芒柄花黄素调控P2X7R/NLRP3通路对高糖诱导的心肌细胞炎症反应与焦亡的影响

目的探讨芒柄花黄素(FN)调控嘌呤能2X7受体(P2X7R)/核苷酸结合寡聚化结构域受体蛋白3(NLRP3)通路对高糖诱导的心肌细胞的炎症反应与细胞焦亡的影响机制。方法将H9C2细胞分为对照组、高糖(HG)组、HG+FN低浓度(FN-L)组、HG+FN中浓度(FN-M)组、HG+FN高浓度(FN-H)组、HG+FN-H+P2X7R激活剂(ATP)组。24 h后,CCK-8检测H9C2细胞活力变化;TUNEL染色检测细胞焦亡变化;qRT-PCR检测焦亡因子白细胞介素(IL)-18、半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)、NLRP3 mRNA表达水平;ELISA检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6和IL-1β水平;Western blot检测P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达水平。结果与对照组相比,HG组细胞活力显著下降(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05);与HG组相比,HG+FN-L组、HG+FN-M组、HG+FN-H组细胞活力显著增加(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著降低(P<0.05);与HG+FN-H组相比,HG+FN-H+ATP组细胞活力显著下降(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论FN通过抑制P2X7R/NLRP3通路减轻高糖诱导的心肌细胞的炎症反应与细胞焦亡,缓解细胞损伤。

基于P2X7R/NLRP3通路探讨枳葛口服液改善大鼠酒精性肝损伤的作用机制

目的探讨枳葛口服液改善大鼠酒精性肝损伤的作用机制。方法60只大鼠随机分为正常组,模型组(白酒),枳葛口服液高、中、低剂量组(10、5、2.5 mL/kg),造模及给药12周后处死大鼠,计算肝脏指数,HE染色观察肝组织病理学改变,Western blot法检测肝组织P2X7R、NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达,免疫组织化学法检测肝组织NLRP3蛋白表达,ELISA法检测血清IL-6、IL-18、TNF-α、NF-κB水平。结果与模型组比较,枳葛口服液高剂量组大鼠肝脏指数降低(P<0.05),大鼠肝组织形态正常,基本无脂肪空泡及炎症细胞浸润,肝组织P2X7R、NLRP3、caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),血清IL-6、IL-18、TNF-α、NF-κB水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论枳葛口服液可能通过降低P2X7R/NLRP3通路相关蛋白表达,减轻大鼠炎症因子产生,从而发挥改善酒精性肝损伤的作用。

环保型多重掺杂X7R瓷料的多元非线性回归分析

通过引入自制复合氧化物掺杂剂,应用多元非线性回归分析方法,建立了多元非线性回归数学模型y=b0+∑bixi+∑biixi2+∑biiixi3,确立了环保型多重掺杂X7R多层陶瓷电容器(MLCC)瓷料中各种掺杂剂的用量对介电常数及电容量温度变化率(△C／C25℃)的多元非线性回归方程,并进一步解释了部分掺杂剂的改性机理．回归方程表明,介电常数随 Nb、Ce掺杂量的增加而降低,这与当前较为成熟理论“壳-芯”结构模型完全吻合．最后通过回归方程优化瓷料配方,研制了环保型X7R MLCC瓷料系统．在空气中于1140℃下烧成的BaTiO3陶瓷材料的主要性能指标达到: ε298K=2900±50,tgδ≤1．0％,ρ≥1011Ω·cm, △C／C25℃(-55℃^+125℃)≤±15％．

夹脊电针调控P2X7R/NLRP3信号通路相关因子改善脊髓损伤大鼠微环境炎症反应的作用机制研究

目的:明确夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠P2X7R受体介导的炎症反应的作用以及机制,为夹脊电针的临床应用提供理论依据。方法:120只大鼠,均分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、夹脊电针组(EA组)、P2X7干扰组(P2X7R siRNA组)和干扰对照组(Control siRNA组)共5组,每组又分1 d、3 d、7 d和21 d 4个时间点。BBB评分评定大鼠后侧肢体运动功能;免疫组化法检测脊髓组织中Cleaved caspase-1、IL-1β及P2X7R表达变化;免疫荧光双标法检测脊髓组织中P2X7R在小胶质细胞中的表达变化。结果:与Sham组比较,各时间点Model组大鼠BBB评分降低(P<0.05);与Model组大鼠比较,术后3 d、7 d、21 d EA组和P2X7R siRNA组大鼠BBB评分升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Sham组比较,术后1 d、3 d、7 d和21 d Model组大鼠脊髓组织Cleaved caspase-1、IL-1β和P2X7R增加(P<0.05);与P2X7R siRNA组比较,3 d、7 d和21 d时间点Control siRNA组Cleaved caspase-1、IL-1β及P2X7R表达仍然较高,差异有统计学意义(P<0.05);与Model组比较,造模后3 d、7 d和21 d 3个时间点EA组脊髓组织Cleaved caspase-1明显降低(P<0.05),造模后7 d和21 d两个时间点EA组脊髓组织IL-1β、P2X7R明显降低(P<0.05);与Model组比较,造模后3 d、7 d和21 d 3个时间点P2X7R siRNA组脊髓组织Cleaved caspase-1、IL-1β和P2X7R明显降低(P<0.05)。P2X7R同OX42(小胶质细胞标志物)存在共定位。结论:夹脊电针可以通过干扰脊髓损伤大鼠脊髓组织中Cleaved caspase-1、IL-1β和P2X7R的表达,抑制炎性反应,从而促进肢体运动功能恢复。

厚膜EMI滤波器用X7R介质瓷料的研究

利用先驱体NiNb2O6与MnNb2O6掺杂法改性BaTiO3系统。由于2种先驱体可以有效地起到展宽与移峰效应,使系统居里峰在室温附近取得最大值,在1290℃烧结时介电常数达到5000以上,容量变化率ΔC/C≤±15%;在系统中加入适量助熔剂可以实现中温烧结(1150℃),介电常数大于3600,容量变化率ΔC/C≤±12%,满足X7R特性要求,可用于厚膜EMI滤波介质瓷料的制备。

X7R型复相陶瓷的制备及介电性能研究

用两相混合烧结法制备了 PZN基和 BT基复合的复相陶瓷。研究了起始两相的比例以及粉末的粒度和烧成条件对复相陶瓷介电性能的影响。通过优化工艺条件 ,获得了满足 X7R(ΔC/ C<± 15 % ,- 5 5～ 12 5°C)

颗粒包覆法制备X7R特性PZN基复相陶瓷

采用溶胶-凝胶颗粒包覆技术在Ph（Zn1／3Nb3／3）O3基因溶体颗粒表面形成一层低熔硼硅包覆物，以包覆后的两种固溶体为高低温组元制备复相陶瓷．结果表明；颗粒包覆物可显著降低复相陶瓷的烧结温度，并有效抑制两相固溶反应，获得了低烧结温度、高介电常数。

X7R特性瓷粉水基流延成型制备镍电极多层陶瓷电容器的研究

以聚丙烯酸酯乳液为粘合剂,采用水基流延成型制备镍电极多层陶瓷电容器(Ni-MLCC)。研究了水性粘合剂适合X7R瓷粉流延成型的粘度特性和热稳定性,用扫描电子显微镜(SEM)分析了所得膜片和电容器的微观结构,并对所制备电容器的电性能进行了测试。结果表明:水性聚丙烯酸酯粘合剂具有剪切稀薄的粘度特性,热分解温度低,能够满足流延成型的需求。水基流延成型制备膜片表面光滑,无缺陷,瓷粉在粘合剂中分散均匀。所制备Ni-MLCC的电极连续性好。

P2X7R在结核分枝杆菌感染中的作用研究进展

结核病是一种全球范围内的人畜共患病,由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起,其防治形势日趋严峻。嘌呤能离子通道型受体7(purinergic ligand-gated ion channel 7 receptor,P2X7R)是嘌呤受体的一个亚型,在机体抗MTB感染过程中发挥重要作用。现对P2X7R在MTB感染中的作用研究进展进行综述,有助于阐明结核病的发病机制并为其治疗提供新的策略。

预烧温度对BaTiO_3基X7R陶瓷相结构和介电性能的影响

采用传统电子陶瓷工艺制备了符合X7R指标的BaTiO_3陶瓷系统,研究了预烧过程对该系统结构和介电性能的影响。XRD和SEM分析表明,对BaTiO_3粉料的预烧增大了晶粒尺寸并增加了c/a比,预烧过程通过增加c/a比提高了铁电性,极大地提升了介电常数,但是由于电畴重定向的驰豫机制也导致了损耗角的少量增加。没有经过预烧的BaTiO_3陶瓷(1240℃烧结),其相结构近似立方相(c/a=1.0005),而把BaTiO_3粉料经过预烧(1200℃),同样烧结条件(1240℃)的BaTiO_3陶瓷相结构为四方相c/a=1.0030。BaTiO_3系统在1200℃预烧和1240℃烧结得到的样品具有满足X7R指标的优良介电性能,其介电性能为:ε_r≥4500,⊿ε_r/ε_(r25)≤±15%(-55～125℃),tanδ≤0.012(25℃)。

不同晶粒尺寸混合的钛酸钡基X7R陶瓷介电性能

对不同晶粒尺寸的钛酸钡混合烧结性能进行了研究,并同时研究了晶粒尺寸对钛酸钡陶瓷性能的影响.将初始粒径为100nm的钛酸钡粉体在不同的温度下预烧得到不同晶粒尺寸的钛酸钡粉体.将这些粉体(200nm～500nm)按照不同比例与不同粒径大小组合通过球磨混合均匀后在1250℃还原气氛下烧结.将结果与各种均一晶粒尺寸的钛酸钡X7R陶瓷进行比较.实验结果表明,不同晶粒尺寸混合烧结的钛酸钡陶瓷性能基本上都位于其单一组分性能的平均值处.SEM对陶瓷显微结构的观察表明不同大小的晶粒之间基本没有相互影响,小晶粒填补了大晶粒之间的空隙达到了在较低的温度下烧结致密化的目的.对陶瓷的绝缘电阻和击穿电压的特性也进行了研究.

类风湿关节炎与P2X7R受体关系的研究进展

类风湿关节炎是一种发病机制复杂的慢性炎症性疾病。研究发现,嘌呤受体P2X配体门控性离子通道7(P2X7R)在类风湿关节炎的发生与发展过程中起调控作用,主要通过介导各种炎性细胞因子的合成、释放参与类风湿关节炎的发病。现就类风湿关节炎与P2X7R关系的研究进展进行综述。

中脑导水管周围灰质中P2X7R调控慢性神经病理性疼痛的研究

目的研究神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray matter,PAG)中P2X7受体(P2X7receptor,P2X7R)的分布和表达变化规律,并观察鞘内给予P2X7R拮抗剂对疼痛的影响及探讨可能的机制。方法成年雄性SD大鼠78只鞘内置管,手术成功后行保留性坐骨神经损伤(spared nerve injury,SNI)手术。术后将大鼠随机均分为三组:假手术组(Sham组)、对照组(C组)、亮蓝G(brilliant blue G,BBG)组(BBG组)。术毕当天起连续7d鞘内给予生理盐水或P2X7R拮抗剂BBG10μl,每组各取8只,分别于术前、术后7、14、21d测定50%缩足阈值(PWT)作为机械痛阈,每组各取18只分别于建模后14和21d处死,取PAG组织,通过免疫荧光观察P2X7R的分布和蛋白印迹(western blot)检测P2X7R蛋白表达量的变化。结果与Sham组比较,建模后7、14、21dC组和BBG组大鼠损伤同侧后肢PWT明显降低,建模后14、21dP2X7R表达、GFAP表达明显增加(P<0.05或P<0.01)。与C组比较,建模后7、14、21dBBG组大鼠损伤同侧后肢PWT明显升高,建模后14、21d P2X7R表达、GFAP表达明显减少(P<0.01)。Sham组、C组和BBG组PAG中均存在P2X7R表达分布。P2X7R与GFAP具有重叠分布性,而与Iba-1和NeuN无重叠分布性。结论 P2X7R参与慢性神经病理性疼痛在中脑节段的调控。

基于P2X7R/NLRP3信号通道研究痛风清热方对急性痛风性关节炎大鼠局部组织中炎性信号表达的影响

目的:观察痛风清热方对急性痛风性关节炎模型大鼠的踝关节滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R基因和蛋白表达及TNF-α、IL-1β、IL-18等炎症因子水平的影响。方法:选取雄性SD大鼠48只,随机分为4组,每组12只。模型组、痛风清热方组及秋水仙碱组按经典Coderre大鼠动物模型造模,正常对照组在相应部位给予等体积生理盐水。痛风清热方组予痛风清热方水提液灌胃、秋水仙碱组予秋水仙碱悬液灌胃。干预后取受试踝关节滑膜组织,用RT-qPCR法测定滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA表达,用Western blot法测定滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R蛋白表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18含量。结果:与正常对照组比较,模型组NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),与模型组比较,痛风清热方组及秋水仙碱组NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);与正常对照组比较,模型组大鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18水平显著升高(P<0.05),与模型组比较,痛风清热方组及秋水仙碱组大鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18水平显著降低(P<0.05)。结论:痛风清热方能抑制急性痛风性关节炎大鼠踝关节滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA及蛋白表达,并能降低滑膜组织TNF-α、IL-1β、IL-18水平,减少局部组织炎症反应。

X7R型BaTiO_3基复相陶瓷的制备和表征

本文使用ZBSO纳米复合物作为助烧剂,利用溶胶-凝胶法制备了钛酸钡(高温组元,记为BT)和Nb、Co、Nd掺杂钛酸钡基(低温组元,记为BTCNC)复相陶瓷。研究了高低温组元比例对陶瓷相组成,微观结构和介电性能的影响。实验结果表明,当高低元配比为0.83BT^0.17BTNCN时,加入0.25 wt%的助烧剂,所得复相陶瓷在1 200℃烧结6h后,其介电性能满足X7R标准,最大容温变化率小于13%。

夹脊电针对脊髓损伤大鼠P2X7R/NLRP3信号通路相关蛋白的影响

目的:观察夹脊电针对脊髓损伤大鼠P2X7R/NLRP3信号通路NLRP3蛋白、NLRP3mRNA及NLRP3/OX42的共定位表达的影响,为夹脊电针在临床中治疗脊髓损伤提供实验理论依据。方法:将120只SD大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、夹脊电针组、P2X7R干扰组和干扰对照组,每组根据不同时间点分为1 d、3 d、7 d和21 d共4个亚组,每个亚组6只,假手术组仅暴露大鼠脊髓,模型组采用改良Allen’s打击法制备SCI大鼠模型,夹脊电针组于模型组基础上给予夹脊电针治疗,P2X7R干扰组于模型制备基础上注射P2X7RsiRNA干扰病毒,干扰对照组注射阴性对照病毒,选取BBB评分1~3分者纳入本实验。各组大鼠在相应时间治疗后再次进行BBB评分,然后处死并取材。用Western blot法检测NLRP3蛋白的表达,用Realtime-PCR检测各组大鼠脊髓组织NLRP3 mRNA的表达,用免疫荧光双染法观察NLRP3与OX42共定位表达。结果:BBB评分结果显示,各时间点模型组BBB评分较假手术组显著降低(P<0.05),夹脊电针治疗后BBB评分明显升高(P<0.05);术后3 d、7 d和21 d,假手术组、夹脊电针组和P2X7R干扰组NLRP3蛋白表达量均低于模型组(P<0.05),干扰对照组NLRP3蛋白表达量高于P2X7R干扰组(P<0.05);各时间点模型组NLRP3 mRNA较假手术组均升高显著(P<0.05),夹脊电针治疗后在7 d、21 d时NLRP3 mRNA表达水平明显低于模型组(P<0.05),在3 d、7 d和21 d时,P2X7R干扰组NLRP3 mRNA表达水平低于干扰对照组和模型组(P<0.05);术后各时间点模型组NLRP3与OX42共定位阳性表达较假手术组明显增多,3 d、7 d和21 d时夹脊电针组NLRP3与OX42共定位阳性表达明显低于模型组。结论:夹脊电针能降低脊髓损伤大鼠NLRP3蛋白、NLRP3 mRNA及NLRP3/OX42的共定位表达,减轻脊髓损伤大鼠炎症反应,改善脊髓损伤大鼠运动功能。

基于生物信息学的人P2X7R结构分析及功能预测

目的:利用生物信息学分析人嘌呤能离子通道型受体7(purinergic ligand-gated ion channel 7 receptor,P2X7R)蛋白结构特征,同时对不同物种的P2X7R蛋白同源性、蛋白质间的相互作用、细胞抗原表位进行预测,为相关疾病诊断与治疗提供理论依据。方法:登录ProtParam、TMHMM、ProtScale及SignalP 5.0 Server等软件对人P2X7R蛋白进行分析预测。结果:人P2X7R蛋白由595个氨基酸组成,分子式为C_(3077) H_(4749) N_(835) O_(871) S_(40,)理论等电点PI为8.62,不稳定系数46.07,总平均亲水性为−0.317;该蛋白为亲水性蛋白,无信号肽同时存在跨膜区,属于跨膜蛋白;二级结构中存在157个α-螺旋,288个无规卷曲,分别占所有氨基酸比例26.39%、48.40%,三级结构预测结果的覆盖率为100%,序列相似度为80.34%,同时拉曼图结果分析该预测结构较为稳定;蛋白相互作用结果显示,存在多种与人P2X7R蛋白相互作用的蛋白,且P2X7R与炎症发生密切相关;该蛋白存在多个B、T细胞抗原表位,可为疫苗的研制提供思路。结论:基于生物信息学方法得到的人P2X7R蛋白分析具有一定可靠性,P2X7R参与炎症疾病的发生发展,通过预测筛选出的B、Th、CTL细胞抗原表位将为疾病的治疗提供方案。

MicroRNA-155通过P2X7R激活NLRP3炎性小体促进ApoE-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块的形成

目的:探索在ApoE−/−小鼠中,microRNA-155 (miR-155)调控NLRP3炎症小体参与其颈动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)斑块形成的可能机制,为预防和治疗AS提供理论基础。方法:36只6周龄的雄性ApoE−/−小鼠随机分为6组(每组6只):blank组、NC组、miR-155 mimic组、miR-155 inhibitor组、miR-155 mimic and NC组、miR-155 mimic and P2X7R(-)组。利用PCR技术检测小鼠颈动脉斑块中miR-155的表达水平,HE染色显示颈动脉内膜,利用western blot技术检测P2X7R、NLRP3炎症小体相关蛋白、IL-1β表达水平。结果:与NC组相比,miR-155 mimic组中miR-155表达、P2X7R、NLRP3炎症小体相关蛋白以及IL-1β表达的升高有显著的统计学意义(P −/−小鼠中,miR-155可能通过调控P2X7R,激活NLRP3炎症小体,增强炎症反应,从而促进AS斑块的形成和发展。

夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠脊髓组织P2X7R、NLRP3蛋白表达的影响

目的:观察夹脊电针对急性脊髓损伤(ASCI)大鼠P2X7R、NLRP3蛋白和基因表达的影响,探讨夹脊电针治疗急性脊髓损伤作用机制。方法:72只SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(Model)和夹脊电针组(EA),采用Allen’s打击法制备脊髓损伤模型,治疗1 d、3 d、7 d、21 d后采用BBB评分法对大鼠脊髓损伤后运动功能进行评估;于治疗后1 d、3 d、7 d、21 d提取脊髓组织,蛋白印迹法(Western blot)测定大鼠脊髓组织中P2X7R、NLRP3蛋白表达的变化,实时荧光定量PCR测定NLRP3 mRNA、P2X7R mRNA的表达变化。结果:蛋白印迹法结果显示,Sham组中NLRP3、P2X7R蛋白表达均维持在少量而稳定的低水平,与Sham组比较,Model组3 d、7 d和21 d NLRP3蛋白表达显著升高(P<0.05),与Model组相比,EA组在各时间点NLRP3蛋白表达均下降(P<0.05);而与Sham组比较,Model组P2X7R蛋白表达在3 d、7 d和21 d升高(P<0.05),与Model组比较,EA组P2X7R表达在术后7 d、21 d蛋白表达明显下降(P<0.05);实时荧光定量PCR结果显示,与Sham组相比较,Model组各时间点NLRP3 mRNA、P2X7R mRNA表达均升高(P<0.05),与Model组比较,EA组NLRP3 mRNA、P2X7R mRNA表达均下降(P<0.05)。结论:夹脊电针通过抑制P2X7R、NLRP3的表达而发挥对急性脊髓损伤大鼠的治疗作用。

miR-373通过P2X7R影响抑郁症小鼠行为的作用机制

目的探讨miR-373对抑郁症小鼠模型抑郁样行为,小胶质细胞激活和焦亡的影响。方法采用慢性不可预知应激构建抑郁症小鼠模型。蔗糖偏好,强迫游泳,尾部悬挂和社会实验评估小鼠的抑郁样行为。免疫荧光双染小胶质细胞标志物Iba-1和小胶质细胞活化标志物OX-42以评估小鼠海马层中小胶质细胞增殖和活化状态。TUNEL试剂盒检测小胶质细胞的凋亡。荧光定量PCR检测miR-373的表达水平。蛋白质印记检测P2X7R和细胞焦亡相关蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-373和P2X7R的靶向关系。结果慢性不可预知应激处理的小鼠,蔗糖偏好度和社交时间显著下调,并且强迫游泳和尾部悬挂不动时间显著增加(P<0.05)。miR-373在抑郁症模型小鼠中异常高表达,且能够缓解小鼠的抑郁样行为(P<0.05)。miR-373靶向负调控小鼠海马层小胶质细胞中P2X7R的表达水平(P<0.01)。miR-373抑制小鼠海马层中小胶质细胞增殖和激活(P<0.01)。miR-373抑制小胶质细胞中Caspase-1,C-caspase-1,NLRP3,IL-1β和IL-18表达,并抑制小胶质细胞凋亡(P<0.05)。结论miR-373通过靶向抑制P2X7R的表达,从而缓解抑郁症小鼠模型的抑郁样行为,并抑制其海马层中小胶质细胞活化和焦亡。