microRNA-21靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响

目的探讨分析microRNA-21(miR-21)靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测肝癌细胞HepG2及正常肝细胞株LO2 miR-21的表达情况。对HepG2细胞转染miR-21抑制剂,分析转染后抑制剂组与对照组miR-21的表达情况、细胞增殖、迁移及凋亡情况,检测两组细胞Wnt2蛋白表达水平,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与Wnt2基因的关系。计量资料两组间比较采用t检验。结果HepG2细胞miR-21相对表达水平明显高于LO2细胞(1.978±0.035 vs 1.586±0.022,t=16.424,P<0.05)。转染miR-21抑制剂后,抑制剂组miR-21相对表达水平较对照组显著降低(0.857±0.017 vs 1.684±0.039,t=33.669,P<0.05)。转染miR-21抑制剂24、48、72 h后,抑制剂组HepG2细胞增殖能力均较对照组显著降低(P值均<0.05);抑制剂组穿过Tranwell小室的细胞数显著低于对照组(83.72±15.06 vs 147.85±20.64,t=4.347,P<0.05);抑制剂组细胞凋亡率明显高于对照组(25.67%±3.95%vs 10.27%±2.14%,t=5.937,P<0.05)。抑制剂组HepG2细胞的Wnt2相对表达水平明显低于对照组(0.862±0.127 vs 1.306±0.218,t=3.048,P<0.05)。TargetScan软件显示,miR-21抑制剂可显著抑制野生型Wnt2-3′UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(0.972±0.102 vs 0.612±0.092,t=4.219,P<0.05),而对突变型Wnt2-3′UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无明显影响(0.982±0.093 vs 0.911±0.128,t=0.972,P>0.05)。结论抑制miR-21表达可有效抑制HepG2细胞增殖和迁移,促进HepG2细胞凋亡,并抑制Wnt信号通路的过度激活,可能成为肝癌治疗的潜在靶基因之一。

Wnt2与Dvl蛋白在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的检测Wnt2与散乱(Dvl)蛋白在食管鳞癌组织中的表达情况,探讨其与食管鳞癌发生发展的关系。方法采用Western blot法分别检测Wnt2、Dvl蛋白在60例食管鳞癌组织及其对应癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果 Wnt2和Dvl蛋白在食管鳞癌组织中的相对表达量(0.512±0.406和1.218±1.082)高于癌旁食管组织(0.153±0.189和0.505±0.358),且Wnt2及Dvl蛋白表达在不同浸润深度、TNM分期及淋巴结转移情况中存在差异(P<0.01);Wnt2与Dvl蛋白在食管鳞癌组织中的表达呈正相关(r=0.718,P<0.01)。结论 Wnt2、Dvl蛋白的高表达通过Wnt2信号转导通路协同促进食管鳞癌的发生、发展及浸润转移。

WNT1和WNT2在乙肝相关肝癌中的表达及其对预后的影响

目的探讨WNT1和WNT2在乙肝相关肝癌中的表达及其对预后的影响。方法选取铜川市人民医院收治的80例乙肝相关肝癌患者作为研究对象,比较癌组织和癌旁组织中WNT1和WNT2表达水平,并分析与临床病理相关性,比较不同WNT1和WNT2表达水平患者的生存率,分析乙肝相关肝癌预后的影响因素。结果WTN1和WNT2在癌组织中的高表达率(58.8%、71.3%)均显著高于癌旁组织(21.2%、22.5%)(P<0.05);WNT1表达水平与肿瘤大小、血管侵犯及HPV-DNA相关,WNT2表达水平与肿瘤大小、血管侵犯、TNM分期及HPV-DNA相关。ROC曲线结果显示,WNT2具有潜在的预测价值(AUC=0.812,95%CI:0.768~0.857,P=0.000)。Kaplan-Meier生存率结果显示,WNT1和WNT2低表达患者5年生存率(72.7%、78.2%)显著高于WNT1和WNT2高表达患者(55.3%、49.1%)(P<0.05)。Cox单因素和多因素分析结果均显示,血管侵犯、TNM分期、WNT1表达及WNT2表达是乙肝相关肝癌预后的影响因素。结论WNT1和WNT2在乙肝相关肝癌中的表达水平均显著升高,且与患者的预后密切相关,WNT2在乙肝相关肝癌中的诊断价值较高,值得进一步深入研究。

Wnt2、dvl蛋白在食管鳞癌组织中的表达和评价

目的探究Wnt2、dvl蛋白在食管鳞癌组织中的表达及意义。方法整群收集2014年12月—2015年12月该院确诊的食道鳞癌手术切除标本131例和131例健康食管组织标本,检测Wnt2、Dvl,分析与临床病理特征关系。结果在食管鳞癌组织中Wnt2及Dvl阳性率分别为89.3%和78.2%,正常食管组织中Wnt2及Dvl的阳性率分别为11.9%、8.6%,P<0.05。且有淋巴结转移组织阳性率较高。结论 Wnt2、Dvl蛋白的表达异常可能与食管鳞癌的发生及发展密切相关。

丝氨酸/苏氨酸激酶、Wnt2通路相关蛋白及C-myc基因在肝癌中的表达及诊断价值

目的:探讨丝氨酸/苏氨酸激酶(Aurora-A)、Wnt2通路相关蛋白(Wnt2)和C-myc基因(C-myc)与肝癌发生及疾病进展的关系。方法:应用SP法检测Aurora-A、Wnt2和C-myc在60例早期肝癌、50例中期肝癌、50例晚期肝癌及40例正常肝组织中的表达情况。结果:Aurora-A在正常肝组织、早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率分别为0、30%、60%、76%;Aurora-A在肝癌组织中的阳性表达和肝癌是否存在淋巴结转移紧密相关,在没有淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率显著低于存在淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率(P<0.05);Aurora-A在高、中、低分化肝癌中的表达率分别为40%、70%、85%,分化程度越低,则Aurora-A表达程度越高(P<0.05)。Wnt2在早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率均高于正常肝组织,与早期肝癌组织相比,中期、晚期肝癌组织中Wnt2明显增加(P<0.05);Wnt2阳性表达率在有淋巴结转移的肝癌组织中高于无淋巴结转移组,但两者比较差异没有统计学意义(P>0.05);低分化肝癌组织中Wnt2阳性表达率高于中、高分化肝癌组织(P<0.05)。C-myc在早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率均高于正常肝组织(P<0.05),但早、中、晚期肝癌组织中C-myc表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);C-myc在有淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率高于无淋巴结转移的肝癌组织(P<0.05);C-myc在低分化、中分化肝癌组织中的阳性表达率均高于高分化的肝癌组织(P<0.05)。结论:Aurora-A、Wnt2及C-myc的过表达跟肝癌的发生、侵袭和转移、分化高度相关。通过综合检测Aurora-A、Wnt2和C-myc蛋白的表达对肝癌的早期诊断及预后判断具有重要价值。

不同毛色巴什拜羊皮肤组织中LEF1、YWHAZ及WNT2基因差异表达

【目的】研究LEF1、YWHAZ及WNT2基因表达量与毛色之间的关系,为分析LEF1、YWHAZ及WNT2基因在Wnt/β-actenin信号通路中的分子机制奠定基础。【方法】采用随机选取黑色和白色被毛的巴什拜羊各8只,采集皮肤组织,通过定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)方法测定LEF1、WNT2及YWHAZ基因在不同毛色巴什拜羊皮肤中的表达量,并与LEF1、YWHAZ及WNT2基因转录组测序结果的FPKM值进行双向验证。【结果】LEF1基因在黑色巴什拜羊皮肤组织相对表达量是(4.66±0.59),在白色巴什拜羊皮肤组织是(0.43±0.15);WNT2基因在黑色巴什拜羊组织相对表达量是(7.35±0.77),在白色巴什拜羊皮肤组织是(0.36±0.11);YWHAZ基因在黑色巴什拜羊组织相对表达量是(4.44±0.57),在白色巴什拜羊皮肤组织是(1.02±0.23)。LEF1、YWHAZ及WNT2基因的转录组数据的FPKM值与qRT-PCR结果趋势一致。【结论】LEF1、WNT2及YWHAZ基因在不同毛色的巴什拜羊皮肤组织中均有表达。且LEF1、WNT2及YWHAZ基因在黑色绵羊皮肤中的表达量极显著高于白色绵羊皮肤(P<0.01),LEF1、WNT2及YWHAZ参与毛色的形成过程,可作为绵羊毛色潜在基因研究与毛色之间的相关性。

Wnt/β-Catenin信号通路在肝癌发生中的分子机制研究

目的探讨Wnt/β-Catenin信号通路在肝癌细胞增殖、迁移方面的影响和其在肝癌发生发展中的可能作用。方法体外培养HepG2和L02细胞,采用免疫荧光和Western Blot检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin、GSK3β、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平。培养的HepG2细胞分别用浓度100ng/ml的Wnt3α和20 ng/ml的DKK1处理,采用CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞实验检测细胞周期,Western Blot检测β-catenin、GSK3β、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平,Trans-well检测HepG2的迁移情况。结果与正常肝细胞L02相比,HepG2细胞高表达β-catenin,cyclin D1和c-myc,低表达GSK3β。Wnt3α能够显著促进HepG2细胞的增殖活力,而DKK1能够显著抑制其增殖。与Wnt3α组相比,DKK1处理组细胞G0/G1期细胞比例增加,(68.6±0.5)%VS(47.5±1.5)%(P<0.01),而S期细胞比例减少(17.4±0.5)%VS(28.6±0.5)%,(P<0.01)。Western Blot检测结果说明,Wnt3α提高了β-catenin、cyclin D1和c-myc的表达水平,抑制了GSK3β的表达,而DKK1抑制了β-catenin、cyclin D1和c-myc的表达。迁移实验透膜细胞数对照组为(176.40±12.98)、Wnt3α组为(238.20±18.38)、DKK1组为(110.40±9.46),P<0.05。结论 Wnt/β-catenin信号通路在促进HepG2细胞的增殖和迁移方面起重要作用,在肝癌的发生发展和转移中起着重要的作用,是肝癌发生的重要分子机制。

刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠WNT通路相关蛋白表达的影响

目的观察刺山柑总生物碱对系统性硬皮病(SSc)小鼠组织纤维化密切相关的WNT通路中WNT1、WNT2、Dickkopf相关蛋白2(DKK2)和分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响,探讨其对SScWNT通路的调控作用机制。方法小鼠皮下注射博莱霉素4周复制SSc模型。90只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、青霉胺组和刺山柑总生物碱组低、中、高剂量组,受试药组小鼠背部外敷刺山柑总生物碱乳膏,青霉胺组给予青霉胺灌胃,正常组和模型组小鼠背部外敷不含药乳膏基质,每日1次,连续8周。HE染色观察小鼠皮肤组织病理形态,ELISA检测小鼠皮肤组织WNT1、WNT2及血清DKK2、SFRP1的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠皮肤出现明显炎症与纤维化的病变,WNT1、WNT2表达明显升高,DKK2表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,刺山柑总生物碱中、高剂量组小鼠皮肤炎症和纤维化均减轻,WNT1、WNT2表达明显降低,DKK2表达明显升高(P<0.05,P<0.01),对SFRP1水平无明显影响(P>0.05)。结论刺山柑总生物碱可能通过下调SSc小鼠WNT1、WNT2表达和上调DKK2表达,对SSc小鼠WNT通路有一定抑制作用。

RNA干扰敲低Wnt2的表达抑制U251细胞生长的体内外研究

目的 在体内外研究转染靶向Wnt2的siRNA对U251细胞的抑制效果.方法 向U251细胞转染靶向Wnt2的siRNA后,免疫印记检测转染后Wnt2及相关蛋白表达,MTT检测细胞增殖,annexin标记细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期分布,鼠尾胶3D生长实验检测细胞侵袭能力的变化.建立裸鼠胶质瘤皮下动物模型,瘤内注射Wnt2 siRNA观察肿瘤生长情况.结果 转染Wnt2siRNA后,U251细胞的Wnt2、frizzled2、磷酸化GSK-3β、β-catenin等表达降低,细胞增殖受抑,凋亡率升高,细胞阻滞于G0/G1期.体内研究发现转染靶向Wnt2的siRNA后,裸鼠皮下肿瘤的生长速度缓慢,相应的蛋白表达降低.结论 转染靶向Wnt2的siRNA可有效敲低该基因在U251细胞内的表达,从而抑制了胶质瘤细胞生长,具有潜在的治疗前景.

Wnt2与β-catenin蛋白在食管癌中的表达特点及病理意义

[目的]探求Wnt通路相关蛋白Wnt2和β-catenin在食管癌不同病变组织中的表达特点。[方法]将癌旁相对正常食管组织9例、癌前病变38例与手术切除诊断明确的83例食管癌标本,制成石蜡组织微阵列,用免疫组织化学方法检测微阵列组织Wnt2与β-catenin的表达,分析二者表达与食管癌侵袭、转移的关系以及两种蛋白表达的相互关系。[结果]癌旁相对正常、癌前病变与食管癌组织,Wnt2表达率分别为22.2%、50.0%和72.3%;β-catenin表达率分别为33.3%、47.4%和69.9%,且二者的表达在各组间差异显著升高趋势明显(P<0.05);两种蛋白在鳞癌的表达率(77.9%、75.0%)均显著高于腺癌(46.7%、46.7%),P<0.05;淋巴结转移组的表达率(86.4%、81.8%)均显著高于无淋巴结转移组(56.4%、56.4%),P<0.05;在侵润深度T3、4组的表达率(81.0%、82.8%)均明显高于T1、2组(52.0%、40.0%),P<0.05。在临床I-II期与III-IV期标本Wnt2蛋白表达率分别为62.8%与82.5%,后者显著高于前者(P<0.05),但β-catenin表达率在两组间差异无显著性意义(P>0.05)。Wnt2与β-catenin表达呈正相关关系(P<0.05,r=0.740)。[结论]Wnt通路中的重要分子Wnt2与β-catenin蛋白异常表达可能为食管癌发生、演进中重要的分子事件,可作为食管癌诊断及预后预测的候选生物标记物。

绵羊Wnt2蛋白生物信息学分析

Wnt2蛋白是Wnts蛋白家族的重要成员,参与卵巢的发育。本研究以NCBI蛋白质数据库中发布的Wnt2蛋白氨基酸序列为研究对象,采用生物信息学软件对Wnt2蛋白的理化性质、信号肽及跨膜结构域、糖基化和磷酸化位点、二级结构和功能结构域、亚细胞定位和功能结构分类、序列相似比对及聚类、三级结构进行预测分析。结果发现,绵羊Wnt2由360个氨基酸组成,其等电点为9.21,有糖基化位点和磷酸化位点,是一个有信号肽的稳定的蛋白;二级结构与三级结构一致,均显示Wnt2由α-螺旋、延伸链、无规则卷曲构成;绵羊Wnt2蛋白是细胞外蛋白,主要参与信号转导和转录调控。研究结果为深入探讨Wnt2基因及其编码蛋白的结构和功能提供相关依据。

Wnt2在乳腺癌患者中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭力的影响

目的 :探讨Wnt2在乳腺癌患者中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭力的影响。方法 :ELISA法检测健康志愿者和乳腺癌患者血清中Wnt2的含量;免疫组织化学法检测乳腺癌组织及其相应癌旁组织中Wnt2的表达。分别取Wnt2高表达和Wnt2低表达的乳腺癌组织进行原代细胞培养,应用Transwell小室法和细胞黏附实验检测2种乳腺癌细胞的侵袭能力和黏附能力。结果 :乳腺癌患者血清中Wnt2的含量明显高于健康志愿者(P<0.05),乳腺癌组织中Wnt2的阳性表达率明显高于其相应的癌旁组织(P<0.01)。Wnt2高表达的乳腺癌细胞的侵袭能力和黏附率均高于Wnt2低表达的乳腺癌细胞(P值均<0.05)。结论 :乳腺癌组织中Wnt2高表达,Wnt2高表达的乳腺癌细胞侵袭能力较强。

miR-598靶向下调Wnt2b抑制肝癌细胞增殖并诱导凋亡

目的探讨miR-598对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法采用qRT-PCR检测肝癌组织和肝癌细胞SNU-449、Huh7、HCCLM3及正常肝细胞L-02中miR-598表达水平。在Huh7细胞中转染miR-598mimics,分为空白对照组、miR-NC组、miR-598组、miR-NC+吉非替尼(2.5μmol·L^(-1))组和miR-598+吉非替尼组。CCK-8法检测细胞增殖,平板细胞克隆实验检测细胞克隆能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2和Wnt2b蛋白表达,荧光素酶报告系统鉴定miR-598和Wnt2b靶向关系。共转染miR-598 mimics、pcDNA3.1-Wnt2b,分为空白对照组、miR-598+吉非替尼+NC组和miR-598+吉非替尼+Wnt2b组,观察细胞增殖、克隆、凋亡变化。结果肝癌细胞SNU-449、Huh7、HCCLM3中miR-598表达水平低于正常肝细胞L-02(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-598组和miR-NC+吉非替尼组细胞存活率低,克隆形成数目少,细胞凋亡率高,Bax蛋白表达水平增加,Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。与miR-598组和miR-NC+吉非替尼组比较,miR-598+吉非替尼组细胞存活率降低,克隆形成数目减少,细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平增加,Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。miR-598靶向下调Huh7细胞中Wnt2b表达水平。miR-598+吉非替尼+Wnt2b组较miR-598+吉非替尼+NC组的细胞存活率高,克隆形成数目多,细胞凋亡率低,Bax蛋白表达水平低,Bcl-2、Wnt2b蛋白表达水平高(P<0.05)。结论 miR-598可抑制Huh7细胞增殖并诱导凋亡,可能通过靶向下调Wnt2b表达,提高Huh7细胞对吉非替尼的敏感性。

散乱蛋白与Wnt2在喉癌组织中的表达及临床意义

目的探讨散乱蛋白(Dvl)与Wnt2在喉癌组织中的表达及临床意义。方法选取2016年2月至2018年5月间空军军医大学唐都医院收治的经病理检查确诊的98例喉癌患者,采集所有患者癌灶组织标本与癌旁(距离癌组织外0.5cm)正常组织标本。采用免疫组化法检测两种组织Dvl与Wnt2的表达情况,并进行相关性分析。结果癌灶组织的Dvl与Wnt2阳性表达率分别为79.6%和73.5%,均高于癌旁正常组织的9.2%和11.2%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。癌灶组织的Dvl和Wnt2阳性表达率在患者不同临床分期、吸烟、淋巴结转移和组织学分化中的表达比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),在不同性别和年龄患者中的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。非参数Spearman等级相关分析显示,癌灶组织Dvl阳性表达率与Wnt2阳性表达率呈正相关性(P<0.05)。结论Dvl与Wnt2在喉癌组织中呈高表达,两者存在正相关性,两者与患者的临床分期、吸烟、淋巴结转移及组织学分化相关.

Wnt信号通路激活在肝门部胆管癌发生中的作用

目的探讨Wnt信号通路激活在肝门部胆管癌发生中的作用。方法回顾性分析1998年7月至2007年5月在中山大学附属第一医院行手术切除治疗的129例肝门部胆管癌及45例先天性胆总管囊肿患者临床资料。其中肝门部胆管癌患者男91例,女38例;平均年龄(56±23)岁。先天性胆总管囊肿患者男32例,女13例;年龄(39±11)岁。所有患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。制作患者病理标本的组织芯片,对Wnt信号蛋白(Wnt)-2、β-链蛋白(β-catenin)、T细胞因子-4(TCF-4)蛋白进行免疫组化染色。以Wnt-2、β-catenin和TCF-4 3个指标同时阳性表达为Wnt信号通路激活。两组率的比较采用χ2检验。结果免疫组织染色结果显示,肝门部胆管癌组织Wnt-2阳性表现为细胞浆出现棕黄色颗粒,β-catenin、TCF-4阳性表现为细胞核出现棕黄色颗粒。肝门部胆管癌组织中Wnt-2、β-catenin和TCF-4 3个指标同时阳性表达的发生率为54%(70/129),明显高于先天性胆管囊肿的29%(13/45)(χ2=11.2,P<0.05)。结论 Wnt信号通路激活可能是肝门部胆管癌发生的重要分子生物学机制之一。

高良姜素对乳腺癌细胞MCF-7增殖及迁移的影响

目的研究高良姜素对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移及Wnt2蛋白表达的影响。方法MCF-7细胞分为实验组和对照组,以终浓度为5,10,20,40,80μmol·L^-1的高良姜素干预MCF-7细胞为实验组,无高良姜素干预为对照组。以CCK-8法、Transwell小室、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术及蛋白质印迹法(WB)检测并比较高良姜素对MCF-7细胞的增殖抑制、迁移能力、细胞周期及凋亡、Wnt2蛋白表达的影响。结果干预72 h,5,10,20,40,80μmol·L^-1实验组MCF-7细胞增殖抑制率分别为(7.41±1.02)%,(22.14±1.58)%,(38.09±1.88)%,(50.86±2.68)%,(78.16±3.57)%;干预24 h,5,10,20,40,80μmol·L^-1实验组细胞迁移抑制率分别为(8.79±2.35)%,(14.63±2.45)%,(26.18±3.02)%,(34.48±2.16)%,(50.37±2.08)%。与对照组比较,实验组细胞凋亡率明显升高,G0/G1、G1/G2期细胞比例升高,G2/M和S期细胞比例降低(均P<0.05)。与对照组比较,20,40,80μmol·L^-1实验组Wnt2蛋白表达量明显降低(均P<0.05)。结论高良姜素可抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖及迁移,并促其凋亡,与降低Wnt/β-catenin信号转导通路活性有关。