblot 方法对胃癌细胞在 mRNA、蛋白质水平上进行检测结果:mdm2的基因扩增阳性率在胃癌组织中较高,其中低分化12.5%、中分化37.5%、高分化87.5%,与正常组织比较有显著性差异(P<0.05),且与病理分级有关(P<0.05).mdm2的蛋白表达阳性率在胃癌组织中较高,其中低分化25%、中分化37.5%、高分化62.5%,与正常组织比较有显著性差异(P<0.05),与病理分级无关(P>0.05).结论:mdm2的基因扩增和蛋白过表达参与胃癌的发生发展,检测胃癌 mdm2基因扩增对估计该肿瘤的预后可能有所帮助.

接头蛋白Gab1和酪氨酸磷酸酶SHP2在50例甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义分析

[目的]探讨接头蛋白Gab1和酪氨酸磷酸酶SHP2在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义。[方法]收集2020年4月至2021年3月青岛大学附属医院收治的50例甲状腺乳头状癌患者的癌组织和癌旁组织。统计所有患者的年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移情况、肿瘤分期(TNM分期)等临床资料。应用RT-qPCR、Western blot检测20例患者的新鲜组织标本,采用免疫组化方法检测50例患者的组织石蜡切片,探讨Gab1和SHP2的表达情况和临床意义。[结果](1)RT-qPCR和Western blot显示,Gab1和SHP2在甲状腺乳头状癌组织中的表达高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫组化结果显示,Gab1和SHP2在癌组织中的表达(68.0%、64.0%)高于癌旁组织(36.0%、40.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。(3)甲状腺乳头状癌组织中Gab1和SHP2的表达与肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤大小有关(P<0.05),在有淋巴结转移、较晚的分期和较大的肿瘤直径组中表达较高。(4)Gab1和SHP2高表达与患者年龄、性别无关。(5)Spearman相关性分析显示,Gab1和SHP2在甲状腺乳头状癌中的表达呈显著正相关(r=0.468,P=0.001)。[结论]Gab1和SHP2在甲状腺乳头状癌的发生中起着促癌基因的作用,与甲状腺乳头状癌的发展、转移及恶性程度有关。Gab1和SHP2在甲状腺乳头状癌发生、发展中存在协同作用的关系。