Wif1在神经系统发育中的研究进展

WIF-1(Wnt inhibitory factor-1)最早作为人视网膜表达序列标签被人们所认识,后被证明是一种Wnt分子的胞外抑制剂,属于sFRP家族。WIF-1可以直接与Wnt分子结合,抑制Wnt分子与受体细胞膜上的Frizzled受体及辅助受体LRP5/6形成三聚体复合物,从而抑制了信号传导。Wif1在斑马鱼、爪蟾、小鼠和人的神经系统均有表达,参与爪蟾神经系统A-P轴的分化,影响小鼠视杆细胞的形成。Wif1在胚胎期小鼠中枢神经系统中表达强烈,提示在胚胎期神经系统发育中,Wif1可能对Wnt信号通路活性起着时空特异性的调节作用。Wnt信号通路在脊椎动物中枢神经系统发育中发挥着重要的作用,但人们对Wif1在神经系统发育中的功能却知之甚少。根据Wif1在神经发育中的表达谱信息,可以选取合适的研究时期和部位,研究Wif1在神经发育中的功能。

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肺癌WIF1、RASSF2A基因表达及细胞凋亡的影响

目的观察在肺腺癌SPC-A-1细胞中5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对WIF1、RASSF2A基因甲基化状态改变的影响,探讨5-Aza-CdR对肺腺癌SPC-A-1细胞凋亡的影响及其可能的抗癌机制。方法将体外培养的人肺腺癌SPC-A-1细胞株分为4组,A组为未加药组(对照组),B、C、D加药组分别加入3、6、12μmol/L的5-Aza-CdR。采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测4组细胞WIF1、RASSF2A基因甲基化状态的差异,RT-PCR法检测4组细胞WIF1、RASSF2A基因mRNA表达水平差异,Western blot检测4组细胞WIF1、RASSF2A蛋白表达水平差异,流式细胞学技术检测各组细胞周期及细胞凋亡率的差异。结果①A组细胞检测出WIF1、RASSF2A基因为甲基化状态,B、C、D组均检测出WIF1、RASSF2A为去甲基化状态。②肺腺癌SPC-A-1细胞WIF1、RASSF2A基因mRNA及WIF1、RASSF2A蛋白表达水平低下,经5-Aza-CdR处理后,其表达水平明显增强(均P<0.05)。③5-Aza-CdR处理后的细胞凋亡率较未加药组均明显提高,差异有统计学意义(均P<0.05)。④5-Aza-CdR处理后的D组细胞WIF1、RASSF2A蛋白表达水平与细胞凋亡率呈正相关(均P<0.05)。结论肺癌细胞WIF1、RASSF2A基因呈甲基化状态,5-Aza-CdR具有明显去甲基化作用,可使WIF1、RASSF2A基因重新激活表达,进而促进肺癌细胞凋亡及抑制癌细胞增殖,发挥抗癌作用。

Wif1在膀胱癌发生中的研究进展

WIF-1（Wnt inhibitory factor-1）属于Wnt分子胞外抑制剂中的sFRP（secreted Frizzled-related protein,sFRP） 家族,通过直接与Wnt分子结合,抑制Wnt分子与受体细胞膜上的Frizzled受体及辅助受体LRP5/6形成三聚体复合物,从而抑制Wnt信号通路活性.Wif1在膀胱癌细胞系和组织表达降低,Wif1启动子甲基化是引起其表达下调的重要机制.Wif1表达下调可以导致Wnt经典通路中的靶基因c-myc,cyclin D1和SKP2表达明显增高.在细胞系中转染Wif1或使用5-氮-2-脱氧胞苷逆转Wif1启动子的甲基化状态,恢复Wif1mRNA和蛋白的表达后,检测到肿瘤细胞生长速率减慢,同时细胞凋亡增多.Wif1有望成为膀胱癌的早期诊断指标和膀胱癌基因治疗的新靶点.

长链非编码RNA WIF1-1在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:探究食管鳞状细胞癌组织及癌旁组织中长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)WIF1-1的表达水平,并评估其对患者预后的价值。方法:使用实时荧光定量PCR检测50例食管鳞状细胞癌组织样本及其对应同源的癌旁组织样本中lncRNA WIF1-1的表达水平,分析临床病理特征及其与患者预后的相关性。结果:食管鳞状细胞癌组织中lncRNA WIF1-1的表达水平明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001)。进一步分析发现:lncRNA WIF1-1的表达水平与食管鳞状细胞癌的淋巴结转移、TNM分期和临床分期之间呈负相关。对预后资料分析发现:lncRNA WIF1-1表达水平较低的食管鳞癌患者的总生存时间(overall survival,OS)以及无进展生存期(progressionfree sur vival,PFS)均较短。单因素及多因素分析结果显示:lncRNA WIF1-1可作为食管鳞状细胞癌患者OS和PFS的独立危险因素。结论:lncRNA WIF1-1可能在食管鳞状细胞癌中发挥抑癌基因的作用,其表达量与患者预后具有相关性,有可能成为食管鳞状细胞癌的治疗靶点。

益气养血方对膝骨关节炎模型大鼠血清Wnt4和WIF1的影响

目的:探讨益气养血方对膝骨关节炎大鼠血清Wnt4、WIF1水平及膝关节软骨组织的影响,揭示其治疗骨关节炎的部分机制。方法:将70只SD大鼠随机分为益气养血方低、中、高剂量组,阳性对照组,模型对照组,空白对照组及假手术组,每组10只。除空白对照组和假手术组外,其余各组大鼠采用改良Hulth法构建膝骨关节炎模型;假手术组仅切开关节囊,不切断韧带和半月板。造模成功后,益气养血方低、中、高剂量组分别予益气养血方1.89 g·kg^(-1)·d^(-1)、3.78 g·kg^(-1)·d^(-1)、7.56 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,阳性对照组给予双氯芬酸钠肠溶片混悬液4 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,模型对照组、假手术组给予生理盐水2.5 mL·d^(-1)灌胃,空白对照组不予任何药物。给药8周后,腹主动脉取血,检测血清中Wnt4、WIF1的含量;取右膝关节,HE染色,并进行病理评分。结果:与模型对照组比较,益气养血方各剂量组及阳性对照组病理评分降低(P<0.05);与空白对照组、假手术组比较,模型对照组大鼠血清中Wnt4水平升高、WIF1水平降低(P<0.05);与模型对照组比较,益气养血方中、高剂量组大鼠血清中Wnt4水平降低,WIF1水平升高(P<0.05或P<0.01);与阳性对照组比较,益气养血方中、高剂量对WIF1的上调作用更为明显(P<0.05)。结论:益气养血方能延缓骨关节炎软骨退变,保护关节软骨,其机制可能与下调Wnt4的表达,上调WIF1的水平,抑制关节软骨退变相关。

牛Wif1基因印记及甲基化调控印记的分子机制研究

为了研究Wif1基因在牛中的印记状态和调控印记的分子机制,本研究首先应用基于单核苷酸多态(SNP)的测序方法,分析了Wif1基因在牛组织中的印记状态,结果发现,Wif1基因在牛中的印记表现出组织特异性,在肺中为单等位基因表达,而在心、肝、脾、肾、肌肉和脂肪6个组织中为双等位基因表达。进一步应用亚硫酸氢盐测序法分析Wif1基因启动子区29个CpG位点在牛肺(单等位基因表达)和肝(双等位基因表达)组织中等位基因特异的甲基化状态,结果发现,在肺和肝中,两条亲本链间的甲基化水平无显著差异(P>0.05)。进一步分析每个CpG位点在肺和肝中亲本链间甲基化率差异,发现与双等位基因表达的肝相比,肺中存在8个亲本链间甲基化率差异显著的CpG位点,其中3个(第1、2和6)位于转录因子的结合位点上。由于单个CpG位点的甲基化变化会影响转录因子的结合,推测这3个CpG位点的甲基化可能参与调控Wif1基因的组织特异性印记。

乳腺癌中Wnt信号通路及WIF1基因的研究进展

Wnt信号通路在乳腺癌的发生发展中起重要作用,参与成体细胞的增殖分化和凋亡。β-catenin的异常表达是乳腺癌发生发展过程中的重要因子,这个过程可能是通过激活cyclin D1实现的。E-钙粘蛋白是关系乳腺癌发展与预后的关键因子,WIF1是Wnt通路中的抑癌基因,对肿瘤的发生发展起着重要作用。本文从Wnt通路组成、Wnt通路的抑制剂和调控及其与乳腺癌的关系作一综述。

Abnormal expression of WIF1 in hepatocellular carcinoma cells and its regulating effect on invasion and metastasis factors of TIMP-3 and caveolin-1 of hepatocellular carcinoma

Objective:To discuss the abnormal expression of Wnt inhibitory factor(WIFI) in hepatocellular carcinoma cells and its regulating effect on the hepatocellular carcinoma invasion and metastasis factors of tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-3(TIMP-3)and caveolin-1.Methods:RT-PCR and Western blot were employed to detect the expression of WIF1 in six hepatocellular carcinoma eell lines of HepG2,Hep3 B,Huh7,PLC/PRF/5.SMMC-7721 and MHCC97 and the immortalized human liver cell line THLE-3.Besides,Lipofectamine 2000 was employed to transfect the eukaryotic expression vector pcDNA3.lWIF1 and blank plasmid pcDNA3.1 into hepatocellular carcinoma cell lines.Transwell assay was used to detect the effect of WIF1 on the invasion ability of hepatocellular carcinoma cells;Western blot was used to detect the effect of WIF1 on the expression of TIMP-3 and caveolin-1in hepatocellular carcinoma cells,it also discussed the effect on the expression of β-catenin.Results:The expression of WIF1 in hepatocellular carcinoma cell lines was lower than that in the normal liver cell lines(P<0.01);while there was basically no expression of WIF1 in the human highly metastatic cell line MHCC-97 and moderate expression in HepG2 and SMMC-7721.Therefore,HepG2 and SMMC-7721 were chosen as the further experimental cell lines.After transfecting the eukaryotic expression vector peDNA3.1-WEFl and blank plasmid pcDNA3.1 into hepatocellular carcinoma eell lines,compared with(he blank plasmid group,the cell viability and invasion ability in the WIF1 group were all reduced(P<0.01),the expression of TIMP-3,caveolin-1 and mRNA were all down-regulated(P<0.01),and the expression of β-catenin was decreased(P<0.01).Conclusions:Because of down-regulation or missing of expression of WIFI in hepatocellular carcinoma cell lines,the up-regulation of WIFI expression can significantly inhibit the invasion and metastasis of HepG2 and SMMC-7721 of hepatocellular carcinoma cell lines,which are related to the up-regulated expression of TIMP-3 and down-regulated expression of caveolin-1 and may be realized through the Wnt/β-catenin signaling pathway.

非小细胞肺癌组织WIF1过表达对A549细胞迁移和侵袭影响机制

目的 WNT抑制因子1(WNT inhibitory factor 1,WIF1)与肿瘤的发展与转移密切相关,在多种肿瘤中均发现WIF1表达降低或缺失,但其在非小细胞肺癌中的表达及功能尚不清楚。本研究探讨WIF1在非小细胞肺癌组织的表达及过表达WIF1对A549肺腺癌细胞迁移和侵袭的作用。方法选取安徽医科大学第一附属医院干部呼吸科2010-08-01-2014-08-01经病理确诊的50例肺癌及癌旁组织,Real-time PCR、蛋白质印迹检测2种组织中WIF1 mRNA和蛋白的表达水平,同时用癌症基因组图谱(The Cancer Atlas,TCGA)公共数据库的数据进行辅助验证。分析WIF1mRNA表达与临床病理、预后的关系。WIF1过表达载体(WIF1组)或空载转染A549(Vector组),划痕和Transwell实验检测WIF1过表达对细胞迁移和侵袭的影响;蛋白质印迹检测MMP-2、MMP-9、β-catenin和Myc蛋白表达水平。结果 WIF1 mRNA和蛋白的表达在癌组织中表达值分别为0.25±0.06、0.44±0.08,低于癌旁组织的0.56±0.12、0.96±0.12,差异有统计学意义,t值分别为15.509和1.615,均P<0.05。同时TCGA共数据库的数据显示,WIF1在肺腺癌和肺鳞癌中表达丰度分别为1.94(0.39~6.12)和0.69(0.12~2.99),均低于正常肺组织的137.94(88.98~189.25)和99.94(68.51~138.97),均P<0.05。WIF1表达在年龄、性别、组织病理类型及切取淋巴结数比较差异无统计学意义,均P>0.05;但在淋巴结转移(χ^2=19.100,P<0.001)、TNM分期为Ⅲ期(χ^2=8.333,P=0.004)及N分期为N1+N2组(χ^2=8.681,P=0.007),差异有统计学意义;且WIF1高表达组生存期为为38.00(19.00~51.50)个月,高于低表达组的24.00(17.00~35.50)个月,差异有统计学意义,χ^2=4.413,P=0.038。过表达WIF1抑制A549细胞的迁移和侵袭能力,t值分别为6.607和15.650,均P<0.05;与Vector组(0.90±0.05、0.90±0.03、0.60±0.05、0.31±0.04)比较,过表达WIF1能下调肿瘤转移相关标志物MMP-2(0.30±0.05)和MMP-9(0.28±0.02),差异有统计学意义,t值分别为15.459、27.391,均P<0.05;并能抑制Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白β-catenin(0.16±0.08)和Myc(0.12±0.03)的表达,差异有统计学意义,t值分别为7.962和6.124,P值分别为0.001和0.004。结论 WIF1在非小细胞肺癌组织中表达降低,过表达WIF1可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制A459肺腺癌细胞迁移和侵袭。

WNT信号通路中抑制基因WIF1与DKK1基因多态性与中国汉族人群结核易感性的相关性研究

目的初步探究WNT信号通路中关键抑制基因WIF1和DKK1多态性位点与结核易感性、临床特征及实验室指标的相关性。方法纳入四川大学华西医院2014年12月—2016年11月期间475例结核病患者和370例健康对照,采用高通量基因分型技术对WNT信号通路中WIF1基因rs58635985位点和DKK1基因rs11001548位点多态性进行分型检测,并收集受试者相关临床资料。应用χ2检验、logistic回归模型等统计学方法分析单核苷酸多态性位点的等位基因、基因型、遗传模型在两组之间的分布差异,以及其是否影响结核患者临床表征。结果 WIF1 rs58635985位点和DKK1 rs11001548位点的等位基因(P=0.275、0.949)、基因型(P=0.214、0.659)及遗传模型:加性模型(P=0.214、0.659)、显性模型(P=0.414、0.827)与隐性模型(P=0.227、0.658)的频率分布在结核病组与健康对照组比较中差异无统计学意义。亚组分析显示:rs58635985和rs11001548等位基因和基因型分布差异无统计学意义(肺结核组vs.健康对照组:P>0.05;肺结核组vs.肺外结核组:P>0.05)。rs58635985位点和rs11001548位点在结核病相关临床特征(发热、盗汗、乏力等)以及实验室指标(血常规、红细胞沉降率、TB-DNA等)分析中差异无统计学意义(P>0.05)。结论未发现WIF1基因rs58635985位点和DKK1基因rs11001548位点与中国西部地区汉族人群结核病遗传易感性、临床特征及实验室指标有关联,后续仍需扩大样本量在不同人群中进行验证分析。

miR-552靶向调控Wnt抑制因子-1促进MG-63骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移的实验研究

目的 探讨miR-552对Wnt抑制因子-1(WIF1)的靶向调控作用以及对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移活性的影响。方法 体外培养人骨肉瘤细胞MG-63和人成骨细胞hFOB1.19,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-552的表达水平。分别采用miR-552 inhibitor和shWIF1转染MG-63细胞,实验分为空白对照组、anti-阴性对照(anti-NC)组、anti-552组、miR-552 inhibitor+pcDNA3.1vector共转染阴性对照(anti-552-NC)组、miR-552 inhibitor+pcDNA3.1-shWIF1(共转染)组。采用MTT法、Transwell法检测细胞增殖、侵袭和迁移活性的变化。采用双荧光素酶报告实验验证WIF1与miR-552的靶向关系。采用Western blotting检测各组β-catenin、CyclinD1、APC的表达水平。结果 MG-63细胞中miR-552的表达水平为1.48±0.21,明显高于hFOB1.19细胞的1.00±0.07(P<0.05)。anti-552组miR-552的表达水平为0.51±0.12,低于空白对照组(P<0.05);WIF1表达水平为1.45±0.23,高于空白对照组(P<0.05)。共转染组WIF1表达水平为0.68±0.13,低于空白对照组和anti-552组(P<0.05)。培养24、48、72和96h后,anti-552组MG-63细胞增殖率分别为(83.14±4.25)%、(67.58±3.26)%、(53.41±3.25)%和(48.29±2.86)%,低于anti-NC组(P<0.05)。anti-552组MG-63侵袭、迁移细胞数分别为264±32和489±44,均少于空白对照组和anti-NC组(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实WIF1是miR-552的下游靶基因。anti-552组β-catenin、Cyclin D1、APC蛋白表达量分别为0.84±0.15、0.83±0.16和0.59±0.12,均低于空白对照组和anti-NC组(P<0.05)。而共转染组β-catenin、CyclinD1、APC蛋白表达量分别为2.86±0.45、1.93±0.34和1.40±0.28,明显高于anti-552组(P<0.05)。结论 miR-552在骨肉瘤中表达上调,可通过靶向抑制WIF1的表达,异常激活Wnt/β-catenin信号,进而促使骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。

益气除痰方对Lewis肺癌小鼠种植瘤细胞周期调控相关因子的影响

目的:观察益气除痰方对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及细胞周期调控相关因子P16、p21/WIF1/CIP1、蛋白激酶C(PKC)、c-myc的影响。方法:建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌种植瘤模型30只,随机分为Lewis肺癌模型组、益气除痰方低剂量组、高剂量组3组,每组10只。灌胃21d后,处死小鼠,检测肿瘤体积、重量,并用免疫组化法观察各组肿瘤组织P16、p21/WIF1/CIP1、PKC、c-myc的表达。结果:各组Lewis肺癌小鼠肿瘤体积、瘤重两两比较差异有统计学意义。其中高剂量组、低剂量组瘤体组织P16相对含量与模型组对比均显著增高(P<0.05,P<0.01);高剂量组与模型组、低剂量组对比p21/WIF1/CIP1含量显著增高(P<0.05,P<0.01)。三组PKC含量两两比较差异均有统计学意义。结论:益气除痰方能抑制小鼠Lewis肺癌的生长,其机制可能与其能通过上调P16、p21/WIF1/CIP1、下调PKC表达引起细胞周期阻滞,延长肿瘤细胞倍增时间相关。