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Expression pattern of a β_2 tubulin gene in zebrafish embryos identified by whole mount in situ hybridization 被引量:3
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作者 LI Shuhong, GUO Shaodong and SUN Fangzhen Institute of Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100080, China 《Chinese Science Bulletin》 SCIE CAS 1998年第22期1894-1898,共5页
Zebrafish is a good vertebrate model for development studies. Research on gene expression and regulation during zebrafish embryonic development plays an important role in revealing the molecular mechanism of morphogen... Zebrafish is a good vertebrate model for development studies. Research on gene expression and regulation during zebrafish embryonic development plays an important role in revealing the molecular mechanism of morphogenesis in vertebrate. Tubulin locates the cytoplasmic determinants in eggs, organizes the formation of basic cytoskeleton and controls various cell movements. There are several types of tubulin, each of which has specific expression regions and functions. In this study, the full_length cDNA of a Xenopus β 2 tubulin was used as template to generate Dig_labeled antisense RNA which was used as a probe to carry out in situ hybridization on whole mount zebrafish embryos. Under the experimental conditions, the tubulin transcript was first detected in a group of cells in embryos at the midblastula stage. With the development of the embryo, this transcript was gradually restricted to the nervous system. These results demonstrate that the expression of this β 2 tubulin gene in zebrafish embryos is neural specific. 展开更多
关键词 TUBULIN gene whole mount in situ hybridization zebrafish.
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Developmental expression of Cyclin H and Cdk7 in zebrafish: the essential role of Cyclin H during early embryo development 被引量:7
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作者 Qing Yun Liu Zhi Li Wu +2 位作者 Wen Jian Lv Yuan Chang Yan Yi Ping Li 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2007年第2期163-173,共11页
Cyclin 依赖的 kinase (Cdk7 ) 7 是激活 metazoanCdk kinase (CAK ) 的催化子单元。Cdk7 的激活与一个规章的子单元要求它的协会, Cyclin H。尽管 Cdk7/Cyclin H 建筑群在几种在 RNA 的规定被含有,他们在斑马鱼的 orthologs 的精确... Cyclin 依赖的 kinase (Cdk7 ) 7 是激活 metazoanCdk kinase (CAK ) 的催化子单元。Cdk7 的激活与一个规章的子单元要求它的协会, Cyclin H。尽管 Cdk7/Cyclin H 建筑群在几种在 RNA 的规定被含有,他们在斑马鱼的 orthologs 的精确功能充分没被阐明。在这研究,我们从斑马鱼胞胚胚胎孤立编码人的 Cyclin H 和 Cdk7 的 theorthologs 的二 cDNAs,并且在 zebrafishembryogenesis 检验了 Cdk7/Cyclin H 的角色。顺序分析证明斑马鱼 Cyclin H 和 Cdk7 cDNAs 与 65% 和 86% 身份编码蛋白质到各自的人的 orthologs。RT-PCR 并且在他们在建议的成年的鱼的未受精卵,胚胎和机关的表示的 situhybridization 分析整个山那 Cyclin H 和 Cdk7 消息是装载的似母亲。我们的数据也证明他们的抄本在整个开发被检测。抄本被发现在开发的早阶段期间无所不在并且变得的 Cyclin H 的分发限制了为前面的神经试管,大脑,眼睛,生到 5 天的纸巾,肝和心授精以后。Cyclin H 的 adominant 否定的形式的表示在早胚胎推迟了 zygotic 抄写的发作,导致在授精以后、导致的 5 个小时的 apoptosis 在通常展出 Cyclin H 的高水平的纸巾切断缺点表示。这些结果含有在 transcriptional 机械的规定的 Cyclin H 在中间的胞胚期间转移并且建议它是在早斑马鱼的必要基因幼虫的开发。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白H Cdk7 早期胚胎发育 基因表达 斑马鱼
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Correlation between photoreceptor injury-regeneration and behavior in a zebrafish model 被引量:1
3
作者 Ya-jie Wang Shi-jiao Cai +3 位作者 Jian-lin Cui Yang Chen Xin Tang Yu-hao Li 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2017年第5期795-803,共9页
Direct exposure to intensive visible light can lead to solar retinopathy, including macular injury. The signs and symptoms include central scotoma, metamorphopsia, and decreased vision. However, there have been few st... Direct exposure to intensive visible light can lead to solar retinopathy, including macular injury. The signs and symptoms include central scotoma, metamorphopsia, and decreased vision. However, there have been few studies examining retinal injury due to intensive light stimulation at the cellular level. Neural network arrangements and gene expression patterns in zebrafish photoreceptors are similar to those observed in humans, and photoreceptor injury in zebrafish can induce stem cell-based cellular regeneration. Therefore, the zebrafish retina is considered a useful model for studying photoreceptor injury in humans. In the current study, the central retinal photoreceptors of zebrafish were selectively ablated by stimulation with high-intensity light. Retinal injury, cell proliferation and regeneration of cones and rods were assessed at 1, 3 and 7 days post lesion with immunohistochemistry and in situ hybridization. Additionally, a light/dark box test was used to assess zebrafish behavior. The results revealed that photoreceptors were regenerated by 7 days after the light-induced injury. However, the regenerated cells showed a disrupted arrangement at the lesion site. During the injury-regeneration process, the zebrafish exhibited reduced locomotor capacity, weakened phototaxis and increased movement angular velocity. These behaviors matched the morphological changes of retinal injury and regeneration in a number of ways. This study demonstrates that the zebrafish retina has a robust capacity for regeneration. Visual impairment and stress responses following high-intensity light stimulation appear to contribute to the alteration of behaviors. 展开更多
关键词 nerve regeneration optic nerve injury light injury photoreceptor cell cell proliferation retinal regeneration light/dark test BEHAVIOR zebrafish PHOTOTAXIS immunohistochemistry in situ hybridization neural regeneration
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Characterization of DYRK2(dual-specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 2) from Zebrafish(Dario rerio)
4
作者 孙威 谭训刚 +2 位作者 张培军 张玉青 徐永立 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2010年第4期720-724,共5页
Proteins of the DYRK(dual-specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase) family are characterized by the presence of a conserved kinase domain and N-terminal DH box.DYRK2 is involved in regulating key developm... Proteins of the DYRK(dual-specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase) family are characterized by the presence of a conserved kinase domain and N-terminal DH box.DYRK2 is involved in regulating key developmental and cellular processes,such as neurogenesis,cell proliferation,cytokinesis,and cellular differentiation.Herein,we report that the ortholog of DYRK2 found in zebrafish shares about 70% identity with that of human,mouse,and chick.RT-PCR showed that DYRK2 is expressed maternally and zygotically.In-situ hybridization results show that DYRK2 is expressed in somite cells that will develop into muscles.Our results provide preliminary evidence for investigating the in-vivo function of DYRK2 in zebrafish muscle development. 展开更多
关键词 斑马鱼 酪氨酸 激酶 化调 磷酸 异性 表征 PCR检测
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黄鳝卵原细胞移植研究
5
作者 何坤 吴华东 +4 位作者 张士林 刘铮铮 阮记明 孙艺文 李福贵 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期315-324,共10页
【目的】明确黄鳝卵原细胞是否能迁移、整合到斑马鱼生殖嵴上,为建立黄鳝异体生殖途径打下研究基础。【方法】通过酶消化法制备黄鳝卵原细胞悬液,经PKH26标记卵原细胞后显微注射到受体斑马鱼胚胎中,在荧光显微镜下追踪受体斑马鱼胚胎中... 【目的】明确黄鳝卵原细胞是否能迁移、整合到斑马鱼生殖嵴上,为建立黄鳝异体生殖途径打下研究基础。【方法】通过酶消化法制备黄鳝卵原细胞悬液,经PKH26标记卵原细胞后显微注射到受体斑马鱼胚胎中,在荧光显微镜下追踪受体斑马鱼胚胎中供体黄鳝卵原细胞的迁移、整合及增殖情况;采用组织形态学方法检测移植受体斑马鱼胚胎的发育情况,并以半定量PCR和荧光原位杂交检测受体斑马鱼胚胎中供体黄鳝卵原细胞标记基因nanos3的表达情况。【结果】黄鳝卵巢经蛋白酶消化后,分离得到的卵原细胞悬液浓度为2.4×10^(6)个/mL,以PKH26染色后在红色荧光下呈橙黄色。荧光追踪观察结果显示,在移植后0、12、24和48 hpt的受体斑马鱼胚胎中均能检测到供体黄鳝卵原细胞,且黄鳝卵原细胞迁移至受体斑马鱼胚胎的生殖嵴上进行整合及增殖,但72 hpt受体斑马鱼出膜后荧光信号丢失。组织形态学观察结果表明,黄鳝卵原细胞注入受体斑马鱼胚胎中48 hpt后其细胞质结构松散,生殖细胞由动物极向两端迁移而分化形成组织,72 hpt和30 dpt的移植受体斑马鱼与对照组斑马鱼无明显差别。半定量PCR检测结果显示,在48 hpt受体斑马鱼胚胎中能检测黄鳝nanos3基因表达,而在72 hpt和30 hpt受体斑马鱼中表达微弱。荧光原位杂交检测结果显示,48 hpt、72 hpt和30 dpt的移植受体斑马鱼均有黄鳝nanos3基因表达。【结论】黄鳝卵原细胞在48 hpt后仍存在于受体斑马鱼胚胎内,但72 hpt后在受体斑马鱼胚胎未检测到黄鳝卵原细胞,即黄鳝卵原细胞在斑马鱼受体中迁移并最终整合到生殖嵴上,但在斑马鱼出膜后无法继续存活。因此,为了提高黄鳝生殖细胞移植成功率应选择亲缘关系近的鱼种或构建性腺不育种质作为受体。 展开更多
关键词 黄鳝卵原细胞 斑马鱼胚胎 移植 nanos3基因 荧光追踪 荧光原位杂交 半定量PCR
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pcgf5a在斑马鱼胚胎早期发育中的作用
6
作者 周娟 周文娟 +2 位作者 李心悦 史玮 郝爱军 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期99-103,共5页
目的探讨pcgf5a基因在斑马鱼胚胎发育过程中的作用和机制。方法通过显微注射pcgf5a吗啉代寡核苷酸(MO)抑制pcgf5a基因mRNA翻译过程,观察斑马鱼胚胎发育过程中相关表型的变化;利用胚胎整封原位杂交和Real-time PCR等技术检测抑制pcgf5a... 目的探讨pcgf5a基因在斑马鱼胚胎发育过程中的作用和机制。方法通过显微注射pcgf5a吗啉代寡核苷酸(MO)抑制pcgf5a基因mRNA翻译过程,观察斑马鱼胚胎发育过程中相关表型的变化;利用胚胎整封原位杂交和Real-time PCR等技术检测抑制pcgf5a对胚胎神经及眼睛发育相关标记基因的表达变化。结果抑制pcgf5a基因后,斑马鱼胚胎中外胚层发育受到影响,表现为脑区变小,眼睛发育迟缓,尾部卷曲及体轴缩短(548/891),同时神经发育(sox2:82/98、sox3:73/84、foxg1:70/88、pax6a:36/45)和眼睛发育(pax2a、vsx2和rx1,n=5)相关基因表达明显降低。结论pcgf5a可能通过调节神经与眼睛发育相关转录因子的表达,进而影响细胞增殖和凋亡而参与胚层分化以及后续的神经系统与眼睛的发育。 展开更多
关键词 pcgf5a基因 神经系统 眼睛发育 整封原位杂交 实时定量聚合酶链反应 斑马鱼
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Micall2a基因表达下调抑制斑马鱼血管发育
7
作者 杨晋娴 王淑娟 +1 位作者 翟金云 朱顺星 《实验动物与比较医学》 CAS 2023年第3期282-287,共6页
目的探究斑马鱼胚胎早期发育过程中Micall2a基因的表达模式,以及该基因对斑马鱼血管发育的影响。方法使用Tg(fli:GFP)转基因斑马鱼(用绿色荧光蛋白标记血管)和野生型斑马鱼(AB),采用全胚胎原位杂交技术检测其早期胚胎不同发育阶段的Mica... 目的探究斑马鱼胚胎早期发育过程中Micall2a基因的表达模式,以及该基因对斑马鱼血管发育的影响。方法使用Tg(fli:GFP)转基因斑马鱼(用绿色荧光蛋白标记血管)和野生型斑马鱼(AB),采用全胚胎原位杂交技术检测其早期胚胎不同发育阶段的Micall2a基因表达水平。通过显微注射吗啉反义寡核苷酸下调Micall2a基因,并采用实时荧光定量PCR技术检测该基因在斑马鱼胚胎不同发育阶段mRNA表达水平。采用激光共聚焦显微成像技术,观察并分析Micall2a基因下调后斑马鱼的血管表型变化。结果受精后24 h(24 hours post-fertilization,24 hpf)、36 hpf和48 hpf的斑马鱼早期胚胎的脑、心脏、血管系统中均有Micall2a基因表达。显微注射吗啉反义寡核苷酸后Micall2a基因的mRNA水平增加,抑制斑马鱼胚胎的血管发育,导致斑马鱼节间血管发育缺陷。结论Micall2a基因表达下调可以抑制斑马鱼血管的发育。 展开更多
关键词 Micall2a基因 原位杂交 胚胎发育 血管发育 斑马鱼 血管依赖性疾病
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视黄酸影响斑马鱼胚胎心脏房室分化 被引量:7
8
作者 张立凤 桂永浩 +5 位作者 钟涛 王跃祥 蒋球 崇梅 孙淑娜 宋后燕 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期88-91,共4页
目的观察外源性视黄酸对斑马鱼心脏前后轴发育即心脏房室分化的影响。方法采用化学遗传学方法在斑马鱼胚胎发育至12.5hpf(hours post fertilization)给予5×10-8mol/L和10-7mol/L外源性视黄酸处理1.5h。应用胚胎整体原位杂交观察视... 目的观察外源性视黄酸对斑马鱼心脏前后轴发育即心脏房室分化的影响。方法采用化学遗传学方法在斑马鱼胚胎发育至12.5hpf(hours post fertilization)给予5×10-8mol/L和10-7mol/L外源性视黄酸处理1.5h。应用胚胎整体原位杂交观察视黄酸对心脏特异基因vmhc,amhc,nkx2.5和nppa表达的影响。结果vmhc,amhc探针的整体原位杂交结果显示视黄酸处理会导致斑马鱼胚胎心脏的前后轴发育异常,表现为vmhc表达细胞的范围缩小,amhc表达细胞的范围明显增大。视黄酸可以明显增强nppa在心脏的表达。视黄酸对心脏房室分化的影响在48hpf后表现得明显。结论5×10-8mol/L和10-7mol/L视黄酸在12.5hpf处理斑马鱼胚胎对斑马鱼心脏早期发生没有影响。斑马鱼发育过程中,视黄酸对心脏的房室分化过程起着重要的调控作用,视黄酸支持心房的分化和发育,同时抑制心室发育。 展开更多
关键词 视黄酸 斑马鱼 心脏发育 整体原位杂交
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地高辛标记斑马鱼cd99l2基因RNA探针的制备 被引量:2
9
作者 温宗华 张艳 +4 位作者 吴自勍 周新华 韩西群 张文清 赵彤 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期969-972,共4页
目的制备用于斑马鱼胚胎早期cd99l2基因时空表达检测的地高辛标记RNA探针。方法设计引物,构建cd99l2/pGM-T重组质粒,用SacII和SalI分别进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6RNA聚合酶和T7RNA聚合酶转录合成地反义和正义地高辛标记的RNA探针... 目的制备用于斑马鱼胚胎早期cd99l2基因时空表达检测的地高辛标记RNA探针。方法设计引物,构建cd99l2/pGM-T重组质粒,用SacII和SalI分别进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6RNA聚合酶和T7RNA聚合酶转录合成地反义和正义地高辛标记的RNA探针,用整体原位杂交法检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的表达。结果成功构建了cd99l2/pGM-T重组质粒,体外转录获得反义和正义RNA探针,反义探针杂交检测证实cd99l2基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中中枢神经系统呈现高表达,正义探针未检测到表达信号。结论本研究制备的反义cd99l2RNA探针,兼顾了特异性和敏感性,能有效检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的定位表达,而正义探针可以作为阴性对照,为进一步探究cd99l2基因在斑马鱼发育过程中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 斑马鱼 原位杂交 探针 cd99l2
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斑马鱼整胚原位杂交和显微注射转基因技术的建立(简报) 被引量:4
10
作者 杨雪艳 姚纪花 +3 位作者 成璐 魏东旺 卢大儒 薛京伦 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期243-245,共3页
随着人类基因组框架图的完成,解读大量基因的功能和表达调控成为亟待解决的问题.因此通过模式生物从个体水平、细胞水平和分子水平研究基因功能及其表达调控日益成为一个重要的研究领域.
关键词 斑马鱼 整胚原位杂交 显微注射 转基因技术 基因功能 脊椎动物 胚胎发育 遗传学
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zdhhc17对斑马鱼集中延伸运动的调节及其机制 被引量:3
11
作者 杨阳 高明 +4 位作者 陈学冉 史玮 王芬 马保华 郝爱军 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期259-263,共5页
目的通过抑制zdhhc17基因的表达,探讨其在斑马鱼胚胎发育过程中的作用及机制。方法通过显微注射zdhhc17吗啉反义寡聚核苷酸(MO)抑制zdhhc17翻译,观察斑马鱼胚胎发育过程中相关表型的变化。利用斑马鱼整封原位杂交技术,检测集中延伸运动... 目的通过抑制zdhhc17基因的表达,探讨其在斑马鱼胚胎发育过程中的作用及机制。方法通过显微注射zdhhc17吗啉反义寡聚核苷酸(MO)抑制zdhhc17翻译,观察斑马鱼胚胎发育过程中相关表型的变化。利用斑马鱼整封原位杂交技术,检测集中延伸运动相关标记基因(dlx3b、ntl、myod1、tbx6等)的表达变化。利用RT-PCR技术,检测集中延伸运动相关调控因子mRNA表达水平的变化。结果敲除zdhhc17基因后,斑马鱼胚胎集中延伸运动出现严重缺陷,主要表现为尾部弯曲变短(82/118),且集中延伸运动相关标记基因表达异常,钙黏附蛋白家族cdh1、padh18a mRNA水平降低。结论 zdhhc17通过调节钙黏附蛋白家族cdh1、padh18a基因的表达,进而影响细胞黏附运动,最终参与调控斑马鱼胚胎集中延伸运动。 展开更多
关键词 zdhhc17 棕榈酰化 集中延伸运动 钙黏附蛋白家族 整封原位杂交 斑马鱼
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斑马鱼高分辨率整胚原位杂交实验方法与流程 被引量:11
12
作者 张春霞 刘峰 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期522-528,共7页
整胚原位杂交技术是利用反义RNA探针检测体内mRNA表达的一项技术,在利用模式动物研究基因时空表达方面有着重要的应用。如何使用该技术得到特异、高敏感度的表达结果,对每一个使用该技术的实验室来说都很重要。本实验室参照常规的实验方... 整胚原位杂交技术是利用反义RNA探针检测体内mRNA表达的一项技术,在利用模式动物研究基因时空表达方面有着重要的应用。如何使用该技术得到特异、高敏感度的表达结果,对每一个使用该技术的实验室来说都很重要。本实验室参照常规的实验方法,对该技术加以改进,使之更加灵敏,结果更加特异。文章主要以斑马鱼为例,介绍了整胚原位杂交技术的发展历史,并重点介绍了本实验室所用的整胚原位杂交实验流程,同时还分析了实验结果不理想的原因及其解决方法。 展开更多
关键词 斑马鱼 整胚原位杂交
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Pitx2基因在斑马鱼牙齿发育过程中早期表达的研究 被引量:3
13
作者 李谨 王涛 +1 位作者 王娟 詹瑧 《口腔医学》 CAS 2010年第3期129-132,共4页
目的研究Pitx2基因在斑马鱼牙齿早期发育阶段的表达。方法利用RT-PCR技术直接克隆Pitx2特异性基因片段,制作针对Pitx2的基因探针,选取斑马鱼发育早期多个时段的胚胎进行整胚原位杂交。结果成功克隆Pitx2基因,合成针对Pitx2的基因探针,获... 目的研究Pitx2基因在斑马鱼牙齿早期发育阶段的表达。方法利用RT-PCR技术直接克隆Pitx2特异性基因片段,制作针对Pitx2的基因探针,选取斑马鱼发育早期多个时段的胚胎进行整胚原位杂交。结果成功克隆Pitx2基因,合成针对Pitx2的基因探针,获得Pitx2基因在斑马鱼早期发育阶段的表达情况。结论了解Pitx2基因在斑马鱼早期发育阶段中的表达情况。 展开更多
关键词 斑马鱼 PITX2 原位杂交
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视黄酸缺乏对斑马鱼心脏房室分化的影响 被引量:3
14
作者 侯佳 桂永浩 +3 位作者 张立凤 王跃祥 刘东 宋后燕 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第5期365-368,I0002,共5页
目的通过化学遗传学方法建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,探讨视黄酸缺乏对斑马鱼胚胎心脏前后轴发育即房室分化的影响。方法在斑马鱼胚胎孵育的5 hpf,用不同浓度梯度的视黄醛脱氢酶2抑制剂DEAB(1×10-6、5×10-6、10×10-6、25... 目的通过化学遗传学方法建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,探讨视黄酸缺乏对斑马鱼胚胎心脏前后轴发育即房室分化的影响。方法在斑马鱼胚胎孵育的5 hpf,用不同浓度梯度的视黄醛脱氢酶2抑制剂DEAB(1×10-6、5×10-6、10×10-6、25×10-6mol/L)处理斑马鱼胚胎,实时观察斑马鱼胚胎发育的全过程。通过给予斑马鱼胚胎外源性视黄酸,观察其对DEAB的拮抗作用。应用胚胎整体原位杂交观察视黄酸缺乏对心脏特异基因vmhc和amhc表达的影响。结果斑马鱼胚胎的生存率随着DEAB处理浓度的增加而降低,当DEAB浓度≥5×10-6mol/L时,斑马鱼的畸胎率达100%。5×10-6mol/L DEAB的致畸作用能够被1×10-9mol/L外源性视黄酸所拮抗。整体原位杂交结果显示视黄酸缺乏会导致斑马鱼胚胎心脏房室分化异常,表现为vmhc表达细胞的范围增大,amhc表达细胞的范围缩小。结论通过外源性DEAB处理能有效地建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,DEAB影响胚胎发育存在剂量依赖性。视黄酸在斑马鱼心脏前后轴发育过程中起重要调控作用,心脏发育早期视黄酸缺乏会抑制心房的发育而支持心室的发育,出现房室分化异常。 展开更多
关键词 视黄酸缺乏 斑马鱼 心脏发育 整体原位杂交
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野生型斑马鱼胚胎中hoxd3基因mRNA的表达谱 被引量:3
15
作者 舒莉萍 何志旭 +3 位作者 姚冬静 马健娟 李涛 叶芝旭 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期69-74,共6页
目的:为探讨hoxd3基因在斑马鱼发育过程中与血管形成可能的作用机制,用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观测hoxd3基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达情况。方法:提取斑马鱼胚胎总RNA,经RT-PCR扩增斑马鱼hoxd3基... 目的:为探讨hoxd3基因在斑马鱼发育过程中与血管形成可能的作用机制,用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观测hoxd3基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达情况。方法:提取斑马鱼胚胎总RNA,经RT-PCR扩增斑马鱼hoxd3基因片段,将得到的hoxd3基因片段和pCS2+质粒经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后插入pCS2+质粒中,挑选阳性克隆,通过双酶切、菌落PCR以及测序鉴定;将pCS2+-hoxd3重组子经EcoRⅠ酶切线性化,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的hoxd3基因的反义mRNA探针。用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了pCS2+-hoxd3重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测hoxd3基因的表达,发现在Tuebingen野生型斑马鱼受精后24 h~72 h胚胎的中脑后脑交界处以及后脑中可以观察到hoxd3基因的表达。结论:hoxd3基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统高表达,未发现在血管生成区域的表达。 展开更多
关键词 寡核苷酸类 反义/遗传学 原位杂交 基因表达 斑马鱼 胚胎发育 遗传载体 质粒/遗传学 转染 内皮 血管/细胞学
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sox19b在斑马鱼胚胎眼睛发育中的作用 被引量:1
16
作者 高明 杨阳 +3 位作者 陈学冉 史玮 林浴霜 郝爱军 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期264-268,共5页
目的通过抑制sox19b基因的表达,探讨sox19b基因在斑马鱼胚胎眼睛发育和形成中的作用。方法通过显微注射sox19b吗啉寡聚核苷酸(MO)抑制sox19b基因的表达,观察胚胎发育过程中表型的变化;采用石蜡包埋组织切片及HE染色、RT-PCR和整封原位... 目的通过抑制sox19b基因的表达,探讨sox19b基因在斑马鱼胚胎眼睛发育和形成中的作用。方法通过显微注射sox19b吗啉寡聚核苷酸(MO)抑制sox19b基因的表达,观察胚胎发育过程中表型的变化;采用石蜡包埋组织切片及HE染色、RT-PCR和整封原位杂交等方法探讨敲除sox19b后对斑马鱼胚胎眼睛发育的调控机制。结果敲除sox19b基因后,斑马鱼胚胎眼睛发育受到影响,表现为眼睛变小或缺失,视网膜及晶状体结构发育异常(n=57/93);眼睛发育过程中重要调控基因rx3、pax2a及vsx2等表达明显降低,进而影响眼睛的发育和形成。结论 sox19b基因作为转录调控因子,可以通过调节眼区转录因子的表达进而影响斑马鱼胚胎早期眼睛的发育和形成。 展开更多
关键词 sox19b 吗啉寡聚核苷酸 眼睛发育 眼区转录因子 原位杂交 反转录-聚合酶链反应 斑马鱼
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Pax9基因在斑马鱼早期发育阶段腮弓中的表达 被引量:1
17
作者 王涛 王娟 李谨 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期326-328,共3页
目的:研究Pax9基因在斑马鱼早期发育阶段腮弓中的表达。方法:利用RT-PCR技术直接克隆Pax9特异性基因片段,制作针对Pax9的基因探针,选取斑马鱼发育早期多个时段的胚胎进行整胚原位杂交。结果:成功克隆Pax9基因,合成针对Pax9的基因探针,发... 目的:研究Pax9基因在斑马鱼早期发育阶段腮弓中的表达。方法:利用RT-PCR技术直接克隆Pax9特异性基因片段,制作针对Pax9的基因探针,选取斑马鱼发育早期多个时段的胚胎进行整胚原位杂交。结果:成功克隆Pax9基因,合成针对Pax9的基因探针,发现Pax9基因在受精16h的斑马鱼胚胎中开始有特异性信号出现,还可以明显地看到腮弓上的Pax9基因特异性信号在24~72h发育过程中的迁徙过程。结论:初步了解了Pax9基因在斑马鱼早期发育阶段的表达情况。 展开更多
关键词 斑马鱼 Pax9 原位杂交
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FLASH基因在野生型斑马鱼早期表达以及与HoxB4基因的关系 被引量:1
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作者 金璐 丁可军 +4 位作者 孙琮杰 陈露 周艳华 舒莉萍 何志旭 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第10期1178-1182,1191,共6页
目的:观测FLASH基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎早期的表达及与Hox B4基因的关系。方法:以Hox B4转基因斑马鱼系为研究对象,分为实验组、实验对照组和空白对照组,实验组为Hox B4转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的过表达Hox B4的带有E... 目的:观测FLASH基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎早期的表达及与Hox B4基因的关系。方法:以Hox B4转基因斑马鱼系为研究对象,分为实验组、实验对照组和空白对照组,实验组为Hox B4转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的过表达Hox B4的带有EGFP荧光的胚胎(Tg:Lmo2-Cre,Lmo2-LDEL-Hoxb4-EGFP),实验对照组为EGFP转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的表达EGFP荧光的胚胎(Tg:Lmo2-Cre,Lmo2-LDEL-EGFP),空白对照组为Tuebingen野生型斑马鱼的胚胎;采用FLASH反义mRNA探针做原位杂交并观察其表达。结果:观察到Tuebingen组中3. 7、9~24 hpf的神经外侧板、头部和脊索及18~30 hpf的原肾管可见黑色的阳性杂交信号,36 hpf后未见; 18~72 hpf的空白对照组与实验对照组间FLASH表达水平无差异,实验组18~30 hpf神经系统、造血系统FLASH的表达下调。结论:FLASH基因可能是Hox B4基因的下游靶基因。 展开更多
关键词 斑马鱼 HoxB4基因 FLASH基因 转基因 原位杂交
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整体原位杂交法研究斑马鱼(Danio rerio)胚胎发育过程中胸苷酸合成酶(TS)的表达 被引量:1
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作者 牛荣丽 梁丽英 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期81-85,共5页
收集不同发育时期的斑马鱼胚胎,制备DIG标记的TS反义RNA探针,采用整体原位杂交方法研究胸苷酸合成酶(TS)基因在斑马鱼胚胎发育各期的时空表达状况。结果表明,在所取样的各个阶段,TS基因均有转录,但其部位不同,中囊胚过渡前后mRNA显现的... 收集不同发育时期的斑马鱼胚胎,制备DIG标记的TS反义RNA探针,采用整体原位杂交方法研究胸苷酸合成酶(TS)基因在斑马鱼胚胎发育各期的时空表达状况。结果表明,在所取样的各个阶段,TS基因均有转录,但其部位不同,中囊胚过渡前后mRNA显现的部位仅存在于受精卵的动物极,10hpf时存在于整个胚胎的外围,至24hpf后集中到头部及其躯干部。112hpf在心脏部位强表达,其余部位表达相对较弱。 展开更多
关键词 胸苷酸合成酶(TS) 斑马鱼 反义RNA探针 整体原位杂交
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斑马鱼rnf141基因结构与表达分析
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作者 李亚 王伦安 +3 位作者 王玉明 杨平 潘克俭 黄明孔 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期967-970,共4页
目的:探讨斑马鱼rnf141基因在物种间进化以及在斑马鱼胚胎发育和成体中表达分布特点。方法:采用生物信息学方法分析斑马鱼rnf141基因结构特征;运用胚胎整体原位杂交和多组织RT-PCR技术分别检测斑马鱼胚胎发育不同阶段和成体各组织rnf14... 目的:探讨斑马鱼rnf141基因在物种间进化以及在斑马鱼胚胎发育和成体中表达分布特点。方法:采用生物信息学方法分析斑马鱼rnf141基因结构特征;运用胚胎整体原位杂交和多组织RT-PCR技术分别检测斑马鱼胚胎发育不同阶段和成体各组织rnf141基因表达情况。结果:斑马鱼RNF141蛋白与人类和小鼠同源蛋白(ZNF230、Znf230)分别具有79.8%、78.5%的同源性,其中C3HC4型锌指结构域及其保守的半胱氨酸和组氨酸残基组成与人类(或小鼠)的同源性分别为84.8%、100%;而且,斑马鱼RNF141蛋白与人类ZNF230蛋白在C3HC4型锌指区域具有完全相同的二级结构。杂交结果显示,rnf141基因在斑马鱼胚胎中广泛表达,尤以端脑、小脑和后脑表达丰度为高。RT-PCR结果表明,rnf141基因在受检的成体组织中均有表达,但在睾丸组织中表达丰度较高。结论:斑马鱼rnf141基因为脊椎动物保守基因,并可能在胚胎发育和精子发生过程中起着重要作用。 展开更多
关键词 斑马鱼 rnf141基因 整体原位杂交
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