不同发展阶段黑素瘤细胞中Wnt5A和Wnt11基因表达的动态变化

目的:研究Wnt/Ca2+通路中Wnt5A,Wnt11基因在不同发展阶段的黑素瘤细胞中的表达水平.方法:运用RT-PCR法,检测正常黑素细胞和6种黑素瘤细胞中Wnt5A和Wnt11基因表达水平.结果:在正常黑素细胞和不同的黑素瘤细胞中,Wnt5A和Wnt11基因的表达均表现出动态变化的特征.Wnt5A和Wnt11水平在正常黑素细胞中表达很低,而在黑素瘤细胞中有不同程度的升高.另外,分别来自表面生长阶段、结节状生长阶段和黑色素瘤淋巴结转移的WM793B,451Lu和A2058细胞系中,Wnt5A和Wnt11基因表达水平逐渐下降,甚至在A2058细胞系中,两种基因的表达均低于正常黑素细胞.结论:在黑素瘤的不同发展阶段,Wnt5A和Wnt11基因表达的动态变化使非经典的Wnt/Ca2+通路激活程度不同.

Wnt1诱导分泌蛋白-1通过NF-κB通路促进食管鳞癌细胞的增殖和侵袭转移

目的:探讨Wnt1诱导分泌蛋白-1(Wnt1 induced secreted protein-1,WISP-1)在食管鳞癌细胞侵袭转移的作用机制。方法:体外培养人食管鳞癌细胞株Eca109、TE-8和正常食管上皮细胞Het-1a,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测WISP-1表达。将食管鳞癌细胞株Eca109和TE-8分为空白对照组、阴性对照组和WISP-1 siRNA组,利用CCK8法检测各组细胞增殖改变;流式细胞术分析不同处理组细胞凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭能力变化;蛋白质印迹法检测细胞中VEGF-A,VEGF-C,MMP2,MMP9以及NF-κB通路相关蛋白的表达量;酶联免疫吸附法测定培养上清液中VEGF-C和MMP9分泌量。结果:荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,食管鳞癌细胞中WISP-1表达量高于正常食管上皮细胞(P<0.01);CCK8和流式细胞术结果显示,下调WISP-1后,食管鳞癌细胞株增殖明显抑制(P<0.05),凋亡率无明显影响;蛋白质印迹结果显示,下调WISP-1对VEGF-A和MMP2表达无明显影响,而VEGF-C和MMP9表达明显得到抑制;酶联免疫吸附结果显示,VEGF-C和MMP9分泌量随WISP-1下调也出现明显下降(P<0.05);下调WISP-1后,食管鳞癌细胞株侵袭能力明显降低(P<0.01);下调WISP-1表达显著抑制NF-κB磷酸化并促进IκBα的磷酸化,抑制NF-κB信号活化水平。结论:WISP-1可通过NF-κB通路,增加MMP9,VEGF-C的表达和分泌,促进食管鳞癌细胞增殖及侵袭转移的能力。