Wnt通路抑制剂XAV-939对牙髓干细胞成脂分化的影响

目的通过体外实验探讨Wnt通路抑制剂XAV-939对牙髓干细胞增殖及成脂分化的影响。方法酶消化法培养牙髓干细胞,鉴定后采用CCK8试剂盒检测XAV-939对牙髓干细胞增殖的影响,油红O染色检测XAV-939对牙髓干细胞成脂分化的影响,q RT-PCR检测成脂分化过程中,XAV-939对Wnt通路相关基因糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK3β)和β-catenin以及成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(peroxisome proliferator activated receptor-γ2,PPARγ2)和CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)的影响。结果牙髓干细胞成脂诱导14 d后,XAV-939上调GSK3β、PPARγ2和C/EBPα的表达,同时下调β-catenin的表达。结论 XAV-939可以通过抑制Wnt通路促进牙髓干细胞的成脂分化。

XAV-939对三阴性乳腺癌抑制的作用

目的：探索XAV-939对三阴性乳腺癌的生长产生抑制作用及其机制。方法：体外检测XAV-939对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用，并检测Axin 1、Axin 2、β-catenin和p-β-catenin蛋白的表达以及VEGF-A的分泌水平。在体观察XAV-939对裸鼠移植瘤的体积和瘤重变化情况，并检测肿瘤组织中Axin 1、Axin 2、β-catenin和p-β-catenin蛋白的表达，以及VEGF表达、微血管密度、增殖指数及凋亡指数。结果：XAV-939可以抑制MDA-MB-231细胞的生长，其抑制作用呈浓度依赖型；同时XAV-939抑制了MDA-MB-231细胞分泌VEGF-A的能力。体内实验中，XAV-939可以明显抑制肿瘤组织生长；肿瘤组织的VEGF表达量下降，微血管密度下降；肿瘤组织的凋亡指数显著上升；增殖指数没有明显变化。体外体内实验均显示XAV-939处理组的Axin1、Axin2和p-β-catenin表达量明显上升而β-catenin显著下降。结论：XAV-939可以通过抑制Wnt／β-catenin通路在体内外抑制三阴性乳腺癌细胞／组织的增殖。

芒果苷通过调控Wnt/β-catenin信号通路对大鼠髋部骨折愈合的作用

目的:探讨芒果苷(MGF)通过调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对大鼠髋部骨折愈合的作用,阐明其相关作用机制。方法:建立SD大鼠髋部骨折模型,造模成功后将大鼠分为模型组、MGF组和MGF+XAV-939(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)组,另设假手术组,每组15只。术后第1天各组大鼠按分组方法给予MGF或XAV-939干预,每2 d给药1次,共14次。采用Lane-Sandhu X射线评分法评估术后第2和4周各组大鼠骨折愈合情况,显微CT(Micro CT)检测各组大鼠骨显微结构参数骨体积(BV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨体积分数(BV/TV)和骨小梁厚度(Tb.Th),HE染色观察各组大鼠骨痂组织形态表现,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中成骨标志物骨碱性磷酸酶(BALP)和Ⅰ型前胶原N端前肽(PINP)及破骨标志物抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)和Ⅰ型胶原羧基末端肽(CTX)水平,Western blotting法检测各组大鼠骨痂组织中β-catenin、Runt相关转录因子2(Runx2)和骨形态发生蛋白2(BMP-2)蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠骨折后第2和4周骨折线清晰,骨折部位存在较多纤维组织,未发现骨性骨痂,Lane-Sandhu X射线评分及骨显微结构参数BV、Tb.N、BV/TV和Tb.Th均降低(P<0.05),血清中BALP水平降低(P<0.05),PINP、TRACP-5b和CTX水平升高(P<0.05),骨痂组织中β-catenin、Runx2和BMP-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,MGF组大鼠骨折后第2周新生骨痂明显增多,第4周骨折线基本消失,骨折愈合较快,骨折部位大量纤维组织被骨组织替代,骨性骨痂量明显增多,Lane-Sandhu X射线评分及骨显微结构参数BV、Tb.N、BV/TV和Tb.Th均升高(P<0.05),血清中BALP水平升高(P<0.05),PINP、TRACP-5b和CTX水平降低(P<0.05),骨痂组织中β-catenin、Runx2和BMP-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。与MGF组比较,MGF+XAV-939组大鼠骨折后第2和4周骨折部位仅有少量新生骨痂,髓腔未形成,Lane-Sandhu X射线评分及骨显微结构参数BV、Tb.N、BV/TV和Tb.Th均降低(P<0.05),血清中BALP水平降低(P<0.05),PINP、TRACP-5b和CTX水平升高(P<0.05),骨痂组织中β-catenin、Runx2和BMP-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:MGF可促进大鼠髋部骨折愈合,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

深层海水促进糖尿病模型小鼠创面愈合:激活Wnt/β-catenin通路的机制研究

背景:研究证实深层海水可通过激活AMPK通路下调小鼠对糖的摄入,进而有效缓解高脂肪饮食诱导的小鼠糖尿病进程,然而目前有关深层海水在糖尿病创伤难愈合中的作用研究鲜有报道。目的:探讨深层海水对糖尿病小鼠创面的修复作用机制。方法:取健康昆明种雄性小鼠48只(购于昆明医科大学实验动物中心),通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型;饲养14 d后建立糖尿病小鼠背部创面模型,随机分4组处理,其中3组分别喂食纯净水(对照组)、自来水(自来水组)、深层海水(深层海水组),抑制剂组喂食深层海水的同时股静脉注射Wnt/β-catenin抑制剂XAV-939。创面造模后第3,7,10天,检测对照组、自来水组、深层海水组小鼠血糖和体质量、创面愈合及创面组织中β-catenin、GSK-3β和Rspo-3蛋白表达,观察对照组、深层海水组、抑制剂组创面愈合率、创面组织形态变化及血清中丙二醛、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平。实验获得中国科学院昆明动物研究所实验动物伦理委员会批准(批准号:KPRC-2017091)。结果与结论:(1)深层海水对糖尿病小鼠小鼠体质量和血糖值无影响;(2)深层海水组不同时间点的创面愈合率明显高于自来水组和对照组(P均<0.01);(3)Western blotting检测显示与对照组和自来水组比较,深层海水组创面组织中β-catenin、Rspo-3蛋白表达升高,GSK-3β蛋白表达下降;(4)苏木精-伊红染色显示,与对照组比较,深层海水组新生肉芽组织中血管内皮细胞和新生毛细血管增多,炎性细胞浸润较少,成纤维细胞增生明显;抑制剂组与对照组病理表现无明显差异(P> 0.05);深层海水组不同时间点的创面愈合率明显高于自来水组和抑制剂组(P均<0.01);(5)与对照组比较,深层海水组超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性升高(P <0.01,P <0.001),丙二醛浓度下降(P <0.05,P <0.01);抑制剂组3指标水平与对照组比较无明显差异(P> 0.05);(6)结果表明,深层海水通过激活Wnt/β-catenin通路促进糖尿病小鼠创面的愈合。

Wnt/β-catenin通路在FSHβ增强BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的作用研究

目的探讨Wnt/β-catenin通路在促卵泡激素β亚基(follicle-stimulating hormoneβ-subunit,FSHβ)增强骨形成蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的作用。方法C3H10T1/2细胞为研究对象,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色方法检测Ad-GFP对照组、Ad-FSHβ实验组、Ad-BMP9实验组、Ad-BMP9+Ad-FSHβ实验组或Ad-BMP9+Ad-FSHβ+XAV-939实验组等各研究组ALP表达;茜素红S染色(alizarin red s,ARS)方法检测各研究组钙盐小节沉积;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)技术检测各研究组cyclin D1转录。结果单独的Ad-FSHβ实验组骨形成早、晚期标志物(ALP和钙盐小结)与Ad-GFP对照组相比无显著差异;单独的Ad-BMP9实验组中,两者的表达均高于Ad-GFP对照组;Ad-FSHβ与Ad-BMP9联合实验组的表达量较Ad-BMP9实验组显著增加。检测各研究组Wnt/β-catenin通路的靶基因cyclin D1的转录,与Ad-GFP对照组相比,Ad-FSHβ实验组的表达无显著变化,Ad-BMP9实验组的表达水平显著升高(P<0.01),Ad-FSHβ与Ad-BMP9联合实验组cyclin D1 mRNA表达量显著高于Ad-BMP9实验组(P<0.01)。Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV-939处理后,Ad-BMP9与XAV-939联合实验组cyclin D1 mRNA的水平较Ad-BMP9实验组下降(P<0.01),Ad-FSHβ、Ad-BMP9与XAV-939三者联合实验组水平也较Ad-FSHβ与Ad-BMP9联合实验组下降(P<0.05)。ALP的表达呈现出与cyclin D1转录相似的变化趋势。结论Wnt/β-catenin通路可能在促卵泡激素β亚基增强骨形成蛋白9诱导MSCs成骨分化中起重要作用。

XAV939对卵巢癌细胞增殖的抑制作用

目的观察XAV939对卵巢癌细胞株OVCAR3增殖的作用。方法采用MTT法检测XAV939对卵巢癌细胞增殖的抑制作用,用流式细胞技术检测卵巢癌细胞株OVCAR3细胞周期和凋亡,Western blotting法检测Cyclin D1、Bcl-2的表达以及PARP剪切片段。结果 XAV939对卵巢癌细胞株增殖的抑制呈现浓度依赖性和时间依赖性,细胞周期检测表现为G1期阻滞,凋亡检测显示凋亡率增加。不同浓度的XAV939处理组的卵巢癌细胞Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平下降,PARP剪切片段增多。结论 XAV939可以抑制卵巢癌细胞株OVCAR3的增殖。

两种Wnt通路抑制剂对牙周膜干细胞作用的比较研究

目的:本实验主要探讨Wnt通路抑制剂XAV-939相比DKK1在牙周膜干细胞增殖及矿化中的作用差异。方法:酶消化法培养牙周膜干细胞,鉴定后,用CCK8试剂盒检测XAV-939和DKK1对牙周膜干细胞增殖能力的影响,茜素红染色及定量检测XAV-939和DKK1对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响,q RT-PCR检测DKK1和XAV-939对牙周膜干细胞Wnt通路相关基因GSK-3β和β-catenin及成骨分化相关基因ALP,DSPP,BSP,OCN,RUNX-2的影响。结果:XAV-939和DKK1都可以通过抑制Wnt通路来抑制牙周膜干细胞的增殖及成骨分化。当没有外源性Wnt蛋白刺激时,XAV-939作为Wnt通路抑制剂的抑制作用要强于DKK1,而加入外源性Wnt蛋白后,XAV-939与DKK1的作用效果相当。结论:XAV-939对比DKK1,具有更为广泛而稳定的抑制效果。XAV-939可以作为高效的Wnt通路抑制剂应用于未来关于牙周膜干细胞和Wnt通路相关实验研究中。

一种靶向Wnt/β-catenin通路的光动力超分子纳米药物的制备

目的:以维替泊芬(VER)和XAV-939为模型药物,制备一种靶向Wnt/β-catenin通路的光动力超分子纳米药物(VER/XAV-939 SMN)。方法:以粒径、多分散指数(PDI)、包封率(EE)为评价指标,优化VER/XAV-939质量比、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-MPEG2000)/胆固醇(Cholesterol)质量比、稳定剂(DSPE-MPEG2000+Cholesterol)/药物(VER+XAV-93)质量比、有机相(DMF)体积、搅拌温度、搅拌速度及搅拌时间。对优化处方和工艺制得的纳米粒进行质量评价,包括粒径、PDI、Zeta电位、EE、载药量(DL)、透射电镜、光谱分析、纳米粒形成机制、纳米粒稳定性等。结果:初步确定了VER/XAV-939 SMN较优的处方和工艺,VER/XAV-939质量比1∶1,DSPE-MPEG2000/Cholesterol质量比2∶1,稳定剂/药物质量比15∶1,DMF体积300μL,搅拌温度20℃,搅拌速度600 r·min-1,搅拌时间60 min。优化处方及工艺制得的纳米粒粒径为(86.04±1.35)nm, PDI为0.11±0.02,Zeta电位为(-44.39±1.69)mV,EE为(97.61±1.25)%,DL为(6.13±0.13)%;纳米粒呈球状,不粘连;VER/XAV-939 SMN具有VER和XAV-939的特征紫外吸收峰;VER/XAV-939 SMN的荧光强度弱于游离VER;VER/XAV-939 SMN形成的主要作用力是疏水相互作用;VER/XAV-939 SMN在PBS中具有较好的稳定性。结论:该文基于自组装策略构建了VER、XAV-939纳米递送体系,该体系有望实现双通道免疫刺激,增强免疫检查点抑制剂疗效。

微小非编码RNA-155对大鼠肝纤维化的影响及其可能性机制

目的:研究微小RNA(microRNA,miRNA)-155及其靶向蛋白基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)对大鼠肝纤维化的影响。方法:健康SD大鼠鞘内注射miRNA-155建立大鼠肝纤维化损伤模型,并通ELISA试剂盒检测大鼠血清中Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)的表达变化。应用Wnt/β-Catenin通路抑制剂XAV-939研究Wnt/β-Catenin通路在大鼠肝纤维化中的作用,通过qPCR和Western blot法分别检测肝脏组织中MMP-9 mRNA和蛋白的表达变化。结果:鞘内注射miRNA-1554周后,可观察到血清COL-Ⅳ含量显著增加,而腹腔注射XAV-939抑制剂组大鼠COL-Ⅳ未明显变化。qPCR和Western blot结果显示,肝脏组织中MMP-9 mRNA和蛋白的表达均明显上调。结论:鞘内注射miRNA-155可能通过介导MMP-9表达上调导致大鼠肝纤维化损伤,Wnt/β-Catenin通路可参与miRNA-155所致肝纤维化损伤过程。