XAGE-1b在前列腺癌患者血清中的表达及其与Gleason评分的相关性

目的 检测XAGE-1b在前列腺癌患者血清中的表达情况,研究其与Gleason评分的相关性.方法 收集1 55例前列腺癌患者、131例良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia,BPH）患者和178例健康人群的血清,用Luminex液相芯片法检测XAGE-1b和前列腺癌特异性抗原（prostate specific antigen,PSA）的表达水平,同时确定XAGE-1b的正常值范围,计算XAGE-1b抗原表达阳性率、特异性和敏感度.Western blot法验证阳性血清,并分析其与Gleason评分的相关性.结果 XAGE-1b在前列腺癌和BPH患者血清中的阳性表达率分别为52.3％和8.4％,两组数据之间差异有统计学意义（P=0.021）.以BPH患者组为对照,XAGE-1b检测前列腺癌的敏感性和特异性分别为90.1％和52.9％;其中,在PSA水平为4～10 ng/mL的人群中XAGE 1b检测前列腺癌的敏感度和特异性分别为70.4％和48.4％.Spearman等级相关分析线显示XAGE-1b与Gleason评分呈正相关（r=0.891）.结论 XAGE-1b在前列腺癌患者血清中有较高表达,XAGE-1b抗原的表达水平与Gleason评分之间呈正相关.

葶苈子对压力负荷大鼠心肌CYP11B1、CYP11B2及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的:研究葶苈子水提液对压力负荷大鼠心肌CYP11B1、CYP11B2及TGF-β1 mRNA表达的影响。方法:腹主动脉不完全结扎法(AAB)制作大鼠心肌肥厚、心室重构模型。药物干预30d后,称重法测定心脏指数(HW/BW)、左室重量指数(LVW/BW),Real-Time PCR反应技术,以Rat 18S为内参照,测定心肌CYP11B1,CYP11B2,TGF-β1 mRNA的表达水平。结果:模型组大鼠心脏指数增高,醛固酮合成基因和转化生长因子β1表达增强。葶苈子水提液能改善心肌肥厚指数,降低大鼠心肌醛固酮合成基因CYP11B1、CYP11B2及TGF-β1的mRNA表达水平。结论:葶苈子水提液可能通过抑制心肌醛固酮合成相关基因CYP11B1、CYP11B2 mRNA表达水平,降低转化生长因子β1的合成而抑制心室重构的发生。

XAGE-1b基因在非小细胞肺癌中的表达及与临床特点的相关性研究

目的探讨XAGE-1b基因在非小细胞肺癌中的表达水平及与临床特点的相关性。方法非小细胞肺癌患者30例,通过手术获得肺癌组织和癌旁正常肺组织,分别提取组织总RNA,RT-PCR反应扩增XAGE-1b基因全长,通过电泳和基因测序鉴定RT-PCR产物,确定基因表达阳性标本,分析基因表达阳性率及与临床特征相关性。结果30例肺癌组织中,XAGE-1b基因表达阳性率为40%(12/30),30例癌旁正常肺组织不表达该基因;基因表达与患者年龄、性别、肿瘤分化程度无相关性,与病理类型有相关性,腺癌中基因表达阳性率明显高于其他病理类型(61.1%vs8.3%,P=0.015);随着TNM分期的升高,基因表达阳性率略有增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论XAGE-1b基因在肺腺癌中高表达,可优先选择该基因作为肺腺癌免疫治疗靶点。

葛根素对糖尿病大鼠血脂和主动脉基膜粘连蛋白B_1 mRNA表达的影响

目的观察葛根素对糖尿病大鼠血脂和主动脉基膜粘连蛋白B1mRNA表达的影响。方法利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导建立1型糖尿病大鼠模型,将实验用SD大鼠随机分正常对照组、糖尿病组、葛根素治疗组。治疗12周,观察治疗期间及治疗后大鼠的一般状况、血糖(BS)、甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)、糖化低密度脂蛋白(G-LDL);分离主动脉,HE染色及原位杂交检测主动脉内膜基膜粘连蛋白B1mRNA表达。结果造模2组大鼠均出现血脂异常及主动脉病理形态改变;葛根素能改善基本状况,降低糖尿病大鼠的甘油三脂、胆固醇、低密度脂蛋白、糖化血红蛋白和糖化低密度脂蛋白(P<0.05);升高高密度脂蛋白(P<0.05);降低主动脉基膜粘连蛋白B1mRNA表达(P<0.05)。结论葛根素具有确切的主动脉保护作用。

榄香烯乳对肺腺癌A549细胞hnRNPA2/B1的mRNA及蛋白表达的影响

目的 :观察榄香烯乳对人肺腺癌细胞株A5 4 9细胞hnRNPA2 /B1mRNA及蛋白表达的影响。方法 :选用A5 4 9细胞株 ,应用MTT法检测细胞增殖 ,显微镜下观察细胞形态变化 ,逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR)检测hnRNPA2 /B1mRNA表达 ,蛋白印迹法检测hnRNPA2 /B1蛋白表达。结果 :榄香烯乳对A5 4 9细胞体外增殖有显著抑制作用 ,且呈时间和剂量依赖性 ,其IC50 值为 15 μg/ml,hnRNPA2 /B1mRNA及蛋白表达水平均有下降。 结论 :榄香烯乳可抑制肺腺癌A5 4 9细胞增殖 ,致其hnRNPA2 /B1的mRNA和蛋白表达水平均有下降。

电针对阿尔茨海默病大鼠海马CA_1区天门冬氨酸受体NR2B mRNA表达的影响

目的:观察电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马CA1区天门冬氨酸(NMDA)受体NR2B mRNA表达的影响。方法:选取50只Wistar雄性大鼠,进行行为学测试,随机分成5组:空白组、模型对照组、模型组、西药组和电针组,每组10只。腹腔注射D-半乳糖制备动物模型,电针组选取"百会"、"大椎"、"肾俞"、"太溪"、"足三里"电针治疗,以Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力,用原位杂交方法检测海马CA1区天门冬氨酸受体NR2B mRNA的表达。结果:空白组、模型对照组海马CA1区天门冬氨酸受体NR2B mRNA有较高表达,二者之间无显著性差异(P>0.05);模型组海马CA1区天门冬氨酸受体NR2B mRNA表达水平显著降低,与空白组、模型对照组比较有极显著性差异(P<0.01);电针组、西药组较模型组表达水平显著增多,有极显著性差异(P<0.01);电针组、西药组二组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:电针治疗能够提高天门冬氨酸受体NR2B mRNA的表达,能够改善学习记忆能力。

非小细胞肺癌VEGFR-2与XAGE-1b基因表达相关性研究

目的探讨非小细胞肺癌中血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)与肿瘤-睾丸抗原XAGE-1b基因表达的相关性。方法从30例非小细胞肺癌患者肿瘤组织中提取总RNA、RT-PCR反应扩增XAGE-1b基因、定量RT-PCR检测VEGFR-2表达水平,分析二者表达的相关性以及与临床特征的相关性。结果 30例患者中,XAGE-1b表达阳性率为40%,61.1%的腺癌表达XAGE-1b,远高于非腺癌的8.3%(χ2=6.302,P=0.012)。XAGE-1b与VEGFR-2表达水平呈正相关(r=0.546,P=0.002),XAGE-1b阳性患者的VEGFR-2表达水平偏高。多元回归分析显示,病理类型(比值比0.072,95%可信区间0.007～0.785,P=0.031)和VEGFR-2表达水平(比值比14.765,95%可信区间1.274～171.144,P=0.031)是XAGE-1b表达的影响因素。XAGE-1b表达阳性与阴性、VEGFR-2表达高与低患者的生存时间差异均无统计学意义(Log-rankP=0.416、P=0.384)。结论非小细胞肺癌中VEGFR-2与XAGE-1b基因表达呈正相关,XAGE-1b表达阳性并且VEGFR-2高表达的患者可能是免疫疗法与抗血管生成疗法联合治疗的合适人群。

茶多酚对高脂环境中THP-1细胞核因子-κB、转化生长因子-β_1 mRNA表达的影响

目的 :观察茶多酚 (TP)对单核细胞源性泡沫细胞核因子 -κB(NF -κB)、转化生长因子 - β1(TGF -β1)mRNA表达的影响。方法 :分别用极低密度脂蛋白 (VLDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、氧化低密度脂蛋白 (ox -LDL)诱导人髓系白血病单核细胞株THP - 1细胞向泡沫细胞转化 ,加入TP干预后检测细胞NF -κB的核移位率、TGF - β1mRNA阳性指数、细胞内胆固醇含量等。结果 :茶多酚浓度为 0 4 - 4 0 μg/L时细胞NF -κB的核移位率、TGF - β1mR NA阳性指数、细胞内胆固醇含量等均低于未用TP干预的细胞 (P <0 0 5 )。结论 :一定浓度的TP对高脂环境中单核-巨噬细胞NF -κB活化、TGF - β1mRNA表达有抑制作用 ,并阻止泡沫细胞形成。

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1mRNA基因表达的影响

目的:采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA基因表达的影响。方法: 以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA 基因表达,并进行比较。结果:病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强(P <0．01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达(P<0．01)。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR- NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。

七氟醚对新生大鼠海马神经元NMDA受体1亚基和2B亚基mRNA的影响

目的观察七氟醚对新生大鼠海马组织NMDA受体1亚基和2B亚基mRNA的表达水平及大鼠在学习、记忆能力方面的影响。方法将48只出生后7 d的SD乳鼠,体质量10～15 g,雌雄不限,随机分为两组,即七氟醚吸入组(S组):吸入2.3%七氟醚4 h;对照组(D组):吸入氧气4 h,各24只。麻醉结束后,立即随机取S组8只(S1组)、D组8只(D1组)断头取脑,分离海马组织,进行实时荧光定量PCR检测NMDA受体l亚基和2B亚基mRNA的表达情况。剩余的S组和D组乳鼠各16只,在空气条件下饲养7 d后,随机各取8只分为S2组和D2组,取大脑海马组织重复实时荧光定量PCR检测NMDA受体l亚基和2B亚基mRNA的表达情况。最后存活的乳鼠各8只,即S3组和D3组,进行跳台试验。结果与对照组(D1组和D2组)比较,吸入七氟醚的实验组(S1组和S2组),乳鼠的大脑海马组织的NMDA受体1亚基、2B亚基mRNA表达降低,与对照组(D3组)比较,吸入七氟醚的实验组(S3组)乳鼠学习成绩、记忆成绩显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论持续暴露于七氟醚中可降低未成熟SD大鼠学习、记忆能力,其原因可能与NMDA受体l亚基、2B亚基mRNA的表达降低有关。

人癌症/睾丸相关蛋白XAGE-1b原核表达载体的构建及融合蛋白的表达

目的构建人癌症/睾丸相关蛋白XAGE-1b原核表达载体及诱导XAGE-1融合蛋白表达。方法从文库质粒pACT2-XAGE-1b中利用PCR法扩增XAGE-b cDNA编码序列,将其克隆到pET-32a载体中,并将重组质粒pET-32bXAGE-1b转染大肠杆菌DE3中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Western blot检测融合蛋白表达。结果原核表达载体pET-32a-XAGE-1b构建成功;转染菌株经IPTG诱导后,出现约29 kD蛋白过表达,Western-blot检测显示His6融合蛋白表达。结论成功构建原核表达载体pET-32a-XAGE-1b,转染菌株可表达His6融合蛋白。

XAGE-1b基因在肝癌细胞中的表达

目的:探讨XAGE-1b基因在肝癌细胞中的表达。方法:选择肝癌患者44例,通过手术获得肝癌组织和癌旁正常组织,分别提取组织总RNA、RT-PCR反应扩增XAGE-1b基因全长,通过电泳和基因测序鉴定RT-PCR产物,确定基因表达阳性标本,分析基因表达阳性率。结果:44例肝癌组织中,XAGE-1b基因表达阳性率为43.18%(19/44),44例癌旁正常组织不表达该基因。结论:XAGE-1b基因在肝癌细胞中高表达,可考虑进一步研究该基因调控肝癌细胞恶性行为的机制。

高迁移率族蛋白B1 mRNA在脓毒症大鼠心肌组织的表达及意义

目的观察脓毒症大鼠心肌组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA的变化。方法 60只大鼠采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制作大鼠脓毒症模型,分为2 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h组,每组各10只,分别在相应的时间点处死;对照组和假手术组大鼠各10只,于72 h处死。通过实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心肌组织HMGB1 mRNA的相对含量。结果不同时间点处死脓毒症组大鼠的心肌组织HMGB1 mRNA相对对照组含量平均值为2.18±1.31,假手术组为0.92±0.14,脓毒症组与对照组间差异有统计学意义(P<0.01)。脓毒症组大鼠心肌组织HMGB1 mRNA表达在24 h明显升高,48 h达到高峰,72 h仍处于高水平,不同时间点的HMGB1 mRNA相对含量差异有统计学意义(F=183.4,P<0.01)。结论脓毒症大鼠心肌组织HMGB1 mRNA增加,有必要进一步研究其在脓毒症心肌抑制中的作用。

敲减XAGE-1b基因表达降低ACCM和A673肿瘤细胞的增殖能力

XAGE是通过生物信息学方法发现的新一类肿瘤-睾丸抗原(cancer/testis antigen,CT抗原)基因,其主要表达亚型为XAGE-1b.已有的研究表明,该基因可能与肿瘤细胞的生长相关.本研究构建了针对XAGE-1b进行RNA干扰的重组腺病毒载体Adv-Sh1和Adv-Sh2.半定量和定量RT-PCR显示,Adv-Sh1比Adv-Sh2对XAGE-1b的干扰效率更高.细胞荧光干扰实验显示,Adv-Sh1对XAGE-1b有显著的干扰作用.在细胞增殖和集落形成实验中,感染Adv-Sh1后的细胞增殖能力显著降低(P<0.01),形成的单克隆集落数也显著减少.研究结果表明,下调XAGE-1b基因表达使ACCM和A673肿瘤细胞的增殖能力均有降低,提示XAGE-1b在肿瘤生长过程中可能发挥重要作用.本研究为进一步深入研究XAGE-1b的功能和致癌机制打下了良好基础.

NBP对脑I/R损伤大鼠脑组织中TNF-α、HMGB-1 mRNA表达的影响及意义

目的观察丁基苯酞(NBP)对全脑缺血/再灌注(I/R)大鼠脑组织中高迁移率族蛋白B 1(HMGB-1)mRNA、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,探讨NBP对脑I/R损伤的保护机制。方法将40只健康SD大鼠随机分为假手术对照组(A组)、单纯I/R组(B组)、NBP低剂量预处理+I/R组(C组)、NBP高剂量预处理+I/R组(D组),各10只。B^D组I/R 6 h后,采用RT-PCR法和免疫组化法分别检测其大鼠脑组织中HMGB-1 mRNA、TNF-α。结果与A组比较,B、C、D组HMGB-1 mRNA、TNF-α表达均明显增多(P均<0.05);C、D组均较B组表达降低(P<0.05),D组最低。结论NBP可能通过减少脑组织HMGB-1 mRNA、TNF-α的表达,对脑I/R损伤起到保护作用。

XAGE-1b基因在非小细胞肺癌中的表达水平及与临床特点的关系研究

通过观察非小细胞肺癌中XAGE-1b基因表达情况,探讨该基因与患者病理特点的关系。方法:以45例非小细胞肺癌患者为研究对象,提取病灶组织和病灶旁正常组织,予以总DNA提取和基因全长扩增,逆转录-聚合酶链反应产物通过电泳进而基因测序获取,记录基因表达情况,分析阳性表达与临床特点的关系。结果:XAGE-1b基因不表达于癌旁正常组织,19例肺癌组织中,该基因呈阳性表达。对比有差异(P<0.05);该基因表达与患者分化程度和病理分期不相关,数据无差异(P>0.05);病理类型为其相关因素,其他类型中,XAGE-1b基因阳性表达均不及腺癌,对比差异明显(P<0.05)。结论:XAGE-1b基因高表达于肺腺癌患者比病灶组织中,可考虑以该基因为靶点,予以肺腺癌患者免疫治疗。

基于ChIP-Seq进行肿瘤/睾丸抗原XAGE-1b的DNA结合位点鉴定

XAGE-1b(X antigen family member 1B)属于XAGE亚家族,是一种肿瘤-睾丸抗原(cancer/testis antigen,CTA),表达于正常人睾丸组织和多种类型的肿瘤细胞中.本实验室前期研究发现,该基因在涎腺腺样囊性癌高转移细胞系中呈高表达.为了进一步研究XAGE-1b下游调控基因,本实验采用ChIP-Seq技术筛查XAGE-1b蛋白质可能存在的DNA结合片段.结果发现,XAGE-1b下游调控基因富集于细胞分裂(cell division,P-Value=7.95e-04)、细胞周期调控(cell cycle,P-Value=5.532e-03)、及癌症相关基因(GESA/MSigDB module_11,P-Value=2.010e-06)中.同时发现,XAGE-1b下游调控多个基因的表达产物(NCBI/interactions 22827,P-Value=4.678e-06)能与原癌基因c-Myc的启动子抑制蛋白PUF60发生蛋白质相互作用,并通过qPCR进行了验证.这些研究对阐明XAGE-1b在肿瘤细胞的增殖和转移中的作用有重要意义.

类风湿关节炎患者PBMCs中IL-27及Blimp1 mRNA表达及意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中白细胞介素-27(IL-27)及B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(Blimp1)mRNA表达及意义。方法选取2018年1月至2019年3月中原油田医疗卫生服务中心菊园医院治疗的RA患者110例为观察组,同时选取健康志愿者100例作为对照组,采用RT-PCR检测PBMCs中IL-27及Blimp1 mRNA表达,比较不同观察组及对照组患间PBMCs中IL-27及Blimp1 mRNA表达差异,不同病情活动度RA患者PBMCs中IL-27及Blimp1 mRNA表达差异。结果观察组和对照组PBMCs中IL-27、Blimp1 mRNA相对表达量分别为(3.011±0.964)和(2.109±0.633),明显高于对照组(P>0.05);高度活动RA患者PBMCs中IL-27、Blimp1 mRNA相对表达量分别为(4.198±0.687)和(2.687±0.503),明显高于低活动度和缓解期RA患者和中度活动RA患者(P>0.05);中度活动RA患者PBMCs中IL-27、Blimp1 mRNA相对表达量分别为(3.003±0.712)和(2.094±0.480),明显高于低活动度及缓解期RA患者(P>0.05);RA患者IL-27及Blimp1 mRNA相对表达量与DAS28积分呈正相关(r=0.246和0.359,P<0.05)。结论类风湿关节炎患者PBMCs中IL-27及Blimp1 mRNA表达明显上调,并且与疾病的活动有关,其可能共同参与疾病的进展过程。